丁浩
- 作品数：71 被引量：73H指数：6
- 供职机构：南昌大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学经济管理更多>>
- shRNA沉默ROCK1和ROCK2表达对缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK1)和ROCK2在缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。将ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染细胞,48 h后给予缺氧6 h处理。实验分为5组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+阴性对照shRNA组;(4)缺氧+ROCK1-shRNA组;(5)缺氧+ROCK2-shRNA组。用倒置显微镜观察心肌细胞搏动频率与节律;用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量;用MTT检测细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用Western blotting检测ROCK1和ROCK2的表达,并检测caspase-3和p-PI3K的表达情况。结果:鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。缺氧损伤后心肌细胞搏动频率较对照组明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。全自动生化分析仪检测发现,缺氧能导致细胞培养液LDH含量升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.01)。MTT检测发现,缺氧能导致心肌细胞存活率降低(P<0.05),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,缺氧能导致心肌细胞凋亡率升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测发现,ROCK1-shRNA的转染能降低ROCK1的表达(P<0.05),ROCK2-shRNA的转染能降低ROCK2的表达(P<0.01);缺氧能导致caspase-3表达升高(P<0.05)、p-PI3K表达降低(P<0.01),ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。结论:ROCK1和ROCK2表达下调能抑制缺氧损伤导致的大鼠心肌细胞凋亡,其机制与抑制caspase-3活化和增强p-PI3K的表达有关。
- 孙国芳丁浩李菊香洪葵董家龙吴清华程晓曙
- 关键词：SHRNA缺氧细胞凋亡
- ERK1/2信号通路介导心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用
- 目的探讨心肌营养-1(CT-1)对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及信号通路。方法用改良的方法培养出生1～3d的乳鼠心肌细胞,分为5组:对照组,缺氧复氧组,缺氧复氧+CT-1组,缺氧复氧+CT-1+PD98059组(ERK阻断...
- 李菊香丁浩洪葵万磊苏海吴延庆吴清华程晓曙
- 文献传递
- 内质网应激在唯BH3蛋白Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用
- 夏珍李菊香丁浩孙国芳洪葵吴延庆程晓曙
- 着色性干皮病基因D对白介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响
- 目的血管平滑肌细胞（vascular smooth musclecell,VSMC）过度增殖是促进动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）发生发展的一个关键因素。而且在AS损伤中,白介素-6（interleu...
- 丁浩孙国芳李菊香洪葵程晓曙
- 文献传递
- 重组质粒pcDNA3.1/C-sis对大鼠FHF的影响
- 2017年
- 目的探讨重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠对暴发性肝功能衰竭(FHF)的影响。方法利用流体力学的方法将重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠肝脏,48h后用内毒素(LPS)+D-半乳糖胺(D-GalN)诱导大鼠FHF;利用荧光定量PCR及蛋白质印迹法(Western blotting)检测C-sis表达;利用苏木精-伊红(HE)染色及测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性检测凋亡;利用Western Blotting检测Bcl-2和Bax的表达变化;计算大鼠24h观察期内的死亡率。结果 FHF+C-sis质粒组的C-sis mRNA和蛋白表达水平较正常对照组和FHF+空载质粒组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组和FHF+空载质粒组肝脏细胞凋亡增多;与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组肝脏细胞凋亡减少。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达增多(P<0.01);与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达减少(P<0.05)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达明显减少(P<0.01),Bax表达明显增多(P<0.01);而与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达增多(P<0.05),Bax表达减少(P<0.05)。在24h观察期内,正常对照组大鼠均存活,FHF+林格液注射组及FHF+空载质粒组大鼠死亡率分别为70.0%和80.0%;而FHF+C-sis质粒组大鼠仅20.0%死亡。结论 C-sis基因可减弱LPS+D-GalN诱导的大鼠FHF。
- 蔡鹏程元文峰丁浩
- 关键词：重组质粒肝功能衰竭急性
- 沉默CCND1对肝细胞癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响及机制
- 2023年
- 目的探讨沉默细胞周期蛋白D1基因(CCND1)对肝细胞癌(HCC)细胞(SMMC-7721、HepG2细胞)5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的影响及机制。方法常规培养SMMC-7721、HepG2细胞,并随机分别分为HepG2+NC-siRNA组、HepG2+CCND1-siRNA组和SMMC-7721+NC-siRNA组、SMMC-7721+CCND1-siRNA组,分别用靶向CCND1的siRNA(CCND1-siRNA)、阴性对照siRNA(NC-siRNA)转染细胞。转染48 h后取各组细胞分别置于含10μg/mL 5-Fu的培养基中培养48 h。用荧光定量PCR法检测CCND1 mRNA表达,用CCK-8实验检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blotting法检测CCND1、DNA修复相关蛋白[磷酸化组蛋白(γ-H2AX)、同源重组修复蛋白(RAD51)]表达。结果转染后,HepG2+CCND1-siRNA组、SMMC-7721+CCND1-siRNA组CCND1 mRNA、蛋白表达均低于其对照组(HepG2+NC-siRNA组、SMMC-7721+NC-siRNA组),比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。5-Fu暴露下72 h,HepG2+CCND1-siRNA组、SMMC-7721+CCND1-siRNA组细胞活力(OD值)低于其对照组,凋亡率高于其对照组,γ-H2AX蛋白表达高于其对照组,RAD51蛋白表达低于其对照组,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论沉默CCND1可提高HCC对5-Fu的耐药性,该作用可能与调控DNA修复相关蛋白表达有关。
- 阮起超陈松芝丁浩孙国芳汪杨
- 关键词：肝细胞癌细胞周期蛋白D15-氟尿嘧啶
- 沉默XPD基因的表达对ox-LDL促人脐静脉内皮细胞凋亡作用的影响
- 目的探讨人剪切修复基因D(xeroderma pig-mentosum D,XPD)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)促人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法用脂质体转染法将人剪切修复基因D干扰序列(XPD-si...
- 俞菊梅李菊香丁浩洪葵程晓曙
- 人剪切修复基因XPD对肝癌生长的抑制作用
- 张吉翔丁浩熊瑛
- XPD是转录因子ⅡH（TFⅡH）的一个组份。TFⅡH在真核生物的转录起始和核酸剪切修复中起重要作用。多种肿瘤的发生与核酸剪切修复途径中基因功能的缺失或下降密切相关。XPD解旋酶活性及其ATP酶活性为核酸剪切修复功能所必需...
- 关键词：
- 关键词：肝癌细胞增殖基因表达
- ShRNA沉默ROCK1和ROCK2的表达对缺氧致心肌细胞凋亡的影响
- 目的将靶向ROCK1和ROCK2基因的shRNA转染大鼠心肌细胞,探讨ROCK1和ROCK2在缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。方法(1)原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。(2)将重组质粒ROC...
- 孙国芳李菊香丁浩洪葵程晓曙
- 文献传递
- 合并巨大动-门静脉瘘肝癌的介入治疗分析
- 郭武华谢正元汪福昌熊恺丁浩
