史悦
- 作品数：35 被引量：118H指数：7
- 供职机构：清华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程理学更多>>
- 诺卡氏菌腈水合酶基因在重组毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2005年
- 为从基因水平上改造腈水合酶,进行了诺卡氏菌腈水合酶基因的外源表达研究。在重组大肠杆菌表达系统内,腈水合酶的α亚基几乎不能正常表达,在重组E.coliBL21(DE3)(pET32aNHBAX)中,腈水合酶活性仅为0.04Umg。构建重组毕赤酵母表达质粒pPIC3.5kNHBAX,采用电穿孔转化法将其转入宿主菌P.pastorisGS115中,经过菌株培养和腈水合酶的诱导表达,筛选获得了优选菌株P.pastorisNH4。对P.pastorisNH4的细胞培养和腈水合酶的诱导表达条件进行优化,结果表明,重组腈水合酶在毕赤酵母中的表达水平可以达到0.52Umg,但不能稳定积累。
- 于慧敏史悦田卓玲温斐沈忠耀
- 关键词：诺卡氏菌腈水合酶大肠杆菌毕赤酵母
- 游离细胞膜生物反应器法与固定化细胞法在丙烯酰胺微生物转化中的比较被引量：6
- 2003年
- 研究和介绍了一种新的分离方法———游离细胞法 ,并用膜生物反应器分离细胞和产品 ,使其在丙烯酰胺微生物转化中得到了成功的应用。比较了它和固定细胞法的生产工艺、生产效率、产品质量以及生产成本等因素。研究表明 ,在丙烯酰胺微生物转化中 ,游离细胞法优于固定化细胞法。
- 孙旭东史悦于慧敏沈忠耀
- 关键词：丙烯酰胺固定化细胞法膜生物反应器
- 基因工程菌株表达腈水合酶生产丙烯酰胺的研究
- 史悦
- 关键词：丙烯酰胺腈水合酶
- 微生物法生产丙烯酰胺的研究(Ⅱ)——腈水合酶催化反应动力学与失活动力学被引量：22
- 2002年
- 在以丙烯腈为原料 ,微生物转化生产丙烯酰胺的过程中 ,酶催化反应是过程的关键。为了了解酶催化的动力学 ,本研究以自由细胞的酶为催化剂 ,进行了腈水合酶的反应动力学和失活动力学的研究。首先研究了菌体浓度、温度、pH值、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度等对腈水合酶催化反应速度的影响。结果表明 ,在这些因素中 ,温度和丙烯酰胺浓度是最主要的影响因素。 2 8℃时酶活为 5 6 5 9u mL(菌液 ) ,在 5℃时的反应速率仅为 2 8℃时的11 72 % ,相应的表观酶活为 6 6 3u mL(菌液 )。而在丙烯酰胺 45 %浓度条件下的酶活大约只有丙烯酰胺 5 %浓度下的酶活的 1 2。经过对不同温度下的反应速度的研究 ,得到腈水合酶水合反应的活化能为 6 5 5 7kJ·mol- 1 。本文进一步研究了自由细胞状态下 ,菌体浓度、pH值、温度、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度对腈水合酶失活的影响 ,得到了失活动力学。结果表明 ,在这些因素中 ,对酶失活影响的最主要因素还是温度和丙烯酰胺浓度。尤其当丙烯酰胺浓度到达 35 %时 ,酶活下降得很快 ,在 5 5h后 ,酶活几乎为零。而在丙烯酰胺浓度为 10 %的情况下 ,5 5h的酶活仍然还存在约 5 0 %。试验结果还表明 ,丙烯腈对酶的稳定性的影响很小。经过数据处理 ,得到的 2 8℃的酶失活速率常数为 5℃下的 2 1
- 陈跖孙旭东史悦沈忠耀赵建勋孙小颖
- 关键词：丙烯酰胺丙烯腈腈水合酶失活动力学微生物法
- 诺卡氏菌腈水合酶突变基因在重组大肠杆菌中的高活性表达被引量：2
- 2007年
- 为了提高腈水合酶基因的重组表达水平,提出了3种基因策略:在重组大肠杆菌中共表达激活子序列、在重组毕赤酵母中表达以及对α亚基的起始密码子进行定点突变。结果表明:对α亚基的起始密码子进行定点突变的基因策略为最佳方案,突变后的腈水合酶基因在重组E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)中表达时,腈水合酶的比酶活(以干菌质量计)提高到51 U/mg。进一步以pET28a为载体,插入突变后的腈水合酶基因,构建重组菌株E.coli BL21(DE3)/pETNHM。对优选菌株进行培养条件和诱导条件的优化,腈水合酶的最高比酶活达到450 U/mg。
- 史悦于慧敏罗晖田卓玲沈忠耀
- 关键词：腈水合酶重组大肠杆菌重组毕赤酵母定点突变
- 六级连续化膜生物反应工艺在丙烯酰胺生产中的应用研究
- ＜正＞ 在丙烯酰胺微生物转化的工业化应用中,基本上采用了固定化细胞的方法,一般采取简单的批式反应方式。固定化细胞催化工艺存在着不少问题,如酶活力损失严重、工艺过程复杂及后处理要求高等。许多研究者已经开始着眼于用游离细胞代...
- 孙旭东于慧敏史悦沈忠耀
- 文献传递
- 诺卡氏菌腈水合酶基因在重组大肠杆菌中的活性表达
- ＜正＞ 腈水合酶（NHase）以其温和的反应条件、高选择性和高效性,在酰胺、羧酸及其衍生物的合成中具有重要的应用价值。一株工业上应用于生物转化丙烯腈生产丙烯酰胺的诺卡氏菌株（Nocardia sp.）显示出了高水平的酶活...
- 史悦于慧敏赵晖田卓玲沈忠耀
- 文献传递
- 产腈水合酶重组大肠杆菌的质粒稳定性研究被引量：16
- 2005年
- 成功构建了腈水合酶(nitrile hydratase,NHase)高表达的重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pETNHM(Kanr),研究了重组质粒pETNHM在重组菌株中的质粒稳定性。结果表明,pETNHM具有较好的结构稳定性,连续传代60代后质粒的基因序列没有明显缺失,且能够正常表达腈水合酶。pETNHM具有分离不稳定性,在无抗生素选择压力下,连续传代48代后质粒丢失的无质粒细胞开始出现。琼脂糖凝胶电泳定量分析表明,2/3的质粒pETNHM以二聚体形式存在,导致质粒拷贝数的下降。进一步研究表明,重组细胞的连续高速分裂及腈水合酶的高表达也会造成质粒拷贝数的下降,从而降低其分离稳定性。反之,重组菌株相对于宿主菌株的较高比生长速率有利于保持含质粒细胞的生长优势,卡那霉素的选择压力则能够保证质粒的稳定遗传。
- 史悦于慧敏田卓玲沈忠耀
- 关键词：腈水合酶质粒稳定性质粒拷贝数重组大肠杆菌琼脂糖凝胶电泳重组菌株
- 丙烯酰胺微生物转化过程和反应器形式的研究进展被引量：5
- 2002年
- 回顾了近年来在丙烯酰胺微生物转化过程中反应器形式的研究进展 ,并对研究的发展方向提出了一些设想和展望。
- 孙旭东陈跖史悦沈忠耀
- 关键词：丙烯酰胺微生物转化
- 产PHB三基因重组大肠杆菌的分批发酵研究
- 新建产PHB重组菌株VG1(pTU14)同时携带透明颤菌血红蛋白基因(vgb)、λ噬菌体裂解基因(S-RRz)和PHB合成基因(phbCAB).对VG1(pTU14)进行上罐分批发酵培养,研究pH调节方式和初糖浓度对菌体...
- 于慧敏张延平史悦沈忠耀
- 关键词：透明颤菌血红蛋白基因聚Β-羟基丁酸酯发酵重组大肠杆菌
- 文献传递
