房殿亮
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Runx3基因对HepG2细胞顺铂耐药性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨Runx3基因对HepG2细胞耐药性的影响及可能机制。方法取在1.6μg/ml顺铂(CDDP)下生长良好的HepG2耐药细胞(HepG2/CDDP-1.6),建立耐药HepG2/CDDP的动态变化模型HepG2/CDDP/2.0,并予以甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理;将Runx3-shRNA表达载体转染HepG2/CDDP-1.6细胞,RT-PCR检测处理及转染前后细胞Runx3 mRNA的表达。MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪分析细胞周期,Hoechst 33258检测凋亡,Western blot检测P-gp表达的变化。结果在动态变化模型中随CDDP诱导时间的延长,Runx3 mRNA的表达逐渐降低。5-Aza-CdR处理后Runx3 mRNA的表达增加,细胞生长受到明显抑制,S期细胞逐渐增加,凋亡细胞明显增多,细胞内P-gp的表达减少。转染Runx3-shRNA载体后HepG2/CDDP-1.6细胞对CDDP的耐受性增强,G1期细胞增加,P-gp的表达增加。结论 Runx3基因的表达可抑制HepG2/CDDP耐药的形成,提高HepG2/CDDP细胞对化疗药物的敏感性。
- 郭元红陈伟庆房殿亮
- 关键词：RUNX3耐药DNA甲基化RNA干扰
- p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究
- 2012年
- 目的:利用p15-shRNA表达载体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90nmol·L-1)的干扰质粒p15-shRNAY2和阴性对照质粒(shRNA-F)转染HepG2/顺铂/2.0细胞后48h检测p15荧光阳性细胞,筛选最佳干扰浓度;以筛选结果转染HepG2/顺铂/2.0细胞,与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:最佳干扰浓度为60nmol·L-1;与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,p15-shRNAY2转染细胞的存活率明显增加,G1期细胞明显减少,p15、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.01)。结论:p15-shRNA可抑制p15基因表达,干扰细胞周期使G1期的比例减少,增加HepG2/顺铂/2.0对顺铂的耐药性。
- 朱振双陈伟庆房殿亮张杨
- 关键词：细胞周期P15基因肝癌顺铂耐药SHRNA干扰
- Runx3-shRNA表达载体的构建及其干扰作用的检测
- 2012年
- 目的构建Runx3基因shRNA重组表达质粒,并检测其干扰作用。方法人工合成靶向Runx3基因的shRNA序列,克隆至pGenesil-1.1表达载体上,构建重组表达质粒Runx3-shRNA,转染人耐药肝癌HepG2细胞;采用半定量RT-PCR及Western blot法检测重组表达质粒对HepG2细胞中Runx3基因的转录和表达水平的影响。结果重组表达质粒Runx3-shRNA经酶切及测序证明构建正确;其转染人耐药肝癌HepG2细胞后,细胞Runx3基因的转录和蛋白表达水平均明显降低,与空白对照组和阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建了Runx3-shRNA表达质粒,为进一步研究Runx3基因在肿瘤耐药细胞中的作用奠定了基础。
- 郭元红陈伟庆房殿亮
- 关键词：RUNX3基因RNA干扰
- 干扰SREBP-1c对内质网应激状态下L02和HepG2肝细胞脂质沉积的影响被引量：4
- 2013年
- 目的构建SREBP-1c基因的miRNA真核表达载体,观察其对内质网应激状态下L02和HepG2肝细胞脂质沉积的影响。方法设计并构建SREBP-1c基因的3个miRNA干扰载体,经测序鉴定miRNA载体构建成功后转染肝细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。Western blot检测转染后SREBP-1c的表达;甘油三酯测定和油红O染色检测细胞内脂质沉积;Western blot检测SREBP-1c下游脂代谢相关基因脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC1)的表达。结果靶向干扰SREBP-1c的miRNA真核表达载体构建成功。Westernblot结果显示,转染SREBP-1c-1miRNA和SREBP-1c-3miRNA载体后,L02和HepG2细胞内SREBP-1c蛋白水平表达均明显减低(P<0.05),SREBP-1c-1miRNA的干扰效果最好(P<0.05)。与对照组相比,转染SREBP-1c-1miRNA载体后L02和HepG2肝细胞内甘油三酯含量均明显降低(P<0.05),细胞内脂滴明显减少;FAS和ACC1蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 SREBP-1c基因沉默通过FAS/ACC1降低了内质网应激状态下肝细胞脂质合成。
- 房殿亮宁波沈薇万颖
- 关键词：SREBP-1CFAS
- SCAP-SREBP-1c-ACC1在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用。方法以人肝细胞L02及人肝肿瘤细胞HepG2为研究对象,利用1μmol/L毒胡萝卜素(Thapsigargin)诱导肝细胞建立内质网应激模型,设未处理细胞作为对照;采用酶比色法检测细胞内甘油三酯含量,Real-time PCR法检测固醇调节元件结合蛋白-1c裂解激活蛋白[sterol regulatory element binding protein-1c(SREBP-1c)cleavage-activating protein,SCAP]基因mRNA水平,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白-78(glucose-regulated protein-78,GRP-78)、SCAP、SREBP-1c、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl-CoA carboxylase 1,ACC1)蛋白的表达水平。结果在内质网应激状态下,实验组两种细胞中甘油三酯水平、SCAP基因mRNA水平以及GRP-78、SCAP、SREBP-1c、ACC1蛋白的表达水平较对照组均明显增加(P均<0.01)。结论已成功建立内质网应激脂肪变性细胞模型。SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路可能介导内质网应激状态下肝细胞脂肪变性。
- 房殿亮宁波沈薇万颖
- 关键词：脂肪变性内质网固醇调节元件结合蛋白
- 内质网应激诱导肝细胞脂肪沉积及可能机制被引量：10
- 2012年
- 目的利用毒胡萝卜素诱导肝细胞内质网应激模型,观察在内质网应激状态下肝细胞脂肪沉积情况,并初步探讨其分子机制。方法以人L02、HepG2肝细胞株为研究靶细胞,将两种细胞均分为正常对照组和实验组(培养液内含毒胡萝卜素1μmol/L),采用三酰甘油(TG)试剂盒、油红O染色检测肝细胞脂肪沉积情况,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c、LXRs的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测GRP78、SREBP-1c、LXRs的蛋白表达情况。结果蛋白质印迹结果显示,实验组GRP78的表达较对照组升高(P<0.05),表明肝细胞内质网应激模型建立成功。在内质网应激状态下,毒胡萝卜素作用48h后实验组L02与HepG2细胞脂肪沉积均较对照组增加(P<0.01)。与对照组相比,实验组L02和HepG2细胞SREBP-1c在基因水平和蛋白水平表达均升高(P<0.05),而LXRs在基因水平和蛋白水平的表达均无变化。结论内质网应激可能通过上调SREBP-1c诱导肝细胞脂肪沉积,而LXRs未参与该过程。
- 万颖房殿亮沈薇宁波
- 关键词：内质网应激脂肪沉积固醇调节元件结合蛋白1C肝X受体
- p15基因干扰对肝癌耐药的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制p15基因对肝癌耐药的影响。方法采用浓度递增法用顺铂(cisplatin,CDDP)诱导肝癌细胞HepG2建立动态耐药模型HepG2/CDDP/2.0。脂质体法将针对p15 mRNA的siRNA(Y1、Y2、Y3)和阴性对照siRNA-F转染至HepG2/CDDP/2.0细胞,筛选最佳转染浓度和最有效的干扰序列。MTT法检测HepG2/CDDP/2.0对CDDP的半数抑制浓度(IC50)、流式细胞仪分析HepG2/CDDP/2.0细胞周期分布、RT-PCR和Western blot分别检测p15 mRNA和p15蛋白、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果成功建立肝癌耐药模型HepG2/CDDP/1.6,系中度耐药。RT-PCR显示siRNA Y3干扰效果最佳。转染后G1期细胞比例分别为53.8%(24 h),51.6%(48 h),48.8%(72 h)(P<0.05);RT-PCR和Western blot显示p15表达降低,p-gp表达增加。结论在肝癌耐药的动态过程中,随着耐药时间的延长,G1期的比例增加。抑制p15的表达可降低G1期的比例,增加肿瘤耐药性。
- 房殿亮陈伟庆
- 关键词：细胞周期P15肝癌耐药RNA干扰
- Insig-1/SCAP/SREBP-1c通路对内质网应激下肝细胞脂质代谢的影响
- 研究背景及目的:非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liverdisease，NAFLD)是目前最常见的慢性肝脏疾病之一，在发达国家成人患病率高达20％-30％，已经成为一个重要的公共健康问题。其发病...
- 房殿亮
- 关键词：内质网应激非酒精性脂肪肝脂质代谢分子机制
