李坚
- 作品数：18 被引量：36H指数：3
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- IL－1α诱导牛脑微血管内皮细胞释放血小板衍生性生长因子被引量：2
- 1996年
- 目的：研究白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）诱导牛脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）释放血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ），以及药物对由之引起的牛脑微血管平滑肌细胞（ＢＣＭＳＭＣ）增殖的拮抗作用。方法：体外培养ＢＣＭＥＣ和ＢＣＭＳＭＣ，结晶紫染色法测定细胞增殖。结果：ＩＬ－１α不能直接促进ＢＣＭＳＭＣ的增殖；但经ＩＬ－１α刺激的ＢＣＭＥＣ培养上清能显著地促进ＢＣＭＳＭＣ的增殖。这种增殖作用与ＩＬ－１α剂量呈正相关，并且可被抗ＰＤＧＦ抗体中和。欧芹素乙（Ｉｍｐ），异欧芹素乙（ｉｓｏ－Ｉｍｐ），６－（α，α－ｐｈｅｎｙ－ｌａｃｅｔｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ－５－ｍｅｔｈｙｌ－４，５－ｄｉｈｙｄｒｏ－３（２Ｈ）－ｐｙｒｉｄａｚｉｎｏｎｅ（ＰＭＤＰ）不影响ＩＬ－１α诱导ＢＣＭＥＣ释放ＰＤＧＦ，但对ＰＤＧＦ促ＢＣＭＳＭＣ增殖呈剂量依赖的拮抗。结论：ＩＬ－１α促进ＢＣＭＥＣ释放ＰＤＧＦ。ＩＬ－１α对ＢＣＭＳＭＣ增殖的促进作用需经ＰＤＧＦ等生长因子的介导。Ｉｍｐ，ｉｓｏ－Ｉｍｐ，ＰＭＤＰ拮抗ＰＤＧＦ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖。
- 李坚张珉芮耀诚
- 关键词：白细胞介素-1Α脑血管
- 重组酶介导的盒式交换及其应用被引量：1
- 2000年
- 郑敬民李坚傅继梁
- 关键词：重组酶
- 山莨菪碱抑制酵母多糖刺激小鼠巨噬细胞释放前列腺素及白三烯
- 1989年
- 酵母多糖刺激[~3H]AA预标的小鼠腹腔巨噬细胞可释放[~3H]AA代谢物LTC_4,LTB_4,TXB_2,6-keto-PGF_(1α)及PGE_2.山莨菪碱可显著抑制上述刺激释放作用,使总~3H释放量及各[~3H]AA代谢物释放量均显著减少.这种抑制作用随山莨菪碱剂量增加而增强.当其浓度为0.5 mmol/L时.总~3H释放量下降46％(2 h),45％(5 h)及34％(15 h).本实验结果进一步证实山莨菪碱是通过抑制AA释放而减少PG及LT的形成.
- 岳天立曾国钱李坚
- 关键词：山茛菪碱酵母多糖巨噬细胞
- 基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用
- 2001年
- 目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的置换型打靶载体 ,经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后 ,用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞 R1株进行基因转染 ,经 G418/ 6 - TG(6 - thioguanine)分组药物筛选 ,进行 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo载体的应用研究。结果 :得到了与设计一致的置换型打靶载体 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo;将线性化的打靶载体导入 ES细胞后 ,能与靶位点有效地发生同源重组 ,获得了 2 0个靶基因被灭活了的 ES细胞克隆。结论 :此研究成功构建了含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6针对小鼠 HPRT基因位点的置换型打靶载体 。
- 郑敬民李坚杨桦傅继梁
- 关键词：基因打靶HPRT基因CRE重组酶小鼠
- 定点突变小鼠凝血因子Ⅸ胚胎干细胞基因打靶载体的构建被引量：4
- 1999年
- 目的 构建定点突变的小鼠凝血因子Ⅸ胚胎干(ES)细胞基因打靶载体。方法 在小鼠Ⅸ因子基因第8 外显子中分别引入三个定点突变,构建置换型打靶载体转染胚胎干细胞,经药物筛选后挑取抗性细胞。结果 成功引入点突变并构建置换型打靶载体,转染ES细胞后经药物筛选得到抗性细胞克隆。结论 体外定点突变系统可以对基因进行精细的修饰,为建立更精确地模拟人类疾病的动物模型打下基础。
- 李坚戴旭明杨桦傅继梁
- 关键词：基因打靶血友病
- 条件性基因打靶及其研究进展被引量：3
- 2001年
- 条件性基因打靶是在常规的基因打靶 (基于同源重组原理的基因打靶 )的基础上 ,结合重组酶介导的位点特异性重组技术而发展起来的一种基因打靶新方法。与常规的基因打靶方法相比 ,它对生物基因组的修饰具有时空可控性 ,显示出广阔的应用前景。本文主要就条件性基因打靶的原理、方法。
- 郑敬民李坚傅继梁
- 关键词：CRE重组酶
- 定点突变小鼠凝血因子Ⅸ胚胎干细胞基因打靶载体的构建
- 1999年
- 李坚戴旭明杨松傅继梁
- 关键词：定点突变血友病基因转移外显子
- 褶合光谱法用于氟康唑配伍稳定性的考察被引量：3
- 1996年
- 本文采用诏合光谱法考察了氟康唑与头孢唑啉钠联用在不同温度、酸碱度条件下的稳定性，以量化的指标（褶合光谱差值的形式）反映药物稳定的程度。
- 李坚吕惠春刘荔荔
- 关键词：褶合光谱法药物稳定性氟康唑头孢唑啉钠
- TNF,IL-1对脑微血管细胞PDGF释放,c-sis c-fos基因表达的影响以及药物的保护作用
- 李坚
- 含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析
- 1999年
- 克隆适于构建可调控基因打靶载体的小鼠糖皮质激素受体（ＧＲ）基因片段，为建立糖皮质激素受体基因缺陷型小鼠模型奠定基础。用ＰＣＲ扩增小鼠ＧＲ基因第二外显子上５６２ｂｐ的核酸片段作为探针，筛选小鼠基因组文库，共获得６个阳性克隆。对Ｃ１０克隆进行详细的测序和酶切图谱和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析后获得一６．５ｋｂ的基因片段。该片段含完整的ＧＲ基因第二外显子，左右分别有３９ｋｂ和１４ｋｂ的ＤＮＡ片段可作为下一步构建基因打靶载体的同源臂。
- 李坚以平傅继梁
- 关键词：基因打靶糖皮质激素受体基因
