刘庆鑫
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
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- 正常人前列腺组织PSP mRNA的表达
- 1999年
- 用ＲＴ－ＰＣＲ和ｃＤＮＡ序列测定法分析５名正常中国人前列腺组织中前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明，在这５名正常前列腺组织中均同时存在ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７ｃＤＮＡ，且基因序列与文献报道的从前列腺癌和增生前列腺组织中获得的完全一致。这可能对ＰＳＰ进一步的基础研究和应用有一定的意义。
- 刘丽刘建香刘庆鑫刘立忠王颖孟岩谢宝树冷爱军苏旭刘树铮
- 关键词：MRNA前列腺组织
- PSP94-TNFαD11a质粒DNA注射体内表达规律被引量：2
- 2001年
- 将带有目的基因PSP94 TNFαD11a的 pcDNA3 0质粒DNA ,以 5 0 μg/只剂量注射到 39只雄性昆明小鼠的股四头肌内 ,第 2、3、4、5、10、15、2 0、2 5天分别摘眼球取血收集血清 ,每组 3只动物血清混合。同时取注射部位骨骼肌 ,研磨后离心取上清。用ELSIA方法检测血清和骨骼肌上清中融合蛋白的表达 ,观察不同时间的蛋白表达水平。提取 14天骨骼肌组织的总RNA ,进行RT PCR分析目的基因mRNA的表达水平。结果 ,在裸质粒注射后 9天可检出目的蛋白的表达 ,第 14天出现表达高峰 ,观察至 2 5天仍可检察到蛋白表达。
- 刘庆鑫刘丽刘立忠谢玉树王颖冷爱军
- 关键词：基因治疗前列腺癌
- PSP94-TNFαD11a融合基因在NIH3T3细胞中的表达及其产物活性分析被引量：2
- 2001年
- 为了分析 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的表达和表达产物的生物学活性 ,将含该融合基因的质粒 pc DNA- PSP94- TNFα D1 1 a转染 NIH3T3细胞 ,72 h后收集细胞培养上清 ,并提取细胞总RNA,经 RT- PCR,得到与目的基因长度相符合的 c DNA片段 ;以 PSP94c DNA为探针 ,对 RT-PCR产物进行 Southern印迹分析 .结果表明 :转染 PSP94- TNFαD1 1 a融合基因的 NIH3T3细胞 ,其 RT- PCR产物杂交信号为阳性 .细胞培养上清用 TNF抗体行 Western印迹和 ELISA分析 ,检测结果为阳性 .生物学活性分析表明 ,细胞培养上清不仅具有 PSP94抑制人前列腺癌细胞 PC- 3生长的活性 ,而且显示出 TNFα对 L92 9细胞的细胞毒作用 .以上结果表明 ,pc DNA- PSP94- TNFαD1 1 a质粒能够正确表达目的基因 PSP94- TNFα D1 1 a,且表达的 PSP94- TNFαD1 1 a融合蛋白具有预期的双重生物学活性 .
- 刘庆鑫刘丽石缨刘立忠王烨杨彦曹颖
- 关键词：融合基因表达活性前列腺癌
- 人PSP94与TNFα衍生物联合治疗人前列腺癌的实验研究被引量：1
- 2000年
- 构建了表达人 PSP94、TNFα衍生物 ( TNFα D1 1 a)及 PSP94与 TNFα D1 1 a( PSP94- TNFαD1 1 a)双功能蛋白真核表达质粒 pc DNA- TNFα D1 1 a、pc DNA- PSP94和 pc DNA- PSP94- TNFαD1 1 a,与 rh PSP94和 rh TNFα D1 1 a蛋白分别在人前列腺癌裸鼠移植瘤动物模型上进行了 PSP94与 TNFαD1 1 a联合治疗人前列腺癌的实验研究 .当动物肿瘤直径长至约 1 0 mm时 ,将以上 3种真核表达质粒分别以 50 μg/只的量给相应组动物的左右四头肌内注射一次 ,同时设 pc DNA3.0空载体对照组 ;rh PSP9450μg/kg、rh TNFαD1 1 a 1 0 0万单位 /kg、rh PSP94和 rh TNFαD1 1 a以同样剂量联合给药 ,肌肉注射 ,每 d一次 ,连续 1 0 d,同时设环磷酰胺阳性对照组和生理盐水阴性对照组 .基因治疗动物给药后第 1 5d处死 ,蛋白治疗组停药后第 2 d处死 ,观察疗效 ,计算抑瘤率 .结果显示 ,以上述方式给药 ,无论是基因治疗组还是重组蛋白组 ,给 PSP94的动物肿瘤虽然未见明显缩小 ,但肿瘤组织均出现不同程度的坏死和液化现象 ;给 TNFαD1 1 a的未见明显的抑瘤效果 ;PSP94-TNFαD1 1 a融合基因或 rh PSP94+ rh TNFαD1 1 a联合给药 ,不仅肿瘤有所缩小 ,而且也有不同程度的坏死和液化现象出现 .初步认为 :( 1 )
- 刘丽刘庆鑫刘立忠石缨谢宝树冷爱军曹颖
- 关键词：基因治疗前列腺癌
- 人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建被引量：7
- 1999年
- 利用ＲＴ－ＰＣＲ从人肥大前列腺组织钓取９４个氨基酸的人前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）全长ｃＤＮＡ，序列分析结果与文献报道的完全一致．将ＰＳＰ９４成熟肽与人ＴＮＦα衍生物（ＴＮＦΔ）通过Ｌｉｎｋｅｒ－ＳＡＰＧＴＰ在基因水平上融合成５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ，融合基因ＤＮＡ序列分析结果与设计的相符合．５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为３１ｋＤ，表达量约占菌体总蛋白量的３５％．以Ｌ９２９细胞和人前列腺癌细胞株ＰＣ－３为靶细胞进行细胞毒分析结果表明，５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ融合蛋白既具有ＴＮＦ的细胞毒活性。
- 刘庆鑫刘丽刘建香刘立忠王颖谢宝树冷爱军
- 关键词：融合蛋白前列腺癌细胞毒
