黄增委
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 穿膜型NDPK-A突变体的构建及蛋白纯化研究
- 黄增委
- 关键词：融合蛋白纯化
- 核苷二磷酸激酶A的定点突变及C4S突变体的制备和活性研究被引量：1
- 2010年
- 目的:对核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)二硫键异构的关键残基C4进行定点突变,构建、表达并纯化C4S突变体,测定其磷酸转移酶活性和DNase活性,研究二硫键异构对NDPK-A活性的影响。方法:以pBV220-nm23-H1质粒作为模板,通过设计合适的引物对NDPK-A进行定点突变,将第4位半胱氨酸突变为丝氨酸,构建NDPK-AC4S突变体;在大肠杆菌BL21中表达,DEAE-sepharose Fas tFlow与Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B纯化目的蛋白,获得均一重组蛋白,纯度达到98%;DNA序列测定及重组蛋白的肽质量指纹图谱(PMF)分析均证明构建正确突变体;高效液相色谱法(HPLC)与DNA消化法分别测定野生型NDPK-A与C4S突变体的磷酸转移酶活性与DNase活性差异。结果:NDPK-AC4S突变体的磷酸基转移酶与DNase酶活性均高于野生型NDPK-A。结论:NDPK-A缺失二硫键后,活性增高。NDPK-A形成链内二硫键可能是其活性负调控模式之一。
- 陈蕴如郭朝万黄增委钱垂文张晓伟王一飞熊盛
- 关键词：定点突变二硫键
