邢莹
- 作品数：134 被引量：329H指数：9
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省自然科学基金河南省医学科技创新人才工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 端粒酶逆转录酶基因修饰人骨髓间质干细胞的实验(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:人骨髓间充质干细胞经过有限次的细胞传代后,就会停止增殖,发生衰老和死亡。有研究表明,端粒与细胞寿命的控制密切相关,是否可通过外源性人端粒酶逆转录酶基因的异位表达,诱导人骨髓间充质干细胞的端粒酶活性,维持端粒长度的稳定,从而延长人骨髓间充质干细胞的生命周期并保持其多潜能分化特性?目的:观察外源性人端粒酶逆转录酶基因的异位表达对人骨髓间质干细胞端粒酶活性及细胞生命周期的影响。设计:重复测量实验。单位:郑州大学医学院干细胞研究中心。材料:实验于2003-10/2005-12在郑州大学医学院干细胞研究中心完成。人骨髓间质干细胞采自郑州大学第一附属医院及第三附属医院小儿外科和门诊20名健康志愿者。增强型绿色荧光蛋白-C1质粒和增强型绿色荧光蛋白-人端粒酶逆转录酶质粒由加拿大Dr.ChantalAutexier馈赠。DH5α菌株由郑州大学医学院重点分子医学实验室侯卫红博士馈赠。方法:无菌条件下,抽取健康志愿者胸骨骨髓2mL,经离心、洗涤及传代培养后备用。①阳离子脂质体转染及阳性克隆的筛选和扩增结果:将第5代人骨髓间充质干细胞接种至24孔培养板中,将携带有增强型绿色荧光蛋白报告基因和人端粒酶逆转录酶目的基因的质粒pEGFP-人端粒酶逆转录酶通过脂质体转染法转入人骨髓间充质干细胞中,转染共分4组:正常对照组、脂质体组、增强型绿色荧光蛋白-C1质粒组、增强型绿色荧光蛋白-人端粒酶逆转录酶质粒组,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与扩增。②人骨髓间充质干细胞转染前后人端粒酶逆转录酶mRNA的表达及端粒酶活性的检测:通过RT-PCR和PCR-ELISA对选用转染增强型绿色荧光蛋白-人端粒酶逆转录酶质粒的第5代人骨髓间充质干细胞(以下简称为转H人骨髓间充质干细胞第5代)、转染增强型绿色荧光蛋白-C1质粒的第5
- 李克刘瑞敏韩雪飞马岚邢莹
- 关键词：间质细胞端粒逆转录酶
- 川芎嗪对蛙心收缩力的影响及其机制探讨被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨不同剂量的川芎嗪对蟾蜍心脏的作用及其相关机制。方法 采用离体蛙心灌流法观察川芎嗪对蟾蜍心脏收缩力的影响。结果 在正常、无钙和高钙任氏液中 ,4mg/L的川芎嗪不能够影响蟾蜍心脏的收缩力 ;在正常和高钙任氏液中 ,4 0 0mg/L的川芎嗪明显降低蟾蜍心脏的收缩力 ,且川芎嗪在高钙溶液中的作用明显强于正常任氏液组 ;而在无钙任氏液中 ,4 0 0mg/L的川芎嗪不能够影响蟾蜍心脏的收缩力。结论 小剂量川芎嗪不能够影响蟾蜍心脏的收缩力 ,大剂量川芎嗪可以通过抑制细胞外的Ca2 +
- 赵文超王志举邢莹
- 关键词：川芎嗪药理机制心脏收缩力
- 大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化后自噬水平的变化被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化前后自噬水平的变化,进一步研究BMSCs神经分化机制。方法:原代培养大鼠BMSCs,三代后用L-DMEM(2%DMSO+200μmol/L BHA)诱导其向神经细胞分化,采用免疫细胞化学方法检测神经元特异标记物NSE表达,采用RT-PCR方法检测自噬相关基因LC3B、Beclin1、Atg5、Atg7、Atg10的表达,用Western blot及流式细胞术检测了自噬标志蛋白LC3B的表达。结果:大鼠BMSCs传3代后,贴壁的BMSCs可达90%以上,类成纤维细胞样梭形生长,经诱导剂作用5 h后,细胞呈现神经细胞样改变,NSE阳性率为(83±5)%。RT-PCR结果表明BMSCs向神经细胞分化后LC3B,Beclin1,Atg5,Atg7,Atg10的表达升高,流式细胞术检测LC3B的平均荧光强度升高,Western blot结果表明神经分化后LC3B-Ⅱ表达增加。结论:大鼠BMSCs向神经细胞分化后自噬水平增加。
- 李博黄春田李彩芳段萍韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：骨髓间充质干细胞自噬分化神经细胞
- Wnt信号通路诱导胚胎干细胞向皮层神经元的分化
- 目的 经典Wnt信号通路对于胚胎皮质神经元的产生和类型分化具有重要影响,本实验拟在体外培养条件下,观察Wnt信号通路在胚胎干细胞向皮质神经元/前体细胞的诱导分化中的可能作用。方法 通过类胚体的方法诱导小鼠胚胎干细胞的悬浮...
- 景莹李博鄢文海邢莹
- 关键词：小鼠胚胎干细胞神经元发生
- SDF-1α对海马神经元突起延伸和增殖的影响(英文)被引量：2
- 2011年
- 目的:观察基质细胞衍生因子1α(stromal cell derived factor-1 alpha,SDF-1α)对体外培养的海马神经元突起延伸与凋亡的影响。方法:应用免疫细胞荧光方法观察SDF-1α和CXCR4在细胞的定位;以不同浓度的SDF-1α处理细胞,观察细胞形态的变化;并采用阻断剂AMD3100阻断CXCR4受体,观察其对细胞的影响;通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:免疫荧光细胞化学方法显示SDF-1α和CXCR4主要表达在体外培养的海马神经元的胞膜和胞浆;不同浓度的SDF-1α改变了细胞的形态,促进了突起延伸;AMD3100则抑制了细胞突起增长;流式细胞仪检测显示SDF-1α减少了细胞凋亡。结论:SDF-1α可影响海马神经元突起延伸和凋亡效应,该机制可能与受体CXCR4有关。
- 刘素芳邢孟韬韩雪飞鄢文海景莹邢莹
- 关键词：形态学基质细胞衍生因子细胞凋亡
- 增强型绿色荧光蛋白转染豚鼠间充质干细胞的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为种子细胞标记物的可行性。方法构建EGFP逆转录病毒载体,转染豚鼠骨髓间充质干细胞(M SC),用阳离子脂质体介导法将病毒质粒导入HEK 293包装细胞内。经G 418筛选出阳性细胞克隆,取阳性克隆的病毒上清感染豚鼠骨M SC。筛选出稳定表达EGFP的M SC克隆,并向神经元方向诱导。检测神经元样细胞的特异性标志神经丝蛋白(NF)的表达。结果EGFP的逆转录病毒载体成功构建。病毒上清转染豚鼠M SC后,EGFP能稳定表达1个月以上,并且M SC细胞诱导后能表达NF。结论EGFP逆转录病毒载体易于构建成功并能在靶细胞中长期稳定表达,不影响细胞的分化特性,可以用作细胞标记。
- 韩雪飞刘瑞敏王永奎景莹贾敏鄢文海邢莹
- 关键词：绿色荧光蛋白间充质干细胞神经元
- 大鼠神经干细胞分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A的表达及其调节
- 已有研究证实,在脑内成熟的神经元中有GSK-3β、CDK-5和PP2A的表达,且Aβ25-35和人参皂苷Rb1对它们的表达均有调节作用,但对于由神经干细胞诱导分化而来的神经元却未见相关研究报道.为此在本实验中我们采用免疫...
- 邢莹赵庆霞许燕郭思姜媛缓韩雪飞鄢文海
- 关键词：GSK-3ΒPP2AGINSENOSIDERB1AΒ25-35
- 五味子酮对APP转基因鼠神经干细胞分化中Tau蛋白过磷酸化水平的影响被引量：12
- 2009年
- 背景:华中五味子酮有强的抗氧化活性,可高效清除羟自由基和超氧阴离子,对处于活性氧应激状态下的细胞具有保护作用。神经元内神经原纤维缠结主要是由异常磷酸化的Tau蛋白组成,与阿尔茨海默病的严重程度呈正相关。目的:探讨五味子酮在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化成神经细胞的过程中对Tau蛋白磷酸化的作用。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-07/2008-10在郑州大学医学实验中心完成。材料:自中国协和医科大学遗传动物中心购得APP基因突变小鼠30只,五味子酮由河南省中医研究院药物所提供。方法:剪取新生APP转基因小鼠尾尖,常规提取DNA,采用PCR法检测动物是否携带有APP基因,APP转基因阳性鼠记为"APP+",APP转基因阴性鼠记为"APP-"。分别取APP+鼠和APP-鼠海马部位脑组织,体外分离培养神经干细胞,并将纯化的神经干细胞向神经细胞方向诱导分化。将从APP+鼠来源的细胞分为五味子酮组、APP+细胞对照组,将APP-鼠来源的细胞设为APP-细胞对照组。五味子酮组向细胞培养液中加入终浓度为50μmol/L的五味子酮溶液,余2组加入相同容积的PBS,培养24h。主要观察指标:免疫荧光化学和免疫印迹分析测定APP+、APP-细胞Tau蛋白在262、396位点的磷酸化水平。结果:与APP+细胞对照组比较,五味子酮组细胞荧光强度减轻,Tau[Ps262]、Tau[Ps396]的磷酸化水平均降低,且Tau[Ps396]位点的磷酸化水平降低尤为明显。APP-细胞对照组Tau[Ps262]、Tau[Ps396]磷酸化水平均较低。结论:在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化过程中,五味子酮可以明显降低Tau蛋白在396、262位点的磷酸化水平,减轻神经元损伤,但其磷酸化程度并未达到阴性细胞水平。
- 李国栋鄢文海邢莹
- 关键词：TAU蛋白过磷酸化APP转基因小鼠
- 川芎嗪增加大鼠远端结肠阴离子分泌的基侧膜机制(英文)被引量：6
- 2003年
- 本研究用短路电流技术来观察在川芎嗪作用下,电解质在大鼠远端结肠上皮细胞的转运及其细胞机制。在新鲜分离的结肠上皮的基侧膜加入川芎嗪,能产生较大的短路电流。用粘膜下神经元阻断剂——河豚毒素预作用于结肠上皮,不影响随后的川芎嗪所产生的短路电流,前列腺素合成抑制剂indomethacin预作用可使随后的川芎嗪产生的短路电流减少55.2％。在结肠上皮的顶膜加入C1-通道阻断剂。DPC和glibenclamide,能完全阻断川芎嗪产生的短路电流。Bumetanide,基侧膜钠、钾、氯共转运体阻断剂能抑制川芎嗪引起的短路电流的85.2％,而结肠上皮细胞基侧膜的非选择性钾通道阻断剂Ba2+能阻断90％以上的短路电流,说明基侧膜的钠、钾、氯共转运体和钾通道在川芎嗪引起的短路电流中起着重要的作用。上述结果表明,川芎嗪刺激大鼠远端结肠上皮细胞分泌C1-是通过上皮细胞顶膜C1-通道和基侧膜的钠、钾、氯共转体和K+通道介导的。
- 邢莹何琼朱进霞陈小章
- 关键词：川芎嗪结肠上皮K^+通道
- 非诺贝特对LPC诱导脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及eNOS基因表达的影响被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨非诺贝特对LPC诱导的脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据非诺贝特不同浓度分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特(10μmol/L)组、中浓度非诺贝特(50μmol/L)组、高浓度非诺贝特(100μmol/L)组,根据非诺贝特不同干预时间分为正常对照组、LPC组、非诺贝特(50μmol/L)干预6h组、12h组、24h组、48h组进行实验。分别观测不同浓度及不同时间非诺贝特内皮细胞增殖、凋亡、NO浓度及eNOS mRNA表达的变化。结果:与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,并使HUVECs eNOS mRNA表达降低,NO合成减少。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增殖增强,细胞凋亡减少,eNOS mRNA表达升高,NO合成增加,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系。结论:非诺贝特可改善LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增殖增强,凋亡减少,eNOSmRNA表达升高,NO合成增加,从而起到抗动脉硬化作用。
- 孙国举谢秀梅邢莹鄢文海杨天崙余国龙
- 关键词：非诺贝特人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶
