马晓芸
- 作品数：30 被引量：25H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a的构建及功能验证
- 2017年
- 目的构建含大鼠ASIC2a全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)的绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFPN1-ASIC2a并转染至HEK293细胞,观察其表达和分布情况。方法设计、合成ASIC2a基因引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术,以现有质粒pc DNA3.1-ASIC2a为模板扩增出含有限制性内切酶(XhoⅠ与EcoRⅠ)酶切位点的ASIC2a基因片段与载体pEGFP-N1酶切后连接形成重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并瞬时转染至HEK293细胞中,利用细胞膜片钳方法观察其表达电流的情况。为进一步明确其亚细胞定位,将质粒EGFPN1-ASIC2a、pDs Red-Monomer-Mem和pDs Red2-ER共同转染至HEK293细胞中。结果 PCR扩增得到正确的ASIC2a基因片段,酶切鉴定和测序证实获得重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并将其瞬转至HEK293细胞后,成功记录到ASIC2a同聚体电流。然后利用共转染的方法观察到,pEGFP-N1-ASIC2a主要在HEK293细胞内质网表达,细胞膜表达较少。结论重组绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a构建成功,且在HEK293细胞中主要表达于内质网,为下一步研究ASIC2a的功能,特别是为ASIC2a在缺血性神经元损伤中的作用及其机制的研究奠定基础。
- 李栋张康马晓芸袁维秀刘晓燕
- 关键词：真核表达载体绿色荧光蛋白
- BKLF基因的功能探索
- 为进一步加强对BKLF基因的认识,我们对hBKLF基因的亚细胞定位及其影响因素进行了探索.该基因属于转录因子范畴.因此它应该定位于核内.该研究阐明了BKLF基因以小斑点的形式定位于细胞核内,核仁内没有分布;BKLF分子的...
- 马晓芸
- 关键词：核定位信号EMSA
- 文献传递
- 新型人转录因子hBKLF对K562细胞增殖、分化及血红蛋白合成作用的研究被引量：1
- 2006年
- 孕22周的胎肝是胎儿的主要造血器官,其中含有大量与造血相关的调控因子。人碱性Krüppel样因子(humanbasicKrüppel-likefactor,hBKLF)是本研究室从这一时期胎肝cDNA文库中新克隆的转录因子。对其C端的结构分析发现,它含有3个特征性C2H2锌指结构,因此属于KLF转录因子家族。前期的表达谱研究工作显示,hBKLF在成人外周血白细胞、骨髓和胎肝中表达量高,在红系中有表达,这提示它可能与造血相关。本研究以K562细胞为模型,研究hBKLF与造血细胞增殖、分化及血红蛋白合成的关系。构建hBKLF正义及反义真核表达载体,转染K562细胞,经G418筛选4周,得到稳定细胞株;用RT-PCR、Westernblot方法测定转染后K562细胞hBKLF表达水平的变化;以转染空质粒的K562细胞为对照组,在显微镜下直接观察转染正义质粒和反义质粒的两组细胞形态的改变;用MTT法比较增殖速率的变化;用甲基纤维素半固体培养法比较集落形成率的差别;用苯息丁法观察氯高铁血红素(hemin)诱导K562细胞分化后血红蛋白合成水平的差异。结果表明正义质粒和反义质粒经NcoI酶切鉴定构建正确。转染正义质粒的K562细胞(正义组)中hBKLF的mRNA及蛋白质表达水平增加,转染反义质粒的K562细胞(反义组)中hBKLF的mRNA水平降低。增殖活性在反义组、正义组、对照组分别为1.335±0.022、1.067±0.010、1.118±0.014,反义组K562细胞的增殖速率加快,正义组细胞增殖速率减慢(P<0.001)。细胞形态在各组间无明显区别。集落形成率在反义组、正义组、对照组分别为148±13、136±10、141±10,各组间无显著差异(P>0.05)。3组细胞血红蛋白合成水平在hemin诱导后均升高,诱导后血红蛋白升高倍数在对照组、反义组、正义组分别为9.064±1.637、14.360±2.185、4.820±0.404,反义组K562细胞合成血红蛋白能力增加,正义组合成血红蛋白能力下降(P<0.05)。结论hBKLF可以抑制K562细胞的增�
- 王茫桔马晓芸石永进武淑兰贺福初
- 关键词：血红蛋白K562细胞增殖细胞分化
- 干扰HERG钾通道表达可抑制成神经细胞瘤细胞增殖被引量：2
- 2006年
- 目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNA i)技术抑制HERG基因的表达,探讨HERG基因编码钾通道对人成神经细胞瘤细胞(SH-SY5Y)存活及增殖的影响。方法:构建发卡状RNA干扰质粒(shRNA-HERG)转染SH-SY5Y细胞,再分别使用半定量RT-PCR和W estern印迹方法观察shRNA-HERG对SH-SY5Y细胞中HERG基因mRNA及其编码蛋白表达的干扰效果。利用SH-SY5Y细胞的生长曲线和集落形成实验,观察转染shRNA-HERG质粒对SH-SY5Y细胞存活及增殖能力的影响。结果:转染shRNA-HERG干扰质粒后,SH-SY5Y细胞中HERG基因的mRNA水平及其编码的钾通道蛋白表达水平显著下降。与对照组相比,shRNA-HERG使SH-SY5Y细胞生长曲线明显下压,细胞倍增时间延长136.8%。集落形成实验结果显示,无论接种细胞数为50,100或200,shRNA-HERG组克隆形成率均显著下降,与shRNA-control组和未干扰组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:所构建的shRNA-HERG表达质粒能有效抑制HERG基因编码钾通道蛋白的表达,明显抑制SH-SY5Y细胞的生长和增殖。
- 赵杰魏晓莉马晓芸郑建全
- 关键词：RNA干扰HERG基因钾通道
- TREK-1双孔钾离子通道的内门调控机制研究
- 研究目的:TREK-1属于双孔钾离子通道,在生理条件下可以产生自发的外向整流型背景电流,通过维持可兴奋细胞静息膜电位决定产生动作电位的阈值,参与神经保护、脑血管舒张以及肾上腺皮质激素分泌等生理功能.越来越多的研究表明,该...
- 马晓芸卓仁恭张树卓刘晓燕郑建全
- 重组人核因子κB亚基p65在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化
- 2005年
- 将扩增得到的核因子(NF)κB亚基p65基因片段克隆至测序载体pGEM-T,测序验证该序列为预期目的片段后,再将该基因片段克隆至表达载体pGEX-4T2中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,用GST蛋白亲和柱纯化融合蛋白p65/GST,Western印迹验证该蛋白具有NF-κB抗原活性。结果表明,构建了NF-κBp65/GST融合表达载体,并表达和纯化了NF-κBp65/GST融合蛋白,为进一步研究NF-κB的功能和筛选NF-κB拮抗分子奠定了基础。
- 闫海涛马晓芸董泗建郑建全丁日高
- 关键词：核因子GST
- cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建被引量：1
- 2014年
- 目的:构建含有cAMP反应元件(CRE)的萤光素酶报告基因载体。方法:以含有gal4位点的萤光素酶报告基因质粒为模板,利用PCR方法,在去除gal4位点的同时,连入4个CRE元件得到pCRE-luc;将该载体与G蛋白偶联受体(GPCR)共转染人胚肾细胞HEK293,测定萤光素酶活性;应用蛋白激酶A(PKA)抑制剂确认CRE的活性是否与Gs通路相关。结果:pCRE-luc的活性直接相关于GPCR的激活程度,并依赖Gs信号通路。结论:CRE萤光素酶报告基因载体构建成功,可用于检测Gs偶联GPCR的活性,为基于GPCR的高通量药物筛选奠定了基础。
- 马晓芸于金梅卓仁恭张康郑建全
- 关键词：报告基因萤光素酶G蛋白偶联受体
- 能拮抗促肾上腺皮质激素释放因子受体1的多肽及其用途
- 本发明涉及能拮抗促肾上腺皮质激素释放因子受体1的多肽及其用途。本发明的多肽具有如下氨基酸序列：WLPVDWH、NPAFELM、FWGDDGY、LLWLDWH、YLDAWENEVINF、DGYNGEPWIWQQ或YAGDF...
- 郑建全马晓芸于金梅闫海涛魏晓莉
- 文献传递
- HCN通道在爪蟾卵母细胞中的功能表达
- 2015年
- 目的：建立爪蟾卵母细胞表达的HCN通道的细胞模型,研究其生物学特性,并为药物评价建立细胞模型。方法：将HCN1及HCN2的互补DNA（c DNA）体外转录为互补RNA（c RNA）后,分别注射至去除滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞中,表达1~3 d后采用双电极电压钳技术记录其电流。结果：在爪蟾卵母细胞表达的HCN1及HCN2通道的同聚体细胞模型上,记录到了超极化激活的内向阳离子电流,此电流被称为Ih电流,可被HCN通道特异性阻断剂Cs Cl所阻断;在1 mmol/L的Cs Cl作用下,HCN通道产生的电流幅度显著减小,在-140 m V水平,HCN1电流幅度减少率为83.4%±9.5%（n=5,P〈0.001）,HCN2产生的电流幅度减少率为99.7%±0.6%（n=4,P〈0.001）。结论：建立了表达HCN1及HCN2通道的爪蟾卵母细胞模型,为研究HCN通道生物学特点以及药物评价奠定了基础。
- 孙燕张树卓卓仁恭刘晓燕马晓芸魏晓莉刘莹郑建全
- 关键词：爪蟾卵母细胞CSCL
- TREK—1双孔钾离子通道的门控机制研究
- 【研究目的】:离子选择器构象的变化是钾离子通道控制钾离子流出的最有效策略,是门控机制研究的重要内容。TREK—1属于双孔钾离子通道,在生理条件下可以产生自发的外向整流型背景电流,通过维持可兴奋细胞静息膜电位决定产生动作电...
- 马晓芸华南于金梅张树卓刘晓燕吴宝红郑建全
- 文献传递
