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卢明倩: 作品数：22 被引量：44H指数：5; 供职机构：广西科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>; 相关领域：生物学理学农业科学医药卫生更多>>

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褐藻胶裂解酶的基因克隆及表达条件优化被引量：2: 2017年; 采用大肠杆菌(Escherichia coli)表达海洋弧菌(Vibrio sp.)X511的褐藻胶裂解酶基因,以实现对该酶的大量制备及酶学性质研究。通过序列分析,预测该酶的前20个氨基酸为信号肽,去除信号肽后的蛋白质分子质量约为30 254.28 Da,等电点8.75,分子式为C1368H2100N364O401S6,对应的基因序列命名为alg1987。按如下方案构建重组菌:设计特异性核酸引物,PCR扩增得到alg1987;将重组质粒p ET-30(a)-alg1987导入大肠杆菌Trans5α进行测序;提取阳性p ET-30(a)-alg1987质粒导入大肠杆菌BL21,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测诱导后的重组菌胞液上清,发现异源表达的褐藻胶裂解酶分子质量大小与预测值相近。对重组菌中的褐藻胶裂解酶进行表达条件优化,结果显示,最适参数为诱导温度16℃,诱导时间16 h,诱导剂IPTG浓度0.8 mmol/L。; 许超黄桂媛王巧贞卢明倩张荣灿廖威张云开黄庶识; 关键词：褐藻胶裂解酶基因克隆

植物根尖细胞离体线粒体的激光镊子拉曼光谱研究: 线粒体对维持细胞能量代谢和正常功能活动起重要作用.研究小组应用激光光镊拉曼光谱(LTRS)系统,研究水稻和蚕豆根尖细胞离体单个线粒体的RAMAN光谱特征,以及钙离子胁迫下蚕豆根尖细胞线粒体光谱的变化.结果显示,水稻和蚕豆...; 卢明倩王巧贞廖威陈丽梅黄庶识; 关键词：MITOCHONDRIA; 文献传递网络资源链接

基于比较转录组分析海洋弧菌X511的褐藻胶代谢途径: 2018年; 【目的】从北海涠洲岛海域腐烂的马尾藻中分离得到的海洋弧菌(Vibrio X511)具有较强的利用褐藻胶能力,本文利用转录组测序的方法以研究弧菌X511的褐藻胶代谢途径。【方法】采用Illumina Hi Seq2500测序平台对菌株在褐藻胶及葡萄糖培养下的转录组进行测序;比较和分析差异转录本,利用荧光定量PCR验证测序结果;采用GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)对差异转录本进行功能和Pathway注释。【结果】经比较发现,菌株在褐藻胶培养下相对于葡萄糖的培养共有2024个差异表达基因,其中1066个基因上调,958个基因下调;某些普遍存在于代谢途径中的基因在不同培养条件下也存在差异表达;海洋弧菌X511中涉及褐藻胶利用的所有基因以及合成乙醇的关键基因其转录量均有一定程度的上调;此外,通过分析发现该菌株具有独特的褐藻胶利用方式,其中的一个代谢过程尚未在弧菌中被报道。【结论】成功解析了海洋弧菌X511的褐藻胶代谢途径,丰富了生物方法降解褐藻胶的研究,为大型海藻生物质能源的研究提供有价值的数据支持。; 许超熊亚茹黄桂媛王巧贞卢明倩张荣灿廖威张云开黄庶识; 关键词：转录组荧光定量基因功能褐藻胶代谢途径

重组大肠杆菌表达可溶性蛋白和包涵体过程的拉曼光谱实时分析被引量：10: 2014年; 应用激光镊子拉曼光谱系统(LTRS),实时分析不同温度下蚕豆14-3-3b可溶性蛋白和包涵体蛋白在重组大肠杆菌细胞中的动态表达水平。结果显示,14-3-3b可溶性蛋白与包涵体蛋白有明显不同的拉曼光谱特征峰,反映出两者在主链和侧链构象上的差异性;在28℃时,包涵体蛋白特征峰900,1033,1328,1415和1446cm-1强度随着诱导时间延长而增加的幅度,明显大于可溶性蛋白的特征峰763,1002,1363,1451和1665cm-1的增加幅度,16℃时诱导表达结果正好相反,可溶性蛋白的特征峰增强幅度显著大于包涵体蛋白,说明28℃诱导培养条件下,重组菌蛋白质过量表达以形成包涵体为主,16℃较低温度条件下以形成可溶性蛋白为主,正确折叠蛋白增加的信息可以通过光谱变化反映出来,在该温度下,蛋白质的正确折叠有利于细胞形成稳定的可溶性蛋白;另外,重组菌在相对低温条件下更多地表达含胱氨酸的非重组蛋白,可能与蛋白质折叠相关。LTRS技术可以在单个细胞水平上对大肠杆菌细胞过量表达可溶性蛋白和包涵体蛋白过程进行无损害、无标记的实时分析。; 黄庶识卢明倩李冰周冰陈丽梅; 关键词：拉曼光谱单细胞分析重组蛋白表达可溶性蛋白包涵体

铝胁迫蚕豆根尖细胞离体线粒体的拉曼光谱研究: 黄庶识卢明倩王巧贞陈丽梅

乙酸胁迫酵母细胞凋亡过程中单个线粒体损伤的拉曼光谱分析: 2015年; 应用激光光镊拉曼光谱技术(LTRS)作为一种非入侵分析线粒体的工具,结合氧电极法、紫外分光光度计法,研究乙酸胁迫酵母细胞后提取的线粒体,以及直接胁迫正常酵母细胞的离体线粒体的拉曼光谱。结果显示,乙酸胁迫酵母细胞后提取的线粒体的拉曼光谱,归属于核酸的谱峰(1081和1301 cm!1)、蛋白质的谱峰(872,1445,1604和1657 cm!1)、脂类的谱峰(1125,1301,1445和1657 cm!1)、Cyt c的特征峰(750和1125 cm!1)、线粒体呼吸特征峰(1604 cm!1),都随着诱导程度的加深而降低,与常规法测定的指标呼吸率,磷氧比,细胞色素C含量的降低,MDA含量的升高的变化趋势相似;乙酸直接胁迫线粒体的拉曼光谱,归属于核酸的谱峰(1081和1301 cm!1),蛋白质的谱峰(872,1445,1604和1657 cm!1),脂类的谱峰(1125,1301,1445和1657 cm!1),Cyt c的特征峰(750和1125 cm!1),线粒体呼吸特征峰(1604 cm!1),都随着诱导程度的加深而降低,与常规法测定的指标呼吸率、磷氧比、细胞色素C含量的降低,MDA含量的升高的变化趋势相似。结果表明,乙酸胁迫细胞过程中,乙酸进到细胞内可能直接作用于线粒体,引起线粒体内物质的释放,导致依赖于线粒体途径的细胞凋亡。; 李冰卢明倩王巧贞石贵玉廖威黄庶识; 关键词：拉曼光谱酵母细胞线粒体凋亡

植物根尖细胞离体线粒体的激光镊子拉曼光谱研究: 线粒体对维持细胞能量代谢和正常功能活动起重要作用。研究小组应用激光光镊拉曼光谱(LTRS)系统,研究水稻和蚕豆根尖细胞离体单个线粒体的Raman光谱特征,以及钙离子胁迫下蚕豆根尖细胞线粒体光谱的变化。结果显示,水稻和蚕豆...; 卢明倩王巧贞廖威陈丽梅黄庶识; 关键词：植物细胞线粒体拉曼光谱; 文献传递

强碱胁迫枯草芽孢杆菌芽孢致死的拉曼光谱研究被引量：4: 2013年; 应用单细胞拉曼分析技术结合PCA方法,以枯草芽孢杆菌芽孢为对象,以强碱为诱导剂实时记录芽孢生理变化过程,探究芽孢在强碱胁迫下的致死机制。实验表明,枯草芽孢杆菌芽孢和其萌发后芽孢在一定范围均有一定的耐受强碱能力,但萌发后芽孢的耐受力明显下降,主要原因是释放了维持其抗性及稳定性的特有Ca2+-DPA的保护;芽胞受强碱胁迫也会有少量Ca2+-DPA释放过程的行为特征,但通过分析所记录的光谱数据结果表明,其释放行为不同于由L-丙氨酸引起的芽孢的正常Ca2+-DPA释放过程。通过PCA比较分析强碱胁迫芽孢和萌发后芽孢Ca2+-DPA释放过程,主要是强碱破坏芽孢膜结构,膜损伤后强碱比较容易进到芽孢内部从而破坏蛋白质的主链结构链及核酸;芽孢膜通道也可能受到强碱的伤害,造成微量Ca2+-DPA的释放。; 董蓉卢明倩李锋石贵玉黄庶识; 关键词：芽胞强碱拉曼光谱

拉曼光谱技术研究铝胁迫下的土生隐球酵母细胞凋亡被引量：6: 2014年; 运用激光镊子拉曼光谱技术(LTRS)研究铝胁迫下土生隐球酵母细胞和线粒体拉曼光谱变化。细胞和线粒体中与核酸、蛋白质和脂类相关的特征峰强度随着铝处理浓度和处理时间的增加而逐渐降低,表明细胞凋亡过程中细胞和线粒体内的核酸、蛋白质和脂类生物大分子逐渐减少。线粒体内与细胞色素c(Cyt c)相关的特征峰强度随铝处理浓度增大和处理时间的延长而显著降低,说明线粒体中的细胞色素c释放到线粒体外。线粒体的呼吸峰随着铝浓度的增加和处理时间的延长而降低,说明线粒体的活性不断减弱,能量代谢受阻。因此,拉曼光谱实时监测了铝胁迫细胞凋亡的动态过程及其线粒体的生理生化变化过程,并且揭示了铝诱导土生隐球酵母凋亡过程中线粒体内细胞色素c的释放行为,这些结果有助于了解酸性土壤中铝对生物的毒害机理。; 李金金卢明倩张晶晶黄庶识陈丽梅年洪娟; 关键词：光谱学铝胁迫细胞凋亡线粒体细胞色素C

Shewanella haliotis BP-1海藻酸裂解酶基因的克隆表达: 2016年; 【目的】了解海洋细菌Shewanella haliotis B P-1中海藻酸裂解酶降解海藻酸钠的生物活性。【方法】应用基因克隆和大肠杆菌异源表达技术,过量表达海藻酸裂解酶,将粗酶液通过 DEAE Sepharose FF柱分离纯化后检测其酶活性。【结果】从S.haliotis BP-1菌株的基因组DNA中克隆得到一个大小为2157 bp的海藻酸裂解酶基因Alg17S ,该基因编码的海藻酸裂解酶 Alg17S属于PL17家族的蛋白,大小为79726 Da,其中包括N端26个氨基酸的信号肽,与Saccharophagus degradans 2-40菌株产生的海藻酸裂解酶 Alg17C 具有高度同源性,相似性为52%。经纯化后获得的重组酶 Alg17S和△snAlg17S（N端不含26个氨基酸的信号肽）均具有降解海藻酸钠的活性,但△snAlg17S对海藻酸钠的催化活性比 Alg17S高,其酶比活力高达9635 U/mg。【结论】重组海藻酸裂解酶△snAlg17S兼具高表达水平及高酶活性,是进一步研究海藻酸盐糖化和生物燃料生产的潜在的优势酶。; 黄桂媛温顺华李锋卢明倩王巧贞廖威黄庶识; 关键词：克隆表达酶活性测定 SHEWANELLA HALIOTIS

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