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刘慎沛: 作品数：28 被引量：102H指数：5; 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项湖北省科技攻关计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>

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HAX1和EGFP共表达重组腺病毒载体的构建、鉴定被引量：1: 2010年; 目的构建和鉴定HAX1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术，将目的基因HAX1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒pAdTrack—CMV中，并转化于大肠埃希菌DH5a；筛选出重组质粒pAdTrack—CMV—HAX1，并在BJ5183细菌中与pAdEasy-1质粒进行同源重组，产生重组腺病毒载体；用lipofectamine将其转染HEK293细胞，包装携带全长HAX1的重组复制缺陷型腺病毒pad—HAX1-EGFP，酶切和序列测定鉴定；用制备好的Ad—HAX1-EGFP感染HEK293细胞，流式细胞术检测其感染效率，RT—PCR、Western印迹鉴定外源基因HAX1的表达。BrdU检测感染了Ad—HAX1-EGFP的HEK293细胞增殖情况。结果pAdTrack—CMV—HAX1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—HAX1质粒与pAdEasy-1质粒同源重组后与预期结果相符。构建好的Ad—HAX1-EGFP能有效感染HEK293细胞；外源基因能在239细胞中有效表达。HAX1高表达的HEK293细胞其增殖率得以提高。结论成功构建了表达HAX1和EGFP共表达的重组腺病毒载体，HAX1能够促进结肠癌细胞HEK293细胞的增殖。; 李小兰徐向上李兆明王桂华魏欣罗学来刘慎沛肖徽陶德定胡俊波龚建平; 关键词：重组腺病毒增殖

乙型肝炎表面抗原主要亲水区Ⅱ的抗原性被引量：2: 2007年; 目的研究HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸变异对HBsAg抗原性的影响。方法定点突变HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸对应的s基因（P120T、C121S、K122I和T123N），构建4个真核表达重组质粒。用重组质粒和表达G145RHBsAg质粒体外瞬时转染HepG2细胞。4种抗体和7种国产HBsAgELISA诊断试剂盒检测转染细胞上清液和细胞裂解液中变异HBsAg的免疫反应性，免疫荧光检测单克隆抗体与转染细胞内变异HBsAg的免疫反应性。结果成功构建了表达HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸变异的重组质粒，P120T、C121S、K122I和T123N变异HBsAg的免疫反应性比野生HBsAg低，T123N变异导致HBsAg存在分泌障碍。结论HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸对维持HBsAg的空间构象和抗原性具有重要作用。; 田拥军张正茂夏昶刘慎沛余源黄红平杨燕陆蒙吉杨东亮; 关键词：乙型抗原性

淋巴细胞经TCR－CD3活化增殖作用的分析被引量：4: 1995年; 本文探讨了抗ＣＤ３单抗诱导的淋巴细胞活化增殖及有关影响因素。实验结果表明：①淋巴细胞内钙升高是淋巴细胞活化增殖的重要条件，ＣＤ３ＭｃＡｂ引起的早期胞浆游离钙迅速升高主要由内质网释放钙离子所致，而淋巴细胞增殖不仅需要细胞内钙释放，还需要细胞外钙内流；②ＧＴＰ结合蛋白是淋巴细胞激活过程的一重要环节，经Ｇ蛋白作用物霍乱毒素作用后，淋巴细胞ＤＮＡ合成显著降低；③新霉素和ＰＳＳ可抑制ＰＬＣ和ＰｋＣ的活性，对淋巴细胞ＮＤＡ合成造成剂量依赖性抑制作用。此外，抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导的淋巴细胞ＤＮＡ合成需要辅佐细胞的存在，高度纯化的Ｔ细胞对ＣＤ３ＭｃＡｂ的刺激不发生增殖反应。; 李鸣杨敬沈关心张茜刘忠北刘慎沛叶维新; 关键词：G蛋白胞浆游离钙

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对乙型肝炎病毒复制的抑制作用被引量：1: 2012年; 目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG2细胞用17-AAG预处理2 h,同时用TGFβ或TβR抑制剂SB431542作用后,将HBV复制型质粒HBV1.3转染细胞,第4 d提取HBV核心颗粒,Southern Blot检测HBV复制中间体,ELISA检测上清HBsAg的表达。结果 17-AAG能够下调HepG2细胞PAI-1的表达,HepG2细胞内HBV复制中间体表达水平明显降低,HBsAg的表达亦受到抑制,但上调或阻断TGFβ信号通路对HBV复制影响不明显。结论 HSP90参与肝细胞内TGFβ信号通路的活化,其抑制剂17-AAG能够抑制HBV的复制与蛋白表达,但该抑制作用与TGFβ信号通路活化无关。; 柯晓煜王秋景余源刘慎沛张春燕陈妍杨燕杨东亮; 关键词：转化生长因子Β

^（131）I标记抗CEA单抗膀胱内给药在膀胱癌诊断中的应用被引量：1: 1995年; ^（１３１）Ｉ标记抗ＣＥＡ单抗膀胱内给药在膀胱癌诊断中的应用潘铁军，袁建民，马洪济，熊旭林，鲁功成，邵明忠，张齐钧，刘慎沛，崔武仁，刘忠北，张永学泌尿系统肿瘤中膀胱癌的发病率占３０％，对其作出准确的定性、定位诊断．对于膀胱癌病人的治疗及预后具有重要意?..; 潘铁军袁建民马洪济熊旭林鲁功成邵明忠张齐钧刘慎沛崔武仁刘忠北张永学; 关键词：碘膀胱肿瘤抗CEA 单克隆抗体

噬菌体phi29 pRNA载体在RNA干扰中的初步应用研究: 2007年; Gene-silencing siRNA has shown great promise for the treatment of genetic diseases,cancers,and viral infections,but its therapeutic value has been hindered by the lack of an efficient and safe in vivo delivery system to target specific cells.The motor pRNA of phi29 has a strong tendency to form dimers,trimers and hexamers by interaction of interlocking right and left hand loops.This unique feature makes pRNA an ideal vector for the delivery of multiple therapeutic RNAs.Toxicity of pRNA was detected by transfection of 8 pRNA in HeLa cells.A pRNA-based vector was designed to carry siRNAs to inhibit GFP or HBV surface gene expression.Silence effects on siRNA against expression of GFP or HBV surface gene were detected in HeLa cells.Viral replicative intermediates were detected by Southern blotting.The results of toxicity study showed there was no toxicity of pRNA to cultured monolayer cells.The siRNA connected with pRNA can inhibit GFP or HBV surface gene expression in HeLa cells and inhibit HBV replication in HepG2 cells.These data suggest that pRNA can be used as a vector for imparting stability to siRNA in vitro.; 田拥军张正茂杨燕覃莉孟忠吉刘慎沛杨东亮; 关键词：噬菌体 PRNA RNA干扰乙型肝炎病毒

表达HBsAg特异性siRNA的重组腺相关病毒载体的构建被引量：6: 2010年; 目的构建表达针对HBsAg小发卡RNA(shRNA)的重组腺相关病毒载体,以观察该病毒在体外对HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法将表达针对HBsAg的shRNA定向克隆到pAAV/U6-hrGFP质粒中,获得重组表达质粒(pAAV-shHBs-hrGFP);采用磷酸钙转染法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染AAV293细胞,进行rAAV-shHBs-hrGFP重组病毒包装。收获病毒感染HepG2.215细胞;采用ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平。结果酶切鉴定、测序结果表明,pAAV-shHBs-hrGFP载体成功构建。包装收获的rAAV-shHBs-hrGFP病毒液可以感染HepG2.215细胞,并且可以抑制HBsAg和HBeAg的表达。结论制备的rAAV-shHBs-hrGFP病毒载体能够抑制HBV在体外的抗原表达。; 胡斌杨燕刘嘉马智勇黄红平余源刘慎沛杨东亮; 关键词：RNA干扰 HBSAG

幽门螺杆菌对6种抗生素的耐药性及其机制的研究被引量：12: 2008年; 目的了解幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对6种常用抗生素的耐药状况,探讨耐甲硝唑rdxA基因突变与耐药性的关系。方法分离培养76株Hp,以琼脂稀释法检测Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉(红)霉素、阿莫西林、利福平的最小抑菌浓度(Mininum Inhibitory Concentration,MIC),再用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因rdxA,DNA测序分析敏感株和耐药株耐药基因的序列与耐药性的关系。免疫印记(West-ern Blotting)分析耐药基因的表达与耐药性的关系。结果武汉地区人群Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉(红)霉素、阿莫西林、利福平的耐药率分别为67.1%、43.4%、3.9%、11.8%、17.1%和10.5%;甲硝唑耐药基因序列分析表明rdxA基因有插入或点突变;Western Blot显示耐药株和敏感株的rdxA基因的表达有差异。结论幽门螺杆菌对6种抗生素有较高的耐药率,rdxA基因突变导致基因表达水平改变,导致Hp对甲硝唑耐药。; 田拥军张正茂刘慎沛叶嗣颖; 关键词：幽门螺杆菌耐药性基因突变

中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体糖基结合域的原核表达与多克隆抗体的制备被引量：1: 2007年; 目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功构建了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2,目的蛋白可以高效表达,用其免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论:首次成功表达了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域多肽,且纯度高,免疫原性强,用其免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性好、效价高,为在HBV感染模型-中国旱獭体内进行肝脏疾病的靶向治疗奠定了实验基础。; 杨燕黄凰刘慎沛张振华王宝菊田拥军杨东亮; 关键词：去唾液酸糖蛋白受体多克隆抗体靶向治疗

高比活度单克隆抗体放射性碘标记方法的探讨: 1992年; 本文采用N-溴代琥珀酰亚胺(N-bromosuccinimide,BSI)作为碘化试剂,对单克隆抗体WuT9进行高比活度的碘标记,碘利用率介于84％～95％,平均90％;免疫活性分数介于57％～70％,平均64％,48h培养未见微生物生长;于标记后3d内,标记单克隆抗体结构稳定,在荷瘤小鼠及部分临床病例中试用获得满意结果。; 李建华刘慎沛崔武任叶维新; 关键词：抗体碘标记琥珀酰亚胺

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