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徐佳: 作品数：18 被引量：44H指数：3; 供职机构：南方医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学电子电信更多>>

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人IP10启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及在细胞中的表达: 2007年; 目的:构建IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内IP10的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法:采用基因重组技术构建含IP10启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pD sRed1-1-IP10;用脂质体瞬时转染HEK293细胞,观察IP10启动子对脂多糖(LPS)刺激的反应。结果:酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的;该表达载体在HEK293细胞静息状态下表达水平很低,经LPS刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光。结论:所构建的IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于IP10基因表达信号调控机制的研究。; 杨莉徐佳刘志锋黄劭王娟邓鹏姜勇; 关键词：转录启动子红色荧光蛋白基因基因

IP-10重组腺病毒载体的构建及其病毒制备被引量：1: 2006年; 目的利用细菌内同源重组法构建带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的!-干扰素诱导蛋白10(IP-10)重组腺病毒载体并制备重组腺病毒。方法将IP-10编码序列克隆入带有EGFP示踪的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移载体pAdTrack-CMV/IP-10,将其在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd/IP-10;酶切鉴定正确后转染HEK293细胞。收集病毒上清,PCR鉴定正确后,扩增并再次感染HEK293细胞检测病毒感染能力。结果重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在HEK293细胞中包装成有感染活性的病毒颗粒。结论成功地构建了表达IP-10蛋白的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒Ad/IP-10,为研究IP-10的蛋白功能提供了一个重要工具。; 邵紫韫刘志锋彭毅徐佳邓鹏姜勇; 关键词：增强型绿色荧光蛋白腺病毒

人髓样相关蛋白14细胞内化的分子机制研究: 目的:初步探讨人髓样相关蛋白14(Myeloid-related protein-14:MRP14)在Hela细胞内化的分子机制。方法:将MRP14与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescen...; 刘铮徐佳伍丽琼王娟邓鹏姜勇; 关键词：内化硫酸乙酰肝素蛋白多糖; 文献传递

髓样相关蛋白8真核表达载体的构建及其细胞内定位: 2010年; 目的:构建小鼠髓样相关蛋白8(MRP8)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应扩增得到MRP8编码序列,并将其克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后将重组质粒瞬时转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察结果。结果:重组质粒经聚合酶链反应、酶切和测序鉴定证明构建正确,并且该质粒能够在NIH3T3细胞的胞浆、胞核中广泛表达,表达产物主要定位在细胞核中。结论:成功构建带有HA标签的MRP8真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究MRP8作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具。; 伍丽琼吴翠玲王娟徐佳邓鹏姜勇; 关键词：血凝素类转染细胞内定位

串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨: 2009年; 目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF。利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化。结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0.5ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达。; 刘芸邓鹏刘铮徐佳吴向玲姜勇; 关键词：高迁移率族蛋白B1

高迁移率族蛋白与真核基因表达调控被引量：24: 2005年; 高迁移率族蛋白(high mobility group protein,HMG)是一系列的染色质相关蛋白,广泛存在于真核生物细胞中,含量丰富,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的高迁移率而得名.HMG蛋白家族可分为HMGB、HMGA和HMGN三类亚家族,各亚家族有其特征的结构域,这些结构域介导了HMG和DNA或染色质相关区域的相互作用.现已发现这些蛋白质具有多种重要生物学功能,其中几乎所有HMG都可以通过修饰、弯曲或改变染色质/DNA的结构,促进各种蛋白质因子形成大分子复合物来调节基因转录.; 徐佳刘志锋姜勇; 关键词：迁移率聚丙烯酰胺凝胶电泳真核生物细胞染色质 G蛋白 HMG

HMGB1内化介导的晚期炎症反应的分子机制研究: 全身性炎症反应综合症(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)是因感染或非感染因素作用于机体而引发的失控的,自我持续放大和破坏性的全身性炎症反应,其导致的多器官功能衰竭...; 徐佳; 关键词：高迁移率族蛋白B1 白细胞介素1Β PYROPTOSIS 半胱氨酸蛋白酶-1 组织蛋白酶B 晚期糖基化终末产物受体; 文献传递

食欲素A对维持性血液透析患者睡眠障碍的影响: 血液透析（血透）发展至今已有100多年的历史，目前已成为ESRD患者的主要治疗方法之一。2000年美国共有约40万ESRD病人在接受血透治疗，并且这一数值正在以每年增长7%的速度上升。尽管血透挽救了很多ESRD患者的生命...; 徐佳; 关键词：慢性肾脏病血液透析睡眠障碍食欲素A 血液灌流; 文献传递

内毒素诱导性基因启动子结合蛋白的筛选新方法及其应用被引量：2: 2008年; 目的建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法。方法选择6只SPF级BALB／c小鼠，模型组经尾静脉注射脂多糖（LPS）25mg／kg，使平均动脉压（MAP）降至40mmHg（1mmHg=0．133kPa）造成内毒素休克，然后迅速处死，正常对照组同期处死，取肝脏组织。利用生物素一链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因（LIG）启动子的结合蛋白。用聚合酶链反应（PCR）扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针，提取动物肝脏组织胞核蛋白，与制备的LIG启动子探针进行孵育，再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物，使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白，使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分离样品蛋白，并对凝胶进行银染显色，比较模型组与正常对照组的差异条带。结果两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带。分析差异条带显示，与正常对照组比较，在低亲和力作用水平，LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强，而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱；在DNA-蛋白质高亲和力作用水平，则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强，有1个蛋白同启动子的相互作用消失。结论成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法，为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路，并从“转录调控组学”角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础。; 王娟刘志锋徐佳杨莉李志杰邓鹏姜勇; 关键词：DNA-蛋白质相互作用启动子基因表达调控

髓样相关蛋白14真核表达载体的构建及其细胞内定位研究: 2008年; 目的:构建小鼠髓样相关蛋白14(MRP14)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增得到MRP14编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果:重组质粒经聚合酶链反应(PCR)、酶切和测序鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论:成功构建带HA标签的MRP14真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为下一步深入研究MRP14作用细胞的信号通路提供了一个重要工具。; 刘铮徐佳伍丽琼王娟邓鹏姜勇; 关键词：血凝素细胞内定位

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