王双
- 作品数：58 被引量：60H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 抗肝癌人源化单链抗体hscFv_(25)的体外亲和力成熟被引量：2
- 2004年
- 目的:提高人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的亲和力. 方法:设计并合成人源化抗肝癌单链抗体hscFv25重链及轻链CDR3的半随机突变引物,构建突变体抗体库,竞争筛选亲和力更高的突变体抗体,对所得到的高亲和力的候选抗体,在大肠杆菌中进行可溶性表达,并采用细胞ELISA、细胞涂片免疫组织化学染色的方法,对该抗体进行初步的活性鉴定. 结果:得到了3株候选高亲和力突变体抗体,其中的一株在大肠杆菌中获得了可溶性表达后,进一步的活性检测结果表明,该抗体的相对亲和力比亲本单链抗体提高了60倍左右,同时该抗体对肝癌细胞(SMMC-7721)的免疫组织化学染色呈强阳性,着色情况与亲本抗体相一致,而对正常肝细胞(HL-02)染色呈阴性. 结论:成功地构建了人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的突变体抗体库,并筛选到了一株亲和力更高的突变体抗体.
- 孙志伟王双杜威世俞炜源
- 关键词：大肠杆菌
- 人白介素-6受体小分子拮抗剂高通量筛选模型的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立新的白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL-6R胞外区基因,将其克隆至真核表达载体构建重组质粒p ABHis-IL6R,瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL-6R拮抗剂筛选模型,并用Z'-因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体p ABHis-IL6R,并对IL-6R进行了分泌表达。所表达的IL-6R能够被特异性抗体识别,能够与其配体rh IL-6特异性地结合,并表现出良好的量效关系。经测算得出,该模型的Z'-因子为0.53,满足高通量筛选的要求。ab47215能够剂量依赖性地阻断IL-6R与其配体的结合,其IC50=(0.55±0.11)μg/ml。结论建立了一种新颖而简便的IL-6R拮抗剂筛选模型,为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。
- 阎雨何阳阳张畅庞晓斌杜鹏孙志伟王双杜冠华
- 关键词：拮抗剂酶联免疫吸附测定
- 地塞米松治疗LPS诱导急性肺炎模型小鼠病理学评价方法的建立被引量：13
- 2013年
- 目的用地塞米松作为阳性药物,对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导急性肺炎小鼠模型建立的病理学评价方案进行验证,以期获得炎症和感染性疾病廉价易行的初步药效学评价模型。方法使用鼻腔吸入法制备小鼠LPS诱导急性肺炎模型,利用不同时间点肺炎模型小鼠肺损伤HE染色结果建立病理学分级标准,使用地塞米松作为阳性治疗药物对病理学评价方法进行验证。结果对LPS吸入后不同时间点的小鼠进行全肺取样和病理学检测,建立了0—5级肺组织损伤病理学分级评价标准,采用该标准对地塞米松作为阳性治疗药物的治疗效果进行评价,与LPS对照组相比差异显著。结论获得了针对LPS诱导急性肺炎小鼠模型建立的病理学评价方案,该方案以地塞米松作为阳性对照药物,可以用于抗炎药物的初步筛选和药效学研究。
- 杨东仇玮祎张畅曾大地王双孙志伟赵德明
- 关键词：地塞米松急性肺炎小鼠模型病理评分
- 新型重组全人源抗EGFR单克隆抗体药效和药理学机制研究
- 生长因子受体(EGFR)是受体酪氨酸激酶(RTKs)ErbB家族成员,对细胞的增殖、分化、迁移和损伤修复均具有重要作用.EGFR在多种实体肿瘤中高表达,并且其高表达和异常激活影响肿瘤恶性生长的细胞功能网络,包括存活、增殖...
- 王双仇玮祎张畅于晓妍曾大地孙志伟
- 关键词：单克隆抗体药物表皮生长因子受体药理学机制
- 文献传递
- 载体骨架CpG化修饰对复制子DNA疫苗免疫调节作用研究
- CpG免疫刺激DNA序列(Immuncostimulatar DNA sequence,ISS)是一种极具应用潜力的新型疫苗佐剂,可使疫苗抗原免疫应答以不同方式进行免疫调节及放大,按照结构和功能特点分为三种类型,即K/B...
- 余云舟马尧王双俞炜源孙志伟
- 关键词：CPGDNA疫苗复制子免疫调节
- 文献传递
- 不同佐剂条件下Aβ多肽B细胞表位疫苗诱导产生抗体的免疫反应特性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:研究阿尔茨海默病β淀粉样肽(Aβ)B细胞表位疫苗2Aβ1-15-PADRE(Aβ-T)诱导产生抗体的免疫反应特性,并探讨不同佐剂对该疫苗免疫反应效果的影响。方法:合成了含2个Aβ42的B细胞表位—Aβ1-15及1个辅助T细胞表位—PADRE的多肽2Aβ1-15-PADRE。采用Al(OH)3佐剂,弗氏佐剂,Abisco佐剂,MF59佐剂分别与多肽疫苗联合免疫小鼠,并另设3个对照组:无佐剂多肽免疫组(Mock),PBS免疫组(PBS),未免疫组(Native)。结果:5组多肽免疫组小鼠均产生了针对Aβ的特异性抗体,无佐剂多肽免疫组的IgG抗体滴度最低,Al(OH)3佐剂组,MF59佐剂组,Abisco佐剂组小鼠IgG抗体滴度较高,弗氏佐剂组IgG抗体滴度最高。斑点杂交实验结果显示5组小鼠免疫后血清与Aβ42单体反应较弱,与寡聚体反应最明显,与纤维状Aβ42几乎不反应。结论:4种佐剂均能提高多肽疫苗的免疫反应,产生高水平抗Aβ的特异性抗体。5组免疫小鼠产生的抗体均与Aβ寡聚体反应较强,与纤维状Aβ42反应较弱,表明该多肽疫苗具有良好的应用前景。
- 陈鳌余云舟王文斌庞晓斌王双俞炜源孙志伟
- 关键词：多肽疫苗佐剂斑点杂交
- 双功能抗体分子的研发
- 肿瘤免疫疗法已成为肿瘤治疗领域的研究热点,并获得了巨大的临床效益,其中应用最广泛的效应细胞是T细胞和NK细胞.具有双靶向功能的双功能分子能够有效衔接肿瘤细胞和效应细胞,将效应细胞的杀伤作用最大化.基于文献调研,认为除了T...
- 陈鸿斌王双孙志伟
- 关键词：中性粒细胞激活蛋白分子克隆抗肿瘤作用
- 从人源全合成抗体库中筛选到抗人干扰素α1b单链抗体被引量：4
- 2009年
- 目的研究开发人源抗huIFN-α的基因工程抗体,为系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)的治疗提供有效的抗体药物。方法本研究利用噬菌体表面展示技术,以纯化的人干扰素α1b(huIFN-α1b)和人干扰素α2b(huIFN-α2b)蛋白为抗原从人源全合成抗体库中筛选抗huIFN-α的基因工程单链(single chain variable fragment,scFv)抗体,通过phage-ELISA对噬菌体单链抗体的结合特异性和稳定性进行验证。将单链抗体基因克隆到原核分泌表达载体pET22b上在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过Westernblot检测单链抗体的分泌表达,并通过ELISA对单链抗体的结合特异性进行验证。通过金属螯合亲和层析纯化单链抗体,并用WesternBlot对单链抗体的结合特异性进行鉴定。结果经过3轮富集筛选,获得100株对huIFN-α1b有特异性结合的噬菌体单链抗体。对得到的86株克隆的测序分析表明,共有9株带有不同的抗体轻重链可变区序列及其组合的抗体,有7株抗体轻重链可变区序列分类在VH3和VL3家族,有2株抗体轻重链可变区序列分类在VH3和VL1家族。获得了5株稳定且特异针对huIFN-α1b而与huIFN-α2b和huIFN-γ无交叉反应的人源单抗。这5株抗体在BL21(DE3)中分泌表达,有3株单链抗体能特异性结合huIFN-α1b而与无关抗原无交叉反应。结论通过噬菌体表面展示技术,从人源全合成抗体库中筛选得到3株稳定且特异结合huIFN-α1b的人源治疗用基因工程单克隆抗体。
- 龚斌王双李川王颖张全福陈哲孙丽娜梁米芳孙志伟李德新
- 关键词：干扰素I型单克隆
- 超大容量人源性抗体库的构建被引量：2
- 2004年
- 构建大容量抗体库是获得高亲和力抗体的重要基础和保障,如何构建大容量抗体库一直是被关注的热点。本文对比分析了天然库、半合成库及全合成库基因多样性的特点,指出获得多样的功能性抗体基因是建库的关键。构建大容量抗体库要从提高连接和转化效率、利用体内重组系统提高抗体基因组合多样性以及提高包装和呈现的效率等多个环节进行条件优化,提高库容量和多样性。
- 王双张锦超俞炜源
- 关键词：噬菌体抗体库基因多样性
- 新型pⅨ噬菌体展示系统的建立及初步评价
- 2005年
- 目的:构建新型噬菌体展示载体,评价其展示效果,为构建scFv库寻找新的展示体系。方法:PCR分离、扩增M13KO7中pⅨ蛋白编码基因,克隆入噬菌体展示载体PHB-gⅢ,替换原载体中的gⅢ-CT段,构建载体PHB-pⅨ,并将相对分子质量约50×103的碱性磷酸酶的编码基因分别克隆入两展示载体,观察其展示碱性磷酸酶能力的差别。结果与结论:成功构建了展示载体PHB-pⅨ,该载体具有与PHB-gⅢ相当的展示碱性磷酸酶的能力,且相同滴度的PHB-gⅢ噬菌体DNA含量略高于PHB-pⅨ噬菌体DNA含量,提示PHB-gⅢ系统展示外源蛋白时存在感染能力下降。PHB-pⅨ系统具有用于展示噬菌体抗体库的良好应用前景。
- 王双孙志伟杜威世张锦超俞炜源
- 关键词：噬菌体展示抗体库
