梁艳
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定被引量：5
- 2008年
- 为构建克伦特罗(Clenbuterol,CBL)单链抗体(scFv)表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以pCANTAB5E-CBL质粒为模板,扩增CBL的scFv基因,与pPICZαA载体重组,然后以重组质粒pPICZαA-scFv为模板扩增scFv及其相连的6个组氨酸(6×His)片段,再与载体pBV220连接,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆质粒经酶切和PCR鉴定后进行目的片段的序列测定。重组菌经温度诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用竞争ELISA检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒pBV220-scFv含有插入片段,与原序列的同源性达99.8%。重组蛋白的分子量接近37kD,能够被抗His标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为4.55ng/mL。这说明我们成功构建了重组质粒pBV220-scFv并实现了其在大肠杆菌中的表达,为进一步进行CBL免疫法快速检测奠定了一定的基础。
- 王弘梁艳杨金易刘细霞张宏斌雷红涛沈玉栋孙远明
- 关键词：克伦特罗原核表达
- 抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发酵条件的研究被引量：1
- 2009年
- 重组大肠杆菌BL21携带抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因,研究了不同培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH以及装液量对重组抗体表达量的影响,并对重组质粒稳定性进行研究。结果表明,在初始pH为7.2、装液量为25mL/250mL的LB培养基中,30℃培养菌体生长至A600nm为0.8时,42℃诱导表达6h,scFv表达量可达33.7%。工程菌在无选择压力条件下连续传代120代,保持稳定,100%的菌株携带重组质粒且经诱导后均有重组抗体的表达。
- 王弘梁艳刘细霞杨金易雷红涛沈玉栋孙远明
- 关键词：克伦特罗单链抗体工程菌
- 抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
- 2009年
- 为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%。
- 梁艳王弘杨金易刘细霞徐小艳张宏斌雷红涛沈玉栋孙远明
- 关键词：克伦特罗发酵
