张利清
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 人工锌指核酸酶突变EGFP基因的功能分析被引量：1
- 2013年
- 锌指核酸酶技术在基因定点修饰中具有效率高和特异性好等特点,并成功应用于数十种生物。目前,该技术是否能应用羊上尚未报道。为了敲除转基因山羊标记基因(EGFP),构建了一对针对EGFP外显子上的锌指核酸酶表达载体,将其电转染至转EGFP基因胎儿成纤维细胞中,研究了锌指核酸酶突变EGFP基因的效率和方式,利用基因显微注射单细胞获得获得的转基因(EGFP)细胞系作为锌指核酸酶的靶细胞。结果显示,通过锌指核酸酶的突变作用,转染后的细胞发绿色荧光比例下降,测序结果显示在EGFP外显子中插入1个碱基G,导致编码EGFP基因的阅读框改变,从而起到基因突变的作用。结果表明,文中构建的锌指核酸酶对EGFP基因有突变作用,可以为以后获得无标记基因供核细胞进行体细胞核移植生产克隆羊奠定基础。
- 袁玉国于宝利宋绍征周峰张利清顾迎迎禹明慧成勇
- 关键词：核移植EGFP基因打靶
- 家兔超数排卵和胚胎移植妊娠率的影响因素分析被引量：4
- 2013年
- 应用FSH和HCG相结合的不同方法 (递减量与恒量法),对不同兔龄和是否经产的中国家兔进行了超数排卵处理。其中,递减量法超排处理:每间隔12 h依次肌肉注射15、15、10、10、5及5 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼;恒量法超排处理:每间隔12 h肌肉注射10 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼。17 h后,取卵经显微注射后移植到排卵点分布不同的家兔输卵管中,比较分析了超数排卵及胚胎移植妊娠率的影响因素,旨在优化兔超数排卵和胚胎移植方法。结果显示,①总量为60 U的FSH递减量肌肉注射法超排效果略优于恒量法(688枚、671枚),但差异不显著(P>0.05);②9～11月龄的母兔超排效果明显优于6～8月龄的母兔(794枚、565枚),差异显著(P<0.05);③经产母兔的超排效果明显优于未经产的母兔(887枚、472枚),差异显著(P<0.05);④经显微注射重组DNA的胚胎移植受体时,两侧卵巢均有排卵点的胚胎移植受体妊娠率明显高于一侧卵巢有排卵点和两侧卵巢均无排卵点的受体(81.25%、38.46%、37.50%),差异显著(P<0.05)。试验证明,通过肌肉注射递减总量为60 U的FSH对9～11月龄经产母兔的超排效果最佳,且两侧卵巢均有排卵点的受体胚胎移植妊娠率最高,为胚胎研究工作者提供了一定的参考依据。
- 宋绍征葛欣张利清成姚斌荣耀顾迎迎吉学桥刘昊成勇
- 关键词：超数排卵胚胎移植妊娠率显微注射
