张礼洲
- 作品数：18 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学天文地球更多>>
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因突变对病毒体外复制的影响被引量：4
- 2011年
- 为了进一步了解影响鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制效率和致病力的分子基础,作者在序列分析的基础上,利用反向遗传操作技术,针对VP2上2个重要的氨基酸位点(222和279),修饰和拯救了相应的2株突变病毒,并研究了突变病毒在体内外的生物学特性。复制动力学数据显示,VP2的222位由酪氨酸突变为脯氨酸可将IBDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的复制滴度提高6倍以上,而279位氨基酸对病毒复制效率无显著影响。SPF鸡的感染试验显示,222位和279位氨基酸与IBDV的致病力没有关系。本研究首次报道了VP2 222位和279位氨基酸与IBDV复制效率和致病力的关系,有助于更加全面地了解IBDV的基因功能,也将为新型IBDV疫苗的设计提供依据和思路。
- 祁小乐高立吴关邓小芸余飞张礼洲秦立廷高玉龙王永强高宏雷刘娣华育平王笑梅
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因致病力
- 鸡法氏囊B淋巴细胞全长cDNA表达文库的构建
- 2012年
- 分离纯化了3～4周龄SPF雏鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,通过琼脂糖凝胶电泳确定其质量,运用SMART技术合成第一链cDNA,LD-PCR合成第二链cDNA,经SfiⅠ酶切后定向导入真核表达质粒pEXP-Lib中,构建了全长cDNA表达文库。初级文库的库容量达1.98×105 CFU,扩增后的库容量为2.35×109CFU。PCR鉴定结果显示,文库的重组率约为100%,且插入片段分布于500～2 000bp之间。对随机挑选的22个克隆进行测序,其中20个与原鸡序列的同源性在97%以上,另外2个为未知序列。结果表明,构建的cDNA文库具备较高的库容量和重组率,为进一步筛选鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)受体及感染相关基因奠定了良好基础。
- 张礼洲祁小乐高玉龙王笑梅
- 关键词：IBDV法氏囊B淋巴细胞CDNA表达文库
- 一株鸡传染性法氏囊病病毒基因组测序及其分子特征(英文)被引量：2
- 2011年
- [目的]测定一株鸡传染性法氏囊病病毒基因组序列及其分子特征。[方法]分离出一株具有特殊分子特征的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株(vvIBDV)HLJ-0504,并对其基因组进行了克隆和测序。[结果]序列分析显示,HLJ-0504的基因组A节段属于超强毒株,而其B节段则来源于另外一个独特的祖先。动物实验表明,HLJ-0504对SPF雏鸡的致病率和致死率分别为100%和86.7%。[结论]具有独特基因组B节段的vvIBDV仍在我国流行,我国IBDV的进化特征存在多样性。IBDV的毒力不是由基因组的A或B单独决定的。
- 祁小乐高立秦立廷邓小芸吴关张礼洲余飞任宪刚高玉龙高宏雷王永强王笑梅
- 关键词：基因组进化毒力
- 宿主蛋白CypA抑制传染性法氏囊病病毒增殖
- 引言传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性传染病...
- 王念张礼洲陈玉明高立卢珍高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉李凯王笑梅祁小乐
- VP2互作蛋白CK1α及CSGalNAcT2在鸡传染性法氏囊病病毒复制中的作用及分子机制研究
- 传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus,IBDV）引起的急性、高度接触性传染病。该病主要侵害3-...
- 张礼洲
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白病毒复制
- 传染性法氏囊病病毒超强毒株衣壳蛋白的可溶性表达、纯化与活性分析被引量：3
- 2017年
- 为获得高质量的病毒衣壳蛋白VP2,本研究克隆了传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)超强毒株Gx的VP2基因,并亚克隆至载体pCold-Ⅰ,进而获得重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-GxVP2,在Transetta(DE3)工程菌中优化条件进行IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达,运用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤两种技术串联的方法进行蛋白纯化,运用单克隆抗体介导的Western blotting技术鉴定纯化蛋白的特异性,免疫SPF鸡鉴定纯化蛋白的免疫活性。结果显示,在冷休克条件下,IBDV衣壳蛋白VP2在Transetta(DE3)工程菌中实现了可溶性表达;通过纯化获得了高纯度的VP2,浓度为542μg/mL;该蛋白不仅能与VP2单克隆抗体特异性反应,还能刺激鸡产生特异性免疫应答,具有良好的免疫活性。本研究在IPTG为1mmol/L,15℃、120r/min,诱导时间为24h的条件下,实现了有免疫活性的IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达和纯化。高纯度、可溶、具有功能活性的衣壳蛋白的制备,为深入开展IBDV致病机制研究奠定了基础。
- 高祥李辉张礼洲卢珍王永强高立吴甜甜高玉龙刘长军王笑梅祁小乐
- 关键词：传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白可溶性表达纯化
- 36株鸡传染性法氏囊病病毒中国分离株(2009~2012)VP2基因高变区的序列分析（英文）被引量：2
- 2015年
- [目的]鸡传染性法氏囊病（IBD）是由传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的一种高度接触性免疫抑制性传染病。IBDV易变异，给防控提出了挑战。持续监测IBDV的流行十分必要。[方法]对36株源于2009～2012年我国10个省的IBDV毒株的VP2部分基因（包含高变区）进行了扩增、测序。将其与本实验室早期分离的18株IBDV，以及源自我国和世界其它地区的24株参考毒株，进行序列比对分析。[结果]IBDV经典毒株、变异毒株、弱毒株和超强毒株（vvIBDV）在我国同时存在。vvIBDV仍然是我国的主要流行毒株，而且新的亚群正在形成。序列比对分析最示，这些毒株中存在可能与毒力和抗原变异相关的氨基酸突变。[结论]该研究有助于笔者进一步认识IBDV的遗传变异。
- 祁小乐秦立廷高玉龙高宏雷李颖颖高立卢珍王念陈玉明张礼洲李凯王永强王笑梅
- 关键词：VP2传染性法氏囊病病毒
- 鸡法氏囊B淋巴细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定
- 2014年
- 为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-Rec共同转化Y187酵母感受态细胞,通过同源重组构建酵母表达文库。结果表明:所构建cDNA文库的效价为9.5×107cfu/mL,重组率为100%,可以用于酵母双杂交试验。
- 陈玉明高玉龙张礼洲王念高立任宪刚姜莉莉高宏雷秦立廷王永强祁小乐王笑梅
- 关键词：法氏囊B淋巴细胞酵母双杂交CDNA文库
- 运用SMART技术构建鸡法氏囊B淋巴细胞全长cDNA表达文库
- 前言鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursaldisease virus,IBDV)引起的急性、高度接触性传染病。IBDV主...
- 张礼洲祁小乐高玉龙王笑梅
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒VPP5酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选
- 2015年
- VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p GBGt VP5,通过自激活试验证明其没有自激活活性,对酵母细胞没有毒性。然后,运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)c DNA文库中筛选与VP5互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得5个互作宿主细胞蛋白,为进一步深入研究IBDV VP5与宿主互作的效应和机制奠定基础。
- 王念张礼洲陈玉明卢珍高立高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉李凯王笑梅祁小乐
- 关键词：传染性法氏囊病病毒酵母双杂交诱饵载体
