张海霞 作品数:56 被引量:68 H指数:4 供职机构: 西北民族大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中央高校基本科研业务费专项资金 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
白细胞介素-7基因慢病毒表达载体的构建及在CHO-K1细胞中的稳定表达 被引量:2 2017年 目的构建白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)基因慢病毒表达载体,并在CHO-K1细胞中稳定表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。方法参照Gen Bank中公布的人IL-7基因核苷酸序列(J04156.1),人工合成该条基因,亚克隆至表达载体pLV-CMV-EF1-GP上,构建重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7,在HEK293T细胞中进行病毒包装,检测病毒滴度后,收获细胞毒液,感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达IL-7的CHO-K1-r IL-7细胞。荧光显微镜观察感染细胞绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法检测IL-7基因m RNA的转录;ELISA法检测IL-7的含量;Western blot法检测IL-7的表达。结果重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7经双酶切及测序结果证明构建正确。慢病毒的滴度为3×10~8 TU/ml。慢病毒感染CHO-K1细胞24、48和72 h后,均可见特异性绿色荧光蛋白表达,且随着培养时间的延长,荧光强度明显增强;CHO-K1-r IL-7细胞可扩增出约540 bp的IL-7基因片段;经ELISA检测,样品中IL-7含量为0.6 ng/ml;表达产物主要存在于CHO-K1-r IL-7细胞上清中,且具有良好的反应原性。结论成功构建了IL-7基因慢病毒重组表达质粒,并实现了IL-7在CHO-K1细胞上的稳定表达。 李向茸 令瑛 徐雷 包晓婧 马玉梅 车敏娜 张海霞 冯若飞关键词:白细胞介素-7 慢病毒 CHO-K1细胞 TRIM9在疾病中的作用研究进展 2023年 三基序蛋白9(tripartite motif 9,TRIM 9)是一种大脑特有的E3泛素连接酶,与E2泛素结合酶协同工作。泛素系统是翻译后修饰的系统之一,它不仅是蛋白酶体降解靶蛋白的标志物,也是蛋白质相互作用和酶激活的调节因子。TRIM蛋白在很多生理学过程,包括细胞增殖、细胞凋亡、DNA修复、信号转导、先天免疫和致癌等中发挥重要的作用。目前针对TRIM 9蛋白的研究较少,已知该蛋白体内表达异常与多种疾病密切相关,其失调会导致癌症、免疫性疾病或发育障碍等。该文主要阐述了TRIM 9蛋白在疾病中的作用及其作为疾病诊断的新兴生物标志物之一,为其在临床领域的深入研究奠定理论基础。 马小梅 舒星富 陈遥 赵钰 张博文 马忠仁 马忠仁关键词:疾病 生物标志物 生物制品中内毒素的危害及其去除方法的研究进展 被引量:2 2021年 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖成分,在细菌死亡或分解后释放出的内毒素残存于各种生物制品中,作用于机体内的单核巨噬细胞并产生多种细胞因子,适量的细胞因子对机体有益,过量则可引起机体严重的病理反应,严重时会危及生命。因此,细菌来源的生物制剂必须进行彻底纯化,去除或达到药品规定的内毒素含量后方可使用。本文将从内毒素的结构特征、生物制品中的危害及其去除方法做一综述。 李生军 张海霞 冯若飞关键词:革兰氏阴性菌 内毒素 大肠杆菌 与脑心肌炎病毒衣壳蛋白相互作用宿主蛋白的筛选 2019年 应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活性和结构分子活性;参与生物调节、细胞形成、细胞代谢、发育过程、细胞定位和免疫反应等多个生理过程,并参考文献资料分析这些蛋白在病毒复制中可能起到的作用,为研究EMCV感染及其致病机理提供参考。 谢晶莹 邓盈盈 韩玉梅 张海霞 李向茸 李琼毅 冯若飞关键词:脑心肌炎病毒 衣壳蛋白 宿主蛋白 单链抗体展示系统研究进展 被引量:1 2023年 单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)是由抗体重链可变区(variable region of heavy chain,VH)和轻链可变区(variable region of light chain,VL)通过柔性短肽连接组成的小分子,是具有完整抗原结合活性的最小功能片段,包含抗体识别及抗原结合部位。相比于其他抗体,scFv具有分子量小、穿透性强、免疫原性弱、易构建表达等优点。目前,scFv最常用的展示系统主要有噬菌体展示系统、核糖体展示系统、mRNA展示系统、酵母细胞表面展示系统和哺乳动物细胞展示系统等。近年来,随着scFv在医学、生物学、食品安全学等领域的发展,使得其在生物合成和应用研究方面备受关注。本文对近年来scFv展示系统的研究进展作一综述,以期为scFv的筛选及应用提供理论基础。 陈遥 舒星富 赵钰 张博文 马忠仁 马忠仁关键词:单链抗体 基因工程抗体 乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达 2012年 目的构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV,旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况,为进一步深入研究提供基础资料。方法通过liT—PCR扩增目的基因,酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGrP—C1-JEV重组表达载体,利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞,观察绿色荧光标记蛋白表达情况,同时提取细胞RNA,检查目的基因转录表达情况,并利用免疫组化和Westernblot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性。结果重组质粒pEGrP—C1-JEV构建成功,转染至BHK-21细胞中,绿色荧光标记蛋白正常表达,表达率较高,RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达,表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中,且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合。结论pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达,且对细胞生长和形态不产生影响,真核表达抗原具有良好的抗原性,本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料。 冯若飞 张晓媛 林贵鸿 乔自林 凡静静 李向茸 张海霞 樊得英 马忠仁关键词:乙型脑炎病毒 绿色荧光蛋白 真核表达 一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法 本发明提供一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法,包括以下步骤:获取绵羊FSH‑αβ氨基酸序列,对其进行密码子优化,在上游依次添加了BamH I酶切位点、kozak序列和TG,下游添加了CTP序列和EcoRI酶切位点,得... 冯若飞 王兴陇 李向茸 张海霞 李琼毅 李倩文献传递 脑心肌炎病毒VP1基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫效果的研究 被引量:1 2017年 为构建脑心肌炎病毒(EM CV)VP1基因的重组腺病毒,以期为EMCV疫苗研制提供试验依据。扩增EMCV VP1基因并与载体p Yr-adshuttle-4连接构建p Yr-ads-4-VP1穿梭载体;穿梭质粒通过体外重组与腺病毒载体进行重组,获得p Ad-VP1-EG FP重组腺病毒载体,将此载体于H EK 293细胞中包装最终成功获得r Ad-VP1-EGFP重组腺病毒,并测定其TCID50;构建的重组腺病毒感染细胞后在基因水平、蛋白水平对VP1进行检测;最后通过对小鼠免疫重组腺病毒后进行EMCV攻毒试验,验证其免疫效果。结果显示,成功构建了EMCV VP1基因重组腺病毒r Ad-VP1-EGFP,测得其TCID50为10-8.5/m L;感染细胞后基因水平及蛋白水平均可检测到VP1基因的表达;重组腺病毒免疫小鼠后的存活情况表明,重组腺病毒对小鼠有较好的免疫效果,且二次免疫后保护率显著高于单次免疫。结果表明,本试验成功制备了EMCV基因重组腺病毒,且对小鼠具有较好的免疫效果,可为进一步开发EMCV基因工程疫苗奠定基础。 张海霞 令瑛 杨术伟 凡静静 李琼毅 李向茸 马玉梅 包晓婧 魏嘉 马忠仁 冯若飞关键词:脑心肌炎病毒 腺病毒 免疫效果 乳铁蛋白体外抗伪狂犬病病毒作用效果研究 2023年 本研究旨在用人胚胎肾293(Human embryonic kidney 293,HEK293)细胞在体外评估乳铁蛋白对伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染的作用效果。采用细胞毒性实验、实时荧光定量PCR等方法检测乳铁蛋白在PRV感染宿主细胞过程中的病毒载量及相关促炎细胞因子的变化情况,以明确其对PRV的作用效果。乳铁蛋白处理不影响HEK293细胞活率,但在PRV感染过程中发挥抗病毒功能,且呈时间和浓度依赖性;研究发现乳铁蛋白可抑制PRV的吸附、侵入和复制增殖过程,其中在吸附阶段抗病毒效果极显著;此外,经乳铁蛋白处理可显著下调病毒感染后引起的促炎细胞因子IL-2、IL-6及TNF-αmRNA转录水平。乳铁蛋白可有效抑制PRV感染,且在病毒吸附阶段效果最佳,为抗PRV感染的有效治疗剂研发提供参考。 马小梅 舒星富 陈遥 赵钰 马忠仁 马忠仁关键词:乳铁蛋白 伪狂犬病病毒 抗感染 聚对苯二甲酸乙二酯微生物降解研究进展 2022年 针对塑料垃圾处理方式不当造成的环境污染问题,介绍了各类塑料垃圾对生态环境造成的影响,以及现阶段各种降解塑料的方法,着重探讨了聚对苯二甲酸乙二酯(PET)微生物降解的研究进展。 覃伟洪 杨志祥 张海霞 丁功涛关键词:塑料降解 聚对苯二甲酸乙二酯 生物降解法