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可溶性MHC-肽四聚体技术及其应用进展被引量：5: 2007年; 抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)在控制病毒感染和肿瘤免疫治疗中具有重要作用。而研究、制备由主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子的α链和β2微球蛋白、抗原肽以及有荧光染料标记的连接蛋白组成的四聚体,能够为鉴定特异性CTL及研究细胞免疫机制提供简便、有效途径,同时也为有关疾病的细胞免疫治疗提供新的方法。; 李慧忠畅继武; 关键词：细胞毒T淋巴细胞流式细胞仪四聚体

gp96-抗原肽复合物疫苗在肾癌治疗中的应用进展: 2006年; 李慧忠畅继武; 关键词：肾癌肿瘤免疫

草酸对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化损伤的实验研究被引量：1: 2006年; 目的通过研究草酸对体外培养的Wistar大鼠肾小管上皮细胞造成的脂质过氧化损伤及柠檬酸的保护作用,以探讨尿路结石的形成机制。方法分离、培养正常雄性Wistar大鼠的肾小管上皮细胞,在原代培养第5天时,将细胞分成3组(空白对照组、草酸组及柠檬酸组),分别加入正常培养液、含有草酸(5mM)的培养液及含有草酸(5mM)和柠檬酸(3mg/mL)的培养液,分别于2h后测定各组细胞培养基中丙二醛的及乳酸脱氢酶含量。结果①草酸组和柠檬酸组细胞培养基中乳酸脱氢酶含量均明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0·05);②与柠檬酸组相比,草酸组细胞细胞培养基中乳酸脱氢酶含量更高,两者之间比较差异有统计学意义(P<0·05);③草酸组和柠檬酸组细胞培养基中丙二醛的含量均明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0·05);④与柠檬酸组相比,草酸组细培养基中丙二醛的含量更高,两者之间比较差异有统计学意义(P<0·05)。结论草酸对体外培养的Wistar大鼠肾小管上皮细胞可以造成脂质过氧化损伤,而外源性柠檬酸能够减轻草酸对体外培养的Wistar大鼠肾小管上皮细胞造成的脂质过氧化损伤作用。; 李成文孙光邓耀良李慧忠常峰; 关键词：草酸肾小管上皮细胞

人天然噬菌体抗体库的构建及抗gp96抗体的初步筛选: 2009年; 目的构建人天然Fab段抗体库，并用从膀胱尿路上皮癌组织中提取纯化的gp96筛选抗gp96特异性抗体，为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml，分离淋巴细胞，提取总RNA，经逆转录合成cDNA，设计多对引物，以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和噬粒载体pComb3经Sac Ⅰ和Xba Ⅰ酶切，由T4 DNA连接酶连接，电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue，扩增后提取噬粒，构建轻链库。轻链库和重链Fd段PCR产物经Xho Ⅰ和Spe Ⅰ酶切，以同样方法连接后转化XL1-Blue，加入辅助噬菌体VCSM13，产生噬菌体抗体全库。提取噬粒酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。分别以噬菌体全库和提取的噬粒为模板，以轻、重链不同引物组合进行PCR扩增。应用亲和层析和离子交换层析从膀胱癌组织中提取纯化gp96，并以此为抗原对构建的抗体库进行3轮筛选。结果提取的淋巴细胞总RNA及逆转录合成的cDNA质量好，部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab全库库容达6．6×10^6，酶切和PCR显示有插入片段。用从膀胱尿路上皮癌组织中提取出的gp96进行3轮筛选，抗体库得到68倍的富集。结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体、肿瘤免疫治疗打下基础。; 马小兵畅继武李成文李慧忠王馨; 关键词：噬菌体抗体库抗体FAB段 GP96 膀胱尿路上皮癌

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李慧忠

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