黄文杰
- 作品数：189 被引量：779H指数：15
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程生物学农业科学更多>>
- 转录因子SP1参与TNF-α介导的肺泡上皮细胞Nox1基因的表达调控
- 为探讨急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)发病机制中炎症介导肺泡上皮细胞氧化损伤时氧化相关基因烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NADPH oxidase...
- 徐采云李理黄文杰
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征发病机制转录因子SP1肺泡上皮细胞
- 文献传递
- 脂多糖刺激RAW264．7和Ana-1形态改变及细胞因子表达的差异被引量：2
- 2009年
- 目的比较两株小鼠来源的巨噬细胞株RAW264．7和Ana-1经脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导后在形态及细胞因子表达等方面的差异。方法MTT法检测不同终浓度（0．1mg／L、1mg／L、10mg／L、100mg／L）LPS作用后两株细胞增殖活力，确定最佳作用浓度。选择1mg／L．LPS刺激RAw264．7和Ana-1细胞，ELISA法分别于0h、4h、8h、12h、24h检测两株细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、IL-6和IL-10的表达量。结果LPS终浓度为1mg／L时两株细胞存活率分别为（162．05±28．14）％、（159．92±20．43）％，显著大于同细胞其他浓度组别（P〈0．01）；1mg／L LPS刺激后，两株细胞各细胞因子表达均为随时间呈先增多后减少趋势，峰值出现时间RAW264．7细胞早于Ana-1细胞。TNF—α的表达4h时RAW264．7细胞高于Ana-1（P〈0．01），8h、12h时低于后者（P〈0．05）；IL-18的表达各时间点比较RAW264．7均高于Ana-1（P〈0．05）；IL-6的表达各时间点比较RAW264．7均低于Ana-1（P〈0．05）；IL-10的表达于刺激后4h，RAW264．7细胞高于Ana-1细胞（P〈0．05）。结论当LPS浓度为1mg／L时，Ana-1与RAW264．7细胞存活率均最强；经LPS刺激后，RAW264．7细胞TNF-α、IL-6、IL—1β、IL-10表达高峰早于Ana-1细胞，各细胞因子表达量各有侧重。研究者进行炎症相关实验时对Ana-1和RAW264．7的选择需考虑两者之间的差异。
- 石榴方怡袁伟锋李理黄文杰
- 关键词：脂多糖小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞因子
- Nox1基因启动子表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 目的克隆烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Nox)上游启动子序列,为研究Nox1基因的转录调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得1415bp(-1415～0)、1276bp(-1415～-140)、997bp(-1415～-419)、839bp(-1415～-577)、470bp(-1415～-946)大小的Nox1启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic荧光素酶表达载体,构建荧光素酶报告基因载体,进行真核细胞转染后鉴定目的片段启动子活性。结果在A549细胞中,各Nox1启动子片段均有活性;-140～-419bp和-577～-946bp区域可能存在Nox1启动子核心区域。结论成功克隆了在肺泡上皮样细胞中具有活性的Nox1启动子序列,为进一步研究Nox1基因的转录调控机制奠定了基础。
- 徐采云李理袁伟锋黄文杰
- 关键词：启动子转录调控
- TNFR-Fc减轻LPS所致小鼠ALI炎症反应损伤被引量：4
- 2011年
- 目的:评价肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFR-Fc)能否有效下调炎症反应而减轻急性肺损伤(ALI)小鼠的肺组织破坏。方法:小鼠随机分为脂多糖(LPS)组、TNFR-Fc+LPS组和对照组。气管内滴入LPS复制ALI小鼠模型,TNFR-Fc组在滴入LPS前24 h腹膜腔注射TNFR-Fc(0.4 mg/kg),在滴入LPS后2 h收集标本,检测肺湿/干重、肺泡蛋白含量与肺组织病理评分;ELISA法检测血清TNF-α浓度及检测肺泡灌洗液与血清IL-1β、IL-6、IL-10与IFN-γ浓度。结果:TNFR-Fc显著降低血清TNF-α浓度(P<0.05),轻度降低肺湿/干重比例,显著降低BALF蛋白浓度(P<0.05),显著降低ALI评分数值(P<0.05)。TNFR-Fc显著降低致炎症细胞因子IL-6在BALF(P<0.05)与血清(P<0.05)中的浓度,轻度提高BALF中IL-10浓度(P>0.05),但其差异不显著,亦能显著提高血清IL-10浓度(P<0.05)。IL-1β与IFN-γ水平处理前后变化不显著。结论:TNFR-Fc中和ALI中过度表达的TNF-α,下调以IL-6为代表的炎症反应,减轻ALI的肺组织破坏。
- 袁伟锋李理徐虹黄文杰
- 关键词：急性肺损伤炎症
- 老年人T淋巴细胞PD-1高表达在炎症状态下对其功能的影响被引量：10
- 2017年
- 目的探讨在LPS模拟的炎症环境中,老年人T淋巴细胞功能与程序性细胞死亡受体-1(PD-1)表达的相关性。方法选取我院健康体检人员110例,其中年轻人55例(<65岁),老年人55例(≥65岁)。流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群(CD45-Per CP/CD3-APC/CD8-FITC)数目及其PD-1(CD279-PE)表达水平。分离外周血单个核细胞,分为对照组、LPS刺激组、LPS+抗PD-1组,CCK-8法和流式凋亡检测术检测细胞活性及凋亡影响,ELISA法检测培养上清中TNF-α、IL-6、IL-10、IL-2和IFN-γ表达水平。结果与年轻人相比,老年人各T淋巴细胞亚群绝对值均显著下降,PD-1表达水平升高(P<0.05)。老年人LPS+抗PD-1组较LPS组细胞活性升高,凋亡率下降(P<0.05),年轻人LPS+抗PD-1组与LPS组之间的细胞活性和凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。老年人LPS组TNF-α表达水平显著低于年轻人,IL-10/TNF-α比值高于年轻人(P<0.05)。结论炎症状态下,老年人T淋巴细胞功能减低与PD-1高表达密切相关。免疫应答时淋巴细胞抑制性细胞因子分泌增多,更易处于免疫抑制状态,与老年人较年轻人更易罹患感染性疾病密切相关。
- 袁洁铭李理袁伟锋黄文杰
- 关键词：T淋巴细胞炎症
- DNA探针在呼吸机相关性肺炎病原学检测中的诊断价值被引量：2
- 2006年
- 目的建立一种早期、快速检测呼吸机相关性肺炎致病菌的分子生物学方法。方法采用聚合酶链反应合成铜绿假单胞菌、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌和流感嗜血杆菌这5种细菌的特异DNA探针和细菌16SrRNA的通用探针,分别与生物素标记的细菌、病毒和真菌DNA杂交。杂交法和培养法同时检测100份痰液标本。结果所合成的DNA探针具有高度特异性,与其他细菌、病毒、真菌间无交叉反应。该方法可检测出1 ng细菌DNA。杂交法阳性率显著高于培养法。结论所合成的DNA探针敏感性高,特异性强,具有较高的应用价值,可应用于临床标本检测。
- 樊慧珍于化鹏黄文杰邓火金
- 关键词：DNA探针
- DNA芯片制作的常用方法
- 2003年
- DNA芯片是分子生物学研究领域的重要工具。目前最常用的制作方法是将探针固定于载体上。介绍载玻片的氨基硅烷化修饰和探针的五种修饰方法 ,以及两者之间的结合方式。这些方法简单、实用、经济 ,适合国内实验室开展
- 方怡黄文杰刘志红何为马立人
- 关键词：DNA芯片
- 肿瘤坏死因子-α可诱导GSTM5核转位
- 2017年
- 目的构建稳定表达谷胱甘肽S转移酶mu5(GSTM5)的人支气管上皮16HBE细胞株,探讨诱导GSTM5核转位的关键因素。方法构建表达GSTM5基因的重组慢病毒载体(PLVX-puro-GSTM5-SBP-3*flag-N、PLVX-puro-3*flag-SBP-GSTM5-C)并制备出相应的慢病毒,感染人支气管上皮16HBE细胞后,经嘌呤霉素筛选获得细胞克隆;实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western blot)分别检测细胞株中GSTM5的mRNA、蛋白表达水平;以肿瘤坏死因子-α(TNF-α;10ng/ml)刺激稳定转染细胞株(稳转株)0.5h,共聚焦荧光显微镜检测GSTM5核转位。结果成功构建稳定表达GSTM5人支气管上皮细胞株(16HBE-GSTM5-SBP-3*flag-N、16HBE-3*flagSBP-GSTM5-C);荧光共聚焦显微镜显示稳转株在TNF-α刺激诱导后,GSTM5由胞浆转入胞核,以16HBEGSTM5-SBP-3*flag-N稳转株更显著。结论 TNF-α刺激可诱导GSTM5人支气管上皮细胞株中GSTM5发生核转位,可能与其N端含有非经典核定位信号密切相关。
- 曾燕婷李理袁伟锋郭振辉黄文杰
- 关键词：核转位肿瘤坏死因子-Α
- 重症社区获得性肺炎的发病机制被引量：4
- 2004年
- 樊文峰黄文杰
- 关键词：重症社区获得性肺炎CAP呼吸系统感染凝血系统中性粒细胞PMN
- TNF-α基因单核苷酸多态性与肺炎的相关性研究被引量：6
- 2008年
- 目的:以中国南方汉族人群为研究对象,探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)基因启动子区单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphisms,SNPs)与肺炎易感性以及肺炎严重程度的相关性。方法:以67例肺炎患者和50例健康人群为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对TNF-α基因启动子区5个位点(-1 031、-863、-857、-308、-238)进行基因分型,用SPSS统计软件分析各多态性位点与肺炎严重程度的相关性。结果:TNF-α基因启动子区总突变频率在肺炎患者中高于健康体检者(56.7%,38.0%,P<0.05),-863A在重症肺炎患者与非重症肺炎患者中出现频率分别为44.4%与15.5%,P<0.05;-308A在重症肺炎患者与非重症肺炎患者中出现频率分别为44.4%与12.1%,P<0.05,在死亡与存活病例中的频率分别为75.0%与12.7%,P<0.01。结论:TNF-α基因启动子区多态性可能是肺炎易感以及肺炎进展为重症肺炎、增加重症肺炎患者死亡率的因素。
- 袁伟锋黄文杰梁坤
- 关键词：肺炎单核苷酸多态性
