杨汉东
- 作品数：101 被引量：438H指数：10
- 供职机构：湖北医药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省教育厅重点项目湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的实验研究被引量：20
- 2005年
- 目的:研究人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的可行性。方法:由人脐静脉获得间充质干细胞,纯化培养后用不同浓度的5-氮杂胞苷(5-azacytidine)诱导,透射电镜、免疫组化及RT-PCR鉴定诱导后细胞。结果:经5-氮杂胞苷诱导后的脐带血间充质干细胞在透射电镜下观察到细胞内有明显的肌丝,横纹样结构形成,核呈卵圆形,位于细胞中央位置,胞质中可见富集的糖原颗粒及线粒体结构。免疫组化可见肌钙蛋白Ⅰ染色阳性。RT-PCR方法显示能表达缝隙连接膜通道蛋白Connexin-43基因。结论:人脐带血间充质干细胞可在体外经5-氮杂胞苷诱导分化为具有典型结构的心肌细胞。
- 汤天军杨波杨汉东张有顺胡礼仪李东锋张继红
- 关键词：人脐带血间充质干细胞体外诱导心肌细胞5-氮杂胞苷
- Duchenne型肌营养不良症伴充血性心力衰竭1例
- 2007年
- 许浩闵新文杨汉东陈欣李东峰何培根
- 关键词：DUCHENNE型肌营养不良心力衰竭充血性
- 吡格列酮预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及线粒体ATP敏感性钾通道的影响
- 2007年
- 目的:观察吡格列酮(Pio)对在体大鼠心肌缺血/再灌注心肌细胞凋亡及线粒体ATP敏感性钾通道影响,探讨Pio对心肌缺血损伤保护作用及其机制.方法:24只SD大鼠随机分为假手术组(SO组),缺血/再灌注组(I/R组),Pio预处理组(Pio组)和线粒体ATP敏感性钾通道阻滞剂5-羟基葵酸(5-HD)+Pio组(5-HD+Pio组)4组.各组于缺血/再灌注前24h尾静脉注射相应溶媒及药物,5-HD+Pio组注入5-HD10mg/kg30min后再给予Pio3mg/kg;Pio组只注入Pio3mg/kg;SO组不结扎前降支,4h后取出心脏;余三组结扎前降支30min,再灌注4h后取出心脏.用透射电镜观察心肌线粒体超微结构的改变;采用TUNEL法和免疫组化法检测缺血心肌细胞凋亡和Bcl-2,Bax,Caspase-3蛋白的表达以及RT-PCR法测FasmRNA的表达.又另取18只SD大鼠随机分成SO,I/R和Pio组,行心肌梗死范围的测定.结果:①与I/R组相比,Pio组线粒体损伤程度明显减轻;②与I/R组(34.93±5.55)%相比,Pio组(20.24±3.93)%心肌梗死范围明显减少(P<0.05);③与I/R组相比,Pio组能明显增加Bcl-2蛋白的阳性细胞指数(P<0.05),降低心肌细胞凋亡率(P<0.05)及Bax,Caspase-3蛋白的阳性细胞指数(P<0.05),下调FasmRNA的表达水平.I/R组与5-HD+Pio组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论:Pio预处理可通过保护心肌线粒体结构,减少心肌细胞凋亡及梗死范围,保护缺血心肌损伤作用可被线粒体ATP敏感性钾通道阻滞剂所对抗.
- 李健冯义柏田莉郎明健杨汉东
- 关键词：吡格列酮缺血再灌注钾通道
- 靶向大鼠CTGF的shRNA表达载体的构建和作用分析被引量：5
- 2008年
- 目的:构建并筛选靶向大鼠结缔组织生长因子(CTGF)的shRNA表达载体.方法:根据大鼠CTGF mRNA序列设计并构建4个靶向大鼠CTGF基因的shRNA干扰质粒;然后以脂质体转染试剂将目的质粒转染至大鼠心肌成纤维细胞,流式细胞技术分选出成功转染的阳性细胞.通过RT-PCR和Western Blot技术对成功构建的4个shRNA干扰质粒进行有效性筛选,分析其CTGF mRNA及蛋白表达水平.结果:酶切证实转录shRNA的目的基因片段已成功克隆入载体,经测序证明与设计的相同;在转染成纤维细胞48h后,与空白对照组比较,有3组细胞CTGF mRNA及蛋白表达水平明显降低;而转染非特异阴性质粒对照组CTGF mRNA及蛋白表达水平无明显变化.结论:成功构建并筛选出靶向大鼠CTGF的shRNA真核表达质粒重组体,为进一步进行体内外心肌纤维化的RNA干扰研究奠定了基础.
- 郎明健曾秋棠郭敏杨汉东闵新文
- 关键词：结缔组织生长因子RNA干扰心内膜心肌纤维化
- NR6A1过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达被引量：3
- 2012年
- 目的:构建核受体家族分子NR6A1重组腺病毒载体,观察NR6A1蛋白在血管平滑肌细胞中的表达。方法:从cDNA文库中,利用PCR方法钓取目的基因NR6A1,采用In-Fusion克隆技术将目的基因插入腺病毒穿梭质粒pDC315-3FLAG,将重组质粒与辅助包装质粒pBHG loxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒。运用蛋白免疫印迹技术检测NR6A1蛋白表达水平;运用免疫荧光化学技术检测NR6A1蛋白在平滑肌细胞中的亚细胞定位。结果:通过In-Fusion技术获得pDC-NR6A1-3FLAG阳性质粒,该质粒在HEK293细胞中重组成腺病毒Ad-NR6A1;蛋白免疫印迹技术发现pDC-NR6A1-3FLAG重组质粒及Ad-NR6A1均能够正确表达NR6A1蛋白;而且该蛋白定位于培养的血管平滑肌细胞核中。结论:In-Fusion技术能够高效克隆NR6A1基因,所构建的NR6A1过表达腺病毒能够正确表达NR6A1核蛋白,NR6A1定位于血管平滑肌细胞核中。
- 张亚辉钱航张志峰杨汉东闵新文郎明健张鹏
- 关键词：平滑肌细胞
- 右颈内静脉留置导管致室性心律失常一例被引量：1
- 2015年
- 心脏换瓣术后的室性心律失常多数与手术创伤、应激、电解质紊乱及心脏自身病变等有关,但是个别可能与中心静脉留置导管有关。本院发生1例与右颈内静脉留置导管相关的室性心律失常,现报道如下：1病例简介朱某某,男,25岁,身高168 cm,主因“劳累后乏力、气促3年”入本院心脏病中心。
- 许浩杨汉东闵新文
- 关键词：颈内静脉留置导管室性心律失常
- 小鼠Pim-3基因siRNA慢病毒载体的构建及表达
- 2012年
- 目的:本研究拟构建针对Pim-3基因的siRNA慢病毒载体,诱导靶细胞中Pim-3基因沉默。方法:分析Pim-3 mRNA序列特征,根据siRNA设计原则,设计并合成特异性针对小鼠Pim-3的siRNA靶DNA序列及阴性对照序列。用限制性核酸内切酶将pGCSIL-GFP载体线性化,将寡DNA片段退火成含有粘性末端的DNA双链后,与慢病毒骨架质粒连接转化至大肠杆菌中进行重组,运用PCR技术筛选阳性克隆并测序,得到pSC-Pim-3 shRNA质粒。采用脂质体将pSC-Pim-3 shRNA质粒和辅助包装质粒共转染到HEK293细胞中包装形成慢病毒。采用倍比稀释法测定慢病毒滴度。慢病毒感染NIH3T3细胞,运用实时定量PCR技术检测Pim-3基因mRNA表达水平,运用蛋白免疫印迹技术检测Pim-3蛋白表达水平。结果:酶切后获得7.5 kb的pGCSIL-GFP片段。DNA片段成功连接到pGCSIL-GFP载体;重组慢病毒的滴度约为2×109TU/mL。慢病毒能够高效感染靶细胞,并显著抑制内源性Pim-3基因的mRNA(抑制率超过70%)和蛋白(抑制率超过80%)表达。结论:针对Pim-3基因靶序列CCTCTTCGACT-TCATCACT的shRNA重组慢病毒能够有效沉默靶细胞Pim-3基因。
- 陈继舜钱航杨汉东闵新文郎明健张鹏
- 关键词：PIM-3RNA干扰慢病毒载体
- 结缔组织生长因子与原发性高血压模型大鼠心肌纤维化的关系及药物干预研究
- 2008年
- 目的评价结缔组织生长因子(CTGF)与原发性高血压模型大鼠(SHR)心肌纤维化的关系,以及CTGF作为抗心肌纤维化靶点的敏感性。方法将32只14周龄雄性SHR随机分为SHR对照组、卡托普利组、硝苯地平组和螺内酯组各8只,SHR对照组不给予任何药物,其他3组分别灌胃给予卡托普利100 mg.kg-1.d-1、硝苯地平30 mg.kg-1.d-1、螺内酯30 mg.kg-1.d-1,共12周。同时设8只同龄雄性SD大鼠为正常对照组。免疫组化法和RT-PCR法检测各组大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)和CTGF表达情况,MASSON染色分析测量胶原容积分数(CVF),碱水解法测定羟脯氨酸(Hypro)含量。结果SHR对照组左室重量指数(LVI)、CVF、Hypro、CTGF、TGF-β1表达均明显高于正常对照组(均P<0.01);与SHR对照组比较,卡托普利组和螺内酯组LVI、CVF、Hypro、CTGF、TGF-β1表达显著降低(均P<0.05);CTGF、TGF-β1、CVF、Hypro和LVI呈高度正相关(P<0.01)。结论CTGF与SHR心肌纤维化关系密切,卡托普利、螺内酯能抑制其表达,CTGF可作为新的抗心肌纤维化靶点。
- 许明闵新文杨汉东李莉李东峰
- 关键词：卡托普利硝苯地平螺内酯结缔组织生长因子心肌纤维化
- 左前降支病变位置与心电图变化的分析被引量：2
- 2006年
- 目的结合冠状动脉造影(CAG)探讨心电图作为判断左前降支病变位置的作用及其在临床上的应用。方法对75例前壁急性心肌梗死(AMI)者,行CAG及经皮冠状动脉腔内成形术(PCI),并对其发病后胸导联变化最明显的心电图进行分析。结果CAG发现,左前降支近段病变者,其心电图具有相似的特征,即胸前导联ST段明显抬高,而下壁导联ST段压低;而左前降支远段病变者其下壁导联ST段无明显下移。同时近段病变者进行急诊PCI术的成功率高于远段病变者。结论前壁AMI者,下壁导联的变化可以预测左前降支闭塞的位置并指导治疗。
- 闵新文许浩杨汉东陈欣李东峰何培根冯应君
- 关键词：急性前壁心肌梗死左前降支心电图
- 非ST抬高急性冠脉综合征患者内皮祖细胞与侧支循环的关系探讨
- 2008年
- 目的探讨非ST抬高急性冠脉综合征（NSTE-ACS）冠状动脉有重度狭窄或完全闭塞患者循环内皮祖细胞（EPCs）与侧支循环的关系。方法将32例NSTE-ACS患者，经冠状动脉造影证实冠脉有重度狭窄或完全闭塞的，将其侧支循环根据Rentrop分级分为0、1、2、3级。Rentrop分级≥2级者归为侧支循环良好组（coil＋组）（n=16），≤1级者归为侧支循环不良组（coil-组）（n=16），共二组。经造影导管抽取血样标本，分离培养单个核细胞。激光共聚焦显微镜鉴定Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-acLDL）和FTTC标记的荆豆凝集素-1（FITC-UEA-1）双染色阳性细胞为正在分化的EPCs，并计数。采用改良的Boyden小室和MTT法分别测定其迁移能力及增殖能力。结果coll＋组内皮祖细胞数量[（55．4±10．9EPCs／视野）]（×400）显著高于coil-组（23．1±4．6）（P〈0．01），其迁移能力和增殖能力也明显强于coll-组（P〈0．01）；EPCs数量、迁移能力、增殖能力与侧支循环程度呈正相关（r=0．873，0．529，0．792，P〈0．01）。结论非ST抬高急性冠脉综合征患者循环内皮祖细胞与侧支循环的形成之间存在着关联性。
- 闵新文陈继舜杨汉东陈欣李东峰李娟
- 关键词：急性病综合征侧支循环
