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琦祖和: 作品数：38 被引量：113H指数：7; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金卫生部科技专项基金国家科技部专项基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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真核RNA聚合酶Ⅱ无细胞体外转录体系的构建及其应用: 1993年; 近年来,研究真核基因的转录调控已成为分子生物学的热点之一。为了研究 DNA 元件或蛋白质因子在转录过程中的作用,建立无细胞体外转录体系是十分必要的。到目前为止,发现至少有六种必需的蛋白质因子参与 RNA 聚合酶Ⅱ的起始转录。绝大部分RNA 聚合酶Ⅱ的无细胞转录体系来自哺乳动物或果蝇的组织培养细胞的提取物。本文研究了人的白介素-2受体α链基因(IL-2Rα)在 HeLa 细胞提取物中的转录。; 王永俊琦祖和沈珝琲; 关键词：无细胞

人apoE_7基因在NIH/3T3细胞中瞬时及稳定表达: 1998年; 目的为了探索人apoE_7基因受控于异源启动子MT-I时,能否在鼠类细胞中表达。方法自10.3 kb人apoE_7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE_7基因组DNA片段(60 kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(MT-I)重组,构建pME_7真核表达质粒,用Lipofectamine转染NIH/3T3细胞。结果瞬时表达结果表明,重组pME_7质粒能够在NIH/3T3细胞中表达。稳定表达的结果则表明,人apoE_7基因的表达水平与其整合到宿主细胞基因组的拷贝数密切相关。ELISA测定结果显示,人apoE_7基因在NIH/3T3细胞中可以进行正确的转录剪切和翻译加工,合成有生物活性的人apoE_7蛋白;研究结果还表明:重金属可以诱导增强人apoE_7基因的高效表达,诱导后表达水平提高45%～60%。结论人apoE_7基因的表达不仅局限于人类的组织细胞,也可以在鼠类组织细胞中表达;而且MT-I启动子能够诱导表达人apoE_7基因,为人apoE_7转基因小鼠模型的建立奠定了基础。; 孙明增琦祖和潘燕; 关键词：真核表达质粒 NIH/3T3

人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库: 2002年; 目的　以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成 ,要用于探查这一突变基因致病的分子机制 ,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常 ,是重要的环节之一。cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段 ,而cDNA文库更是获取全长基因所必须。方法　自正常小鼠与转基因小鼠肾脏同时提取总RNA ,再分离mRNA ,逆转录制备cDNA后 ,用两次分子杂交削除转基因鼠cDNA中与正常小鼠相同的部分 ,再用PCR与择需PCR法扩增转基因鼠特异的基因 ,克隆入pGEM T载体后 ,制备削减文库。未经削减的转基因小鼠cDNA克隆入λgt11载体 ,制备基因表达文库。结果和结论　自高脂血症转基因小鼠肾脏构建的削减文库得到约 4 0 0个削减克隆 ,测定了部分克隆的序列 ,并进行同源性比较。λgt11 cDNA文库滴度 1 7× 10 7pfu ml,随机测定的克隆其插入片段长约 5 0 0bp以上。; 田增遂琦祖和薛越强; 关键词：转基因小鼠肾脏 CDNA文库

乙型肝炎病毒基因片段体外转录产物的研究: 1993年; 自adr亚型乙型肝炎病毒DNA重组质粒中获得两个DNA片段,用体外转录方法研究启动子的位点。其中1.4kb片段有两个转录产物,其转录起始点分别位于乙型肝炎病毒DNA序列的276±5％位和821±5％位,第一个转录起始点与已报道的乙型肝炎病毒核心抗原基因上游启动子位置一致,第二个转录起始点在888位P基因的起始密码子上游。0.8kb片段自校心抗原结构基因起始密码子ATG以下的序列开始,不含有已知的调控序列,其708±5％核苷酸长的RNA产物,根据其长度计算共转录起始点位于乙型肝炎病毒DNA序列588±5％位,与此位置相关的下游ATG密码子位于677位。; 于文琦祖和; 关键词：乙型肝炎病毒 DNA P基因转录

天花粉蛋白质与苦瓜子蛋白质改变DNA构型的活性I.DNA解旋与链结被引量：13: 1999年; 为研究中药有效成分天花粉蛋白质（ＴＣＳ）与苦瓜子蛋白质（ＭＭＣ）的生物学活性，以细胞遗传物质ＤＮＡ为底物，经分子生物学技术分析，发现超盘旋双链ＤＮＡ发生解旋和链结，单链ＤＮＡ发生断链，在合适条件下，已解旋和断链的分子还可重新盘绕，再成超盘旋，极微量的蛋白质即表现出很强的作用。这一活性与１型ＤＮＡ拓扑异构酶相同。; 琦祖和蒋效松杨显荣李慧云; 关键词：DNA 解旋

重组人apoE基因表达活性和转基因小鼠研究被引量：14: 1997年; 人apoE基因组DNA，去除其自身启动子，代之以小鼠金属硫蛋白启动子，重组质粒经脂质体介导转入小鼠NIH／3T3细胞后，以人apoE基因组DNA／EcoRⅠ片段为探针检测mRNA表达，可见apoEmRNA杂交信号很强，经重金属诱导后杂交信号更强，表明MT启动子功能良好，pME表达正常．将人apoE基因组DNA用显微注射法导入小鼠受精卵雄性原核，再将胚胎移植入假孕母鼠输卵管内，仔鼠分娩四周后，自鼠尾提取DNA，鉴定人apoEDNA在小鼠染色体上的整合，最终得到有人apoE基因整合的转基因首建鼠．; 琦祖和汝昆孙明增杨鹏; 关键词：载脂蛋白E 转基因小鼠基因表达动脉粥样硬化

人突变的载脂蛋白E对转基因小鼠学习与记忆能力的影响被引量：2: 2000年; 目的　研究突变的人载脂蛋白 E(apo E)对大脑皮层功能的影响。方法　以 F1代 apo E4与 apo E7转基因小鼠为研究对象 ,分别用 Southern印迹分析及 EL ISA检测人 apo E基因在 F1代小鼠染色体上的整合与在血中的表达 ;以主动回避实验检测小鼠的学习能力和短期与长期记忆能力的变化 ,同时用酶法测定 F1代小鼠的血脂水平。结果　 (1)人 apo E4和 apo E7基因稳定地整合于 F1代小鼠染色体上并高效表达于血清中 ;(2 ) F1代小鼠血脂升高的同时 ,apo E4小鼠学习能力与短期记忆能力均显著下降 ,apo E7小鼠短期记忆能力也下降。结论　人apo E4与 apo E7基因过度表达均可使转基因小鼠大脑皮层功能受损害 ,提示人 apo E基因突变可能与 apo E4表型一样 ,也与早老性痴呆的发病有一定关系。; 廖峥嵘琦祖和孙明增杨迪恽君惕; 关键词：载脂蛋白E 转基因小鼠记忆

载脂蛋白基因与空间记忆力及胆固醇代谢的相关性分析: 2011年; 目的研究载脂蛋白E(apoE)基因在早老痴呆疾病中的作用。方法选取C57BL/6J鼠,通过显微注射法建立人突变apoE_4近交系转基因鼠,PCR初筛,再将首建鼠与正常C57BL/6J鼠繁育,将获得的6只转基因鼠作为转基因组,经Southern杂交鉴定,同时出生的结果为阴性的6只小鼠作为对照组,用酶法测定2组小鼠2、9和12月龄血清TC水平,Y迷宫测定2组小鼠9和12月龄空间记忆能力。结果 2组小鼠2和9月龄时,血清TC水平差异无统计学意义(P>0.05),12月龄时转基因组鼠血清TC水平(3.02±0.14)mmol/L较同龄对照组鼠明显升高(2.11士0.01)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。转基因组鼠9和12月龄时空间记忆力[(0.82±0.49)%,(0.82±0.05)%]较对照组鼠[(0.99±0.05)%,(0.98±0.03)%]明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 apoE_4基因与TC代谢可能具有相关性,同时apoE_4基因过渡表达损伤了转基因鼠的记忆能力。; 廖峥嵘吕雨虹王忠海张凤云赵俊霞琦祖和; 关键词：载脂蛋白E类阿尔茨海默病转基因胆固醇记忆障碍

乙型肝炎病毒DNA的结构研究被引量：2: 1989年; 本文用末端终止法测定的HBV adr NC-1 DNA全顺序与其它五株HBV DNA进行了比较,发现一些共同的结构特点,在DNA中有多处与原核生物启动子核心相同或相似的顺序和二元对称结构,二者紧密相连或相重叠,在框架后有ATAA,在adrNC-1s基因前有增强子核心顺序,将框架及其前后的调控顺序作为转录单元,对可能存在的新框架进行了讨论。; 琦祖和阎珺祝庆麟; 关键词：乙型肝炎 DNA 病毒

载脂蛋白 E 与 Alzheimer 病的分子生物学研究新进展被引量：7: 1998年; 载脂蛋白Ｅ与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的分子生物学研究新进展江天琦祖和载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）是血浆中最重要的载脂蛋白成分之一，编码ａｐｏＥ的基因位于第１９号染色体的长臂（１９ｑ１３．２）。ａｐｏＥ基因的３种常见等位基因分别为ε２、ε３和ε４。３者的区别在于...; 江天琦祖和; 关键词：老年性痴呆载脂蛋白分子生物学

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