魏峰涛
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小分子干扰RNA抑制大鼠心肌H9C2细胞血管紧张素转换酶2的表达
- 2007年
- 目的研究siRNA对大鼠心肌H9C2细胞血管紧张素转换酶2(ACE2)的抑制作用。方法根据大鼠ACE2基因序列设计并化学合成3条siRNA及1条阴性对照siRNA,并标记FAM荧光,以Lipofectamine2000转染入大鼠心肌H9C2细胞,用Realtime Quantity RT-PCR和Western-blot分别检测ACE2基因和蛋白表达量的改变、验证所设计的siRNA的抑制效应。结果以Lipofectamine2000转染所设计的siRNA进入H9C2细胞,转染效率>95%。起始于434、567位点的siRNA在基因水平对ACE2无明显抑制效应(P>0·05);起始于1205位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降73·5%(P<0·05);蛋白水平下降70·0%(P<0·01)。结论起始于1205位点的siRNA对大鼠心肌H9C2细胞ACE2有明显的抑制效应。
- 魏峰涛杨维巍杨黄恬方宁远
- 关键词：SIRNA血管紧张素转换酶2
- 神经肽Y对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响被引量：4
- 2006年
- 目的应用激光共聚焦显微镜动态观察神经肽Y(NPY)受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY干预大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生的细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度变化,以确定NPY对大鼠VSMC[Ca2+]i浓度的影响。方法用分散细胞培养法培养VSMC。用10μmol/L的Fluo-3孵育细胞。使其与细胞内的游离[Ca2+]i相结合,从而能够在525nm的激发光激发下产生荧光。分别用正常细胞外液、无钙细胞外液稀释的10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY、1μmol/L硝苯地平、10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY+1μmol/L硝苯地平灌流细胞,同时用激光共聚焦显微镜扫描、记录图像。用Leica图像分析系统分析图像,定量分析不同情况下的[Ca2+]i荧光强度。结果正常细胞外液灌流时[Ca2+]i变化不明显,最高值为57.3±3.1,最低值为53.7±2.9,无明显差异(P>0.05)。[Leu31,Pro34]-NPY干预细胞时,[Ca2+]i明显地升高,随后又开始下降。最高值为86.4±2.7,最低值为58.1±3.0,有非常显著差异(P<0.01)。无钙细胞外液+[Leu31,Pro34]-NPY灌流VSMC时[Ca2+]i浓度变化不明显,最高值为52.5±3.5,最低值为48.0±1.2(P>0.05);[Leu31,Pro34]-NPY+硝苯地平组[Ca2+]i变化不明显,最高值为52.6±2.1,最低值为51.7±2.7,差异无统计学意义(P>0.05)。硝苯地平组[Ca2+]i呈下降趋势,最高值为52.8±2.2,最低值为37.5±2.1,有非常显著差异(P<0.01)。结论NPY能够通过NPY-Y1受体使细胞内的[Ca2+]i浓度升高,这种升高是依赖于细胞外的[Ca2+]i由L型[Ca2+]i通道进入细胞的。
- 魏峰涛曲毅方宁远
- 关键词：血管平滑肌细胞激光共聚焦显微镜钙离子浓度
- 体外模拟局部肾素血管紧张素系统对心肌纤维化的影响被引量：5
- 2007年
- 目的建立局部肾素血管紧张素系统(RAS)对大鼠心肌纤维化影响的体外模型。方法原代培养新生大鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞,用RT-PCR鉴定两种细胞RAS各组分在基因水平的表达。从RAS各组分蛋白代谢的角度,采用依那普利阻断心肌细胞血管紧张素转换酶(ACE),放免法观察培养基中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)量的变化,结合Western blotting验证ACE2的存在,确定心肌细胞局部RAS各组分在蛋白水平的存在。以Transwell共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞,构建局部RAS影响心肌纤维化的体外模型。结果在心肌细胞中检测到RAS各组分基因的表达,但在成纤维细胞中未发现肾素和ACE2的表达;对心肌细胞采用依那普利干预后AngⅡ呈剂量依赖性下降,10-7mol/L组[(36.24±3.27)pg/mL]与对照组[(44.08±0.76)pg/mL]有显著差异(P<0.05);Western blotting证实心肌细胞在蛋白水平有ACE2的表达。结论心肌细胞能够单独形成局部RAS;而成纤维细胞因为不能生成肾素和ACE2,则本身不能形成局部RAS。以Transwell体外共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞能够建立一个用于研究局部RAS对心肌纤维化影响的体外模型。
- 魏峰涛方宁远杨巍维于卓
- 关键词：TRANSWELL心肌纤维化
- NPY-Y1受体激动剂对SHR脑血管平滑肌细胞的促增殖作用被引量：7
- 2006年
- 目的探讨NPY-Y1受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞增殖周期的影响及其跨膜信号传递途径。方法植块法培养SHR血管平滑肌细胞,流式细胞仪检测不同药物干预下S期细胞的百分比;激光共聚焦扫描显微镜定量分析细胞内游离钙离子浓度。结果随着[Leu31,Pro34]-NPY浓度的增加,S期细胞所占百分比增加,10-5、10-6mol/L NPY组与对照组相比有显著差异(P<0.05)。[Leu31,Pro34]-NPY(用正常细胞外液稀释)干预细胞时,细胞内游离钙离子浓度先明显升高,随后下降(P<0.01);[Leu31,Pro34]-NPY+硝苯地平组细胞内钙离子浓度变化不明显,而硝苯地平组细胞内钙离子浓度呈下降趋势(P<0.01)。结论通过细胞膜上L型钙离子通道进行跨膜信号传递,NPY-Y1受体介导促血管平滑肌细胞增殖作用。
- 曲毅魏峰涛方宁远
- 关键词：血管平滑肌细胞信号传递
