郭丽萍
- 作品数：3 被引量：12H指数：1
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- 低氧促进肌成纤维细胞表达和分泌结缔组织生长因子及纤维连接蛋白被引量：11
- 2007年
- 目的:观察低氧对肾肌成纤维细胞合成和分泌结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)和细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,以了解肌成纤维细胞在肾间质纤维化过程中的作用。方法:(1)采用原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,以密闭的细胞培养罐造成低氧环境(1%O2,体积分数),应用Westernblot方法检测低氧和正常氧(21%O2,体积分数)条件下低氧诱导因子-1α(hypoxiainducedfactor-1α,HIF-1α)蛋白的表达,验证所营造的低氧条件是可靠的。(2)用Westernblot方法检测在低氧和正常氧条件下,各时间点上细胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平。(3)用RT-PCR方法检测低氧和正常氧条件下,各时间点FNmRNA表达的变化。(4)用明胶酶谱法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloprotei-nase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的活性。结果:正常氧组HIF-1α蛋白表达微弱,低氧组有较高水平HIF-1α蛋白表达。低氧作用于原代培养的肌成纤维细胞6h,12h和24h后细胞内的CTGF蛋白均比正常氧组增高,分别为175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12h最明显(P<0.05);低氧刺激24h时上清液中CTGF蛋白显著增加,是正常氧组的348%±99%(P<0.05);低氧刺激肌成纤维细胞6h,12h和24h后上清液中FN蛋白水平增加,分别是正常氧组的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24h最明显(P<0.05),而对应时间点上清液中MMP-9和MMP-2活性无明显变化,但细胞内FN蛋白减少,低氧剌激6h为正常氧组的64%±13%。低氧刺激肌成纤维细胞3h,FN的mRNA水平开始上升,6h达到正常氧组的135%±13%(P<0.05),12h下降接近正常氧水平。结论:低氧可通过促进肌成纤维细胞表达CTGF和FN参与肾间质纤维化的进展。
- 郭丽萍黄海长李惊子
- 关键词：低氧肌成纤维细胞纤连蛋白类结缔组织
- 低氧促进肌成纤维细胞CTGF的表达及增加纤连蛋白分泌
- 目的低氧是致肾纤维化的重要因素,本研究观察低氧对大鼠肾皮质肌成纤维细胞表达结缔组织生长因子(con- nective tissuegrowth factor,CTGF)及细胞外基质纤连蛋白(fi- bronectin,F...
- 郭丽萍黄海长李惊子
- 文献传递
- 低氧诱导肌成纤维细胞生成并通过ERK1／2途径促进Ⅰ型胶原的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响及其可能的信号通路。方法:(1)采用正常大鼠肾成纤维细胞系(NRK-49F),应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;比较低氧和正常氧条件下α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平。(2)原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,Western blotting方法检测低氧和正常氧条件下,HIF-1α和Ⅰ型胶原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特异阻断剂PD98059的阻断效应;RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达水平;细胞免疫化学法检测HIF-1α胞内表达部位的变化;明胶酶谱法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性。结果:(1)低氧刺激6 h,NRK-49F细胞和肌成纤维细胞胞内和核内均有HIF-1α蛋白表达,核内更明显。(2)低氧培养12 h,NRK-49F细胞表达α-SMA蛋白明显增高,是正常氧组的187%±32%(P<0.05),验证了低氧可引起成纤维细胞表型转化。(3)低氧刺激原代培养的正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞6 h、12 h上清中Ⅰ型胶原蛋白水平增加,分别为正常氧组的171%±27%(P<0.05)和256%±61%(P<0.05);低氧刺激4 h、6 h,Ⅰ型胶原mRNA表达增加,为正常氧组的189%±28%(P<0.05)和221%±44%(P<0.05)。(4)低氧刺激肌成纤维细胞6 h、12 h、24 h,培养上清液中MMP-9、MMP-2活性无明显变化。(5)低氧刺激肌成纤维细胞15 min即可使ERK1/2活化,阻断实验显示,PD98059可以使低氧12h引起Ⅰ型胶原增加(低氧刺激组为正常氧对照组的273%±51%,P<0.05)显著减少(PD98059+低氧组为正常氧组的108%±19%,P>0.05)。结论:低氧促肾纤维化可能与其诱导肾成纤维细胞转化为肌成纤维细胞并经ERK1/2途径增加Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。
- 郭丽萍黄海长李惊子
- 关键词：低氧肌成纤维细胞ERK1/2通路
