陈长法
- 作品数：25 被引量：71H指数：6
- 供职机构：山东出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局植物病原检测专项基金国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 一种检测番茄斑萎病毒的方法
- 本发明公开了一种焦磷酸测序技术检测番茄斑萎病毒的方法，先依据番茄斑萎病毒N基因设计特异性引物及焦磷酸测序引物；再提取待测样品的核糖核酸，然后分别以N基因的特异性引物进行聚合酶链式反应扩增；用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检...
- 吴兴海陈长法封立平魏晓棠冯黎霞张京宣王简
- 文献传递
- 番茄斑萎病毒NASBA检测方法的建立被引量：8
- 2016年
- 为建立一种快速检测番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的方法,以TSWV-CP1/TSWV-CP2为引物对TSWV的N基因进行PCR扩增及序列测定,在TSWV N基因的高度保守区设计特异性扩增引物NA-P1/NA-P2进行核酸序列依赖性扩增(NASBA)反应,并对NASBA方法的特异性和灵敏度进行验证。结果表明,建立的NASBA方法最佳反应时间为1.5 h。该方法特异性较好,只有TSWV阳性样品中出现了预期大小为235 bp的扩增产物,与烟草环斑病毒(Tobacco ring spot virus,TRSV)、番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow curl virus,ToYCLV)无交叉反应。灵敏度验证中,实时荧光RT-PCR的灵敏度最高,为1.56×10^(-5)ng/μL感病植物RNA模板,NASBA次之,为1.56×10^(-4)ng/μL,普通RT-PCR最低,为1.56×10^(-3)ng/μL。在对9份实际样品检测中,NASBA的阳性检出率与实时荧光RT-PCR、普通RT-PCR相同,均为33%,高于ELISA检测的22%。表明NASBA方法适用于实际样品检测,可对TSWV进行快速检测。
- 吴兴海陈长法封立平邵秀玲
- 关键词：番茄斑萎病毒
- 玉米细菌性萎蔫病菌环介导恒温扩增(LAMP)快速检测试剂盒及其检测方法
- 本发明涉及一种用玉米细菌性萎蔫病菌环介导恒温扩增快速检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒内有模板预处理反应液、恒温扩增反应液Ⅰ。检测玉米细菌性萎蔫病菌的方法包括细菌DNA的提取、模板预处理、LAMP恒温扩增、核酸检测。其优点...
- 封立平尼秀媚陈长法倪新厉艳纪瑛王英超吴兴海甘琴华
- 文献传递
- GIS及其在植物检疫中的应用研究被引量：1
- 2007年
- GIS是一种决策支持系统，吸取了计算机地图制图、计算机图形学、航空摄影测量与遥感、数字图象处理、数据库管理系统等技术的成果，具有信息系统的各种特点，已取代地图成为地理学的第三代语言。GIS由于其具有强大的空间信息管理和空间分析功能，被广泛地应用于几乎一切与空间信息相关的领域，如城市规划、军事、测绘、农业和商业等。
- 吴兴海邵秀玲王英超陈长法魏晓棠封立平
- 关键词：GIS植物检疫计算机图形学数据库管理系统决策支持系统航空摄影测量
- 利用PCR技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii)被引量：7
- 2007年
- 根据玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartiisubsp.stewartii)ITS基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,对玉米细菌性枯萎病菌和非玉米细菌性枯萎病菌的标准菌株进行了PCR扩增反应.结果显示,玉米细菌性枯萎病菌的PCR产物出现301 bp的特异性扩增条带,而非玉米细菌性枯萎病菌均未出现扩增条带;其PCR检测的灵敏度为612 pg/μL.因此PCR技术是一种特异、灵敏、快速检测玉米细菌性枯萎病菌的方法.
- 吴兴海杨伟克邓明俊陈长法邵秀玲梁成珠封立平
- 关键词：PCR玉米细菌性枯萎病菌
- 番茄斑萎病毒N基因克隆及其植物表达载体的构建被引量：1
- 2014年
- 目的对从云南楚雄番茄染病材料上得到病毒分离物进行鉴定,建立病毒N基因植物表达载体,以便进行抗病育种研究。方法利用RT-PCR技术克隆得到N基因,全长777 bp,将克隆得到的TSWV-N基因连接至质粒p BI121重组植物表达载体p BI121-TSWV-N。结果 TSWV-N基因与NCBI上已登记的番茄斑萎病毒中国云南分离物同源性达到97%~100%。结论所分离病毒确为番茄斑萎病毒,包含有TSWV-N基因的植物表达载体构建成功。
- 吴兴海陈长法余冬冬王英超封立平王亚茹
- 关键词：番茄斑萎病毒N基因植物表达载体
- 基因芯片技术及其在植物检疫工作中应用前景被引量：6
- 2006年
- 本文介绍了基因芯片的发展历程、原理及制作方法,分析并预测基因芯片在检疫性植物病原细菌、植物病毒、病原真菌、杂草、昆虫及线虫检测等方面的应用前景。
- 吴兴海陈长法张云霞郑媛
- 关键词：基因芯片植物检疫
- 我国首次从进境菲律宾香蕉上截获香蕉枯萎病菌4号小种
- 香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum Schlecht.f.sp.cubense(E.F.Sm.)Snyd.et Hans(Race 4))，是我国重要的检疫性有害生物，该病菌侵害香蕉引起的香蕉枯萎...
- 刘爱华陈长法封立平吴品珊高连喜程秀杰
- 关键词：香蕉枯萎病菌检疫性有害生物侵染特点为害症状检疫监管
- 文献传递
- 一种基于环介导等温扩增技术检测番茄斑萎病毒的方法
- 本发明提供一种基于环介导等温扩增技术检测番茄斑萎病毒的方法，采用环介导等温扩增技术(LAMP)，并依据番茄斑萎病毒N基因设计特异性RT-LAMP检测引物组，包括外侧引物对F3和B3、内侧引物对FIP和BIP，由此发明了用...
- 吴兴海陈长法封立平魏晓棠宋涛王简纪瑛
- 文献传递
- 应用分子生物学方法快速检测烟草环斑病毒被引量：1
- 2007年
- 根据烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus)CP基因序列,设计并合成了特异性RT-PCR扩增引物,对烟草环斑病毒和非烟草环斑病毒的感病植物组织样本进行了PCR扩增反应。结果,烟草环斑病毒的感病植物组织样本的PCR产物均出现1 760 bp的特异性扩增条带,而非感病植株组织样本均未出现扩增条带,证明该合成引物具有烟草环斑病毒鉴定特异性。将提取的烟草环斑病毒总RNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果可检出烟草环斑病毒RNA模板最低浓度为234 pg/μl。研究表明,分子生物学测定具有特异性强、灵敏度高、快速准确的特点,可应用于烟草环斑病毒检疫的快速检测。
- 吴兴海陈长法张云霞邵秀铃刘爱华
- 关键词：分子生物学
