朱江
- 作品数：23 被引量：28H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一种简易快速的猪囊胚差异染色方法
- 本发明公开了一种简易快速的猪囊胚差异染色方法，属于发育生物学技术领域。是对猪囊胚进行表面活性剂TritonX100透膜处理后，利用两种核染料碘化丙啶和Hoechst的分子大小上的区别对囊胚外层滋养层细胞和内侧的内细胞团细...
- 格日乐其木格刘忠华何文腾朱江
- 文献传递
- 一种提高猪体细胞核移植效率的方法
- 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，属于繁殖或授精方法领域。通过用小分子药物Calyculin A处理供体细胞，诱使供体核染色质凝聚、甲基化升高和乙酰化降低，体细胞核表观遗传修饰的“归零”，然后进行核移植，构建...
- 孔庆然刘忠华石永乾朱江王娟
- 猪Nanog基因四环素诱导干扰载体的构建和鉴定
- 2011年
- Nanog基因是在早期胚胎和干细胞等多能性细胞中特异表达的重要基因,但有关猪Nanog基因功能的相关研究甚少。四环素诱导干扰载体是一种可通过四环素等药物条件性诱导干扰目的基因的载体,尤其适用于在发育过程中起着关键作用的基因沉默。常规的四环素干扰系统为二元载体,与一元载体相比获得针对特定基因干扰的稳定细胞系所需周期更长。首先通过构建pGenesil1.0-shRNA重组干扰载体,瞬时转染稳定过表达猪Nanog基因的猪胎儿成纤维细胞后通过Realtime-PCR筛选出干扰效率可达80%以上的干扰片段。之后将筛选得到的干扰片段插入到改造的一元四环素诱导干扰载体TREsilencer,对稳定表达猪Nanog基因的猪胎儿成纤维细胞进行了瞬时转染。实验分别通过光密度检测以及Realtime-PCR检测了不同浓度doxycycline的诱导效率和干扰效率。结果表明,所构建的四环素诱导干扰载体TREsilencer-shRNA5随着四环素浓度的增加,诱导Nanog基因的干扰效率增加,在处理浓度为1μg/ml时干扰效率可达70%以上,为后续得到可诱导的稳定干扰猪Nanog基因的细胞系和进一步研究猪Nanog基因功能奠定了基础。
- 张力罗一博牟彦双朱江李慧刘忠华
- 关键词：四环素NANOG
- 5-AZA-2'-Deoxyctidine对猪核移植胚胎体外发育的影响
- 与体内胚胎相比,核移植来源的体外胚胎往往具有较高的DNA甲基化水平,减少供体细胞或克隆胚胎中DNA甲基化水平,或许能够提高克隆效率。5-aza-2’-deoxyctidine(5-aza-dC)是一种DNA甲基转移酶的抑...
- 郇延军朱江王健宇刘忠华
- 关键词：5-AZA-DC核移植胚胎
- 文献传递
- 一种提高猪体细胞核移植效率的方法
- 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，属于繁殖或授精方法领域。通过用小分子药物Calyculin A处理供体细胞，诱使供体核染色质凝聚、甲基化升高和乙酰化降低，体细胞核表观遗传修饰的“归零”，然后进行核移植，构建...
- 孔庆然刘忠华石永乾朱江王娟
- 文献传递
- PiggyBac转座子介导EGFP在猪体细胞和克隆胚胎中的表达
- PiggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫Trichoplusia ni.的DNA转座子,因其可以携带长达14kb的DNA片段在多个物种的基因组上进行转座,所以可以作为良好的遗传操作工具。本实验以EGFP为标记基因,转座子...
- 罗一博张力武美玲朱江刘忠华
- 关键词：PIGGYBAC猪体细胞克隆胚胎转基因
- 文献传递
- TSA浓度及处理时间对猪体细胞核移植胚胎体外发育影响被引量：3
- 2011年
- 曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂。有研究表明TSA处理可以提高核移植胚胎的发育率。为探讨TSA对猪核移植胚胎发育的作用,试验重点研究了TSA浓度及处理时间对核移植胚胎体外发育的影响,同时也探索了TSA对不同供核细胞构建的重构胚体外发育的影响。结果表明,40nmo·lL-1的TSA处理核移植胚胎可以显著提高其体外囊胚发育率;40nmo·lL-1TSA处理重构胚12和24h,两组重构胚的卵裂率与囊胚发育率差异不显著;40nmo·lL-1TSA处理12h对不同供核细胞构建的重构胚均具有提高囊胚发育率的效果,不同供核细胞所构建的重构胚发育率无显著差异。由此可知,40nmo·lL-1TSA处理12或24h可以提高猪体细胞核移植胚胎体外发育能力。
- 黄波郇延军石永乾王峰何文腾张鑫淼刘仲凤朱江吕明刘忠华
- 关键词：曲古抑菌素A体细胞核移植体外发育
- TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达被引量：6
- 2011年
- 不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。
- 孔庆然朱江黄波郇延军王峰石永乾刘仲凤武美玲刘忠华
- 关键词：TSA体细胞核移植胚胎发育外源基因表达
- 转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点的研究被引量：18
- 2009年
- 主要采用了绝对定量PCR和热不均一交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR),检测了体细胞核移植技术生产的绿色荧光蛋白转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点,并利用旁侧PCR(Junction PCR)对整合位点进行确定,同时进一步分析了整合位点的纯合性.结果表明,绝对定量PCR可以准确有效地检测外源基因拷贝数,标准曲线为:log2N(拷贝数)=-0.9354△Ct+3.4116(R2=0.9974,P<0.001),两只转基因猪中外源基因拷贝数分别为30.85±1.77和18.87±1.34;TAIL-PCR能成功地克隆转基因猪中外源基因整合位点,得到25条特异性条带,经BLAST比对,共获得TgInS1(1440bp)、TgInS2(1263bp)和TgInS3(1861bp)3个整合位点.以整合位点侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合引发Junction PCR,得到预计大小的特异性片段,确定了整合位点上、下游侧翼序列的准确性.采用整合位点5′上游和3′下游侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合,进行Junction PCR,在两只转基因猪中都得到与野生型猪一致的侧翼序列特异性引物扩增片段,表明我们获得的转基因猪都为整合位点杂合子.初步建立了绝对定量PCR和TAIL-PCR对外源基因拷贝数和整合位点检测的体系,为今后研究外源基因在转基因猪中遗传和表达的稳定性打下了基础.
- 孔庆然武美玲朱江格日乐其木格郇延军尹智牟彦双刘忠华
- 关键词：转基因猪拷贝数整合位点TAIL-PCR
- 猪裸卵体外胞质成熟研究(英文)
- 2012年
- [目的]改善猪裸卵的体外成熟质量,为建立稳定有效的裸卵培养体系提供科学依据。[方法]以第一极体排出比例、卵母细胞谷胱甘肽含量、亮甲酚蓝阳性率以及早期胚胎发育潜能等为主要衡量指标研究了卵泡壁颗粒细胞共培养对猪裸卵胞质成熟的影响。[结果]体外成熟结果表明,相对于DO组,DO+MGC组卵母细胞排除第一极体的比例无显著差异,但核成熟的进程得到了改善,更接近于COC组;成熟卵母细胞GSH含量检测结果表明,DO+MGC组平均每个卵母细胞谷胱甘肽含量(光密度1053.67)与COC组(1426.00)和COC+GC组(1541.00)差异不显著,但DO组(724.67)显著低于COC组和COC+GC组(P<0.05);G6PDH活性检测结果表明,DO+MGC组BCB阳性卵母细胞比例(88.26%)与COC组(92.75%)以及DO组(82.86%)差异均不显著,但DO组显著低于COC组(P<0.05);成熟卵母细胞孤雌激活后的发育结果表明,DO+MGC组卵裂率(94.98%)和囊胚率(43.67%)显著高于DO组卵裂率(52.54%)和囊胚率(8.97%)(P<0.05),与COC组卵裂率(97.11%)和囊胚率(38.30%)差异不显著;成熟卵母细胞体外受精后的发育结果表明,DO+MGC组卵裂率(72.65%)与DO组卵裂率(63.59%)无显著差异,但DO+MGC组囊胚率(17.79%)显著高于DO组(9.88%)(P<0.05)。[结论]卵泡壁颗粒细胞共培养可以显著改善裸卵体外成熟的胞质成熟质量并进而提高后续发育潜力。
- 郇延军解炳腾朱江孔庆然刘忠华
- 关键词：体外成熟
