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孙茂盛: 作品数：179 被引量：472H指数：10; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划云南省自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

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人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及小鼠血清免疫学评价被引量：1: 2011年; 目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、超滤、分子筛纯化,甲醛灭活,抗原定量检测Al(OH)3吸附制备的实验性疫苗。使用不同剂量(8EU、32EU、128EU、256EU)经肌内注射免疫小鼠,共免疫三次,免疫间隔2周。采用间接ELISA法检测血清特异性抗体效价。结果:通过蚀斑纯化,筛选得到一株纯化的病毒株ZTR-5纯-1,在Vero细胞上适应性后感染性滴度达7.35logCCID50/ml;大量培养收获的病毒原液滴度为7.57logCCID50/ml,制备获得轮状病毒样品抗原含量为2 560EU/ml;经肌内注射,初次免疫后,所有剂量组动物均获得抗体阳转,阳转率为100%;第一次加强免疫后,各组血清特异性抗体水平均明显增高,免疫剂量为128EU和256EU的两组小鼠血清抗体效价均达1∶10 240;第二次加强免疫后,各剂量组(8EU、32EU、128EU、256EU)血清抗体效价依次达1∶5 120,1∶7 456,1∶14 481.54,1∶14 481.54。结论:人轮状病毒ZTR-5株可在Vero细胞上稳定增殖,所制备的疫苗具良好免疫原性,用128EU/2次免疫即可获得良好的免疫效果。; 贾琴妹吴晋元易山张光明郜岩杨星赵晓南孙茂盛李鸿钧; 关键词：人轮状病毒 VERO细胞灭活疫苗免疫试验

huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白基因的构建及表达被引量：6: 2001年; 目的构建及表达具有huGM-CSF和huIL-6双重生物学活性的huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白分子。方法应用PCR技术对huGM-CSF和huIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成pBV220-GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)表达质粒,表达质粒导入E.coliDH5α中诱导表达。通过QSepharoseH.P.离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用huGM-CSF依赖细胞株TF1和huIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性。结果pUC18-GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coliDH5α中得到高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白含量的25%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过QSepharoseH.P.离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白,其纯度达到95%以上。融合蛋白具有huGM-CSF和huIL-6的双重生物学活性,其促进huGM-CSF依赖细胞株TF-1和huIL-6依赖细胞株B9增殖的比活性分别为1.08×108U/mg和1.95×107U/mg。结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白。; 孙强明徐维明马雁冰杨旭刘红岩孙茂盛戴长柏; 关键词：克隆基因表达生物学活性

HBsAg/GM-CSF融合蛋白的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1: 2005年; 目的在毕赤酵母中表达HBsAg/GM-CSF融合蛋白。方法利用PCR扩增HBsAg和GM-CSF基因,通过15个氨基酸的连接肽将两个片段连接,获得融合基因S-GM,克隆入酵母穿梭质粒pPIC9K中。将重组质粒9K-S-GM电转化毕赤酵母后,G418筛选,甲醇诱导,HBsAg/GM-CSF融合蛋白表达。经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测表达产物特异性。结果PCR扩增的片段与预期大小一致,HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达。Western blot检测,该融合蛋白同时具有HBsAg和GM-CSF的特异性。结论该融合蛋白的获得为提高乙肝疫苗的免疫原性奠定了科学基础。; 席晓蓉李鼎锋孙强明杨芳易山孙茂盛; 关键词：HBSAG GM-CSF 融合蛋白克隆技术毕赤酵母乙型肝炎疫苗

重组杆状病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白被引量：10: 1997年; 从培养的SA11病毒中提取病毒dsRNA作为模板，经逆转录、多聚酶链反应（RT-PCR）获得编码VP4蛋白的全基因，全长2362bp.完整的VP4基因克隆到杆状病毒转移载体pVL-1393中，转染Sf9细胞进行同源重组，用声、杂交法筛选出表达VP4蛋白的重组杆状病毒。表达的VP4蛋白能被抗轮状病毒抗体所识别，表达产量约占总蛋白的10％。用表达的VP4蛋白免疫动物后可产生高水平抗亲本SA11毒株中和抗体。抗体能阻断SA11病毒在MA104细胞上引起的细胞病变（CPE），免疫荧光和Westernblot也证实抗体可特异性识别轮状病毒抗原。结果表明，重组杆状病毒表达的VP4蛋白具有良好的抗原性和免疫原性，可望用VP4基因研制轮状病毒重组疫苗和亚单位疫苗。; 孙茂盛SusanaGiambiagiOscarBurrone; 关键词：轮状病毒杆状病毒疫苗

SV40对猴树突状细胞发育分化的影响: 2009年; 为探讨猴空泡病毒40对猴树突状细胞发育分化的影响,分别以灭活的SV40和感染性SV40作为刺激抗原致敏外周血来源的猴树突状细胞,培养第5 d加入刺激抗原,在培养第7 d和第9 d分别收集处理的猴树突状细胞并测定细胞表面分子CD1a、HLA-DR、CD86、CD83的表达情况。结果显示,与灭活的SV40抗原相比,经感染性SV40刺激的猴DC中前述四种表面分子的表达显著偏低(P<0.05)。前述四种表面分子均是DC发育分化过程的特征性分子,其表达降低说明感染性SV40对猴DC的分化成熟具有抑制作用。; 葛长勇李鸿钧和占龙张光明孙茂盛吴南屏; 关键词：SV40 恒河猴树突状细胞发育分化

rhbFGF研制及促冠状动脉血管新生作用时间的研究: 2002年; 目的　探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhb FGF)促冠状动脉血管新生的作用时间。方法　开胸结扎兔冠状动脉左前降支 (L AD) ,建立急性心肌梗死动物模型 ;制备 rhb FGF蛋白 ,将其直接四点注入兔缺血心肌内 ,通过病理切片观察缺血心肌内血管新生情况。结果　结扎 L AD后 6周及 12周 ,rhb FGF组与生理盐水对照组 (NS)病理切片 ,随机观察 10个高倍视野无平滑肌小血管计数分别为 6周 (W) :41.13± 10 .0 4,30 .33± 3.2 1,P<0 .0 1;12 W:5 0 .5 0± 9.2 0 ,32 .6 3± 7.2 5 ,P<0 .0 1;有平滑肌血管计数分别为 6 W:16 .2 5± 5 .2 3,10 .75± 4.2 5 ,P<0 .0 1;12 W:16 .88± 4.87,11.2 5± 5 .0 9,P<0 .0 1。结论　缺血心肌内注射 rhb FGF可促进冠状动脉血管侧支新生 ,其作用时间可能小于 12 W。; 李易孙林马雁冰谢天宏孙茂盛光雪峰; 关键词：重组人碱性成纤维细胞生长因子血管新生冠心病冠状动脉

两种层析方法纯化轮状病毒效果的比较被引量：2: 2012年; 目的比较两种不同的凝胶层析纯化方法对人轮状病毒(Rotavirus,RV)的纯化效果及其对病毒抗原性和免疫原性的影响。方法病毒收获液经超滤浓缩后,分别采用Q Sepharose Fast Flow(QFF)离子交换层析和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶过滤层析纯化,采用A群轮状病毒诊断试剂盒(胶体金)检测纯化病毒的抗原性;电镜观察病毒的形态;荧光灶法测定病毒纯化前后的感染性滴度;双抗体夹心ELISA法测定抗原含量;Lowry法测定纯化前后样品的蛋白含量;SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的病毒蛋白;纯化病毒经灭活后,PAGE分析病毒的核酸带型,免疫小鼠,检测纯化病毒的免疫原性。结果QFF洗脱峰1和4FF洗脱峰1为RV抗原阳性,电镜观察可见完整的、大小约70 nm的RV颗粒;经QFF和4FF层析纯化后,病毒的感染性滴度分别为7.10和4.50 lgCCID50/ml,最终抗原回收率分别为65.3%和11.8%,病毒液总蛋白去除率分别为99.68%和99.52%;SDS-PAGE分析显示,经QFF和4FF纯化的样品未见明显杂蛋白条带,且特异性良好;纯化病毒灭活后,病毒基因组带型未发生改变,且保持了良好的抗原性和免疫原性。结论两种凝胶层析方法均能纯化人轮状病毒,综合比较,QFF离子交换层析纯化效果优于4FF凝胶过滤层析。; 杨星吴晋元易山李鸿钧张光明郜岩贾琴妹赵晓南孙茂盛; 关键词：轮状病毒纯化离子交换层析凝胶过滤层析

HIV-1感染恒河猴外周血单个核细胞的生物学特性和C2-V3区基因序列变化被引量：2: 2005年; 目的探讨艾滋病病毒1型(HIV1)感染恒河猴外周血单个核细胞(PMBCs),并在其中传代的可能性。方法用HIV1感染原代猴PBMCs,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定培养0、2、3、7天时上清液中的HIV1P24抗原,以观察HIV1在猴细胞中的复制情况,比较HIV1分别在人和猴细胞感染的复制动力学。同时采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增HIV1的env基因,并对其C2V3区进行序列分析。结果HIV1毒株SF33、89.6、ⅢB感染猴PBMCs后的第3天,P24抗原达到最高,随着培养时间的延长,P24抗原逐渐降低。将SF33、ⅢB、89.6、YN19四个毒株分别感染猴PBMCs并盲传3代后,P24抗原测定结果均为阴性。提取盲传各代细胞脱氧核糖核酸(DNA)进行PCR扩增,结果显示,SF33、ⅢB、YN19、89.6感染猴细胞的第一代和89.6感染猴细胞的第二代,均可以检测到HIV1前病毒核酸。比较原毒株env基因C2V3区的序列发现,传代后的基因序列SF33有5个碱基改变外,其它HIV1只有0～2个核苷酸改变。与SF33感染猴PBMCs的表现相反,其感染人PBMCs时,HIV1的复制一直维持在较高的水平。结论应用3个实验株、1个临床分离株HIV1,虽都能够感染恒河猴外周淋巴细胞,但均难以继代,提示能否用恒河猴作为HIV1研究的动物模型,尚待进一步的体内外研究。; 马丽英邢辉张辉赵全璧冯毅孙茂盛蒋岩邵一鸣; 关键词：艾滋病病毒1型恒河猴体外培养

DNA免疫诱导的抗轮状病毒抗体反应被引量：6: 1998年; 本文报道了用编码轮状病毒SA11毒株VP4蛋白的野生型和经修饰后的基因，以质粒DNA形式免疫动物后，血清抗轮状病毒抗体反应和体内mRNA的表达。用ELISA和微量中和实验分别测定血清中抗轮状病毒抗体，结果表明，所有动物的血清都有不同水平识别轮状病毒抗原成分和中和全病毒的能力。; 孙茂盛GiambiagiSAfrikanovaIvaStantaGBurroneO; 关键词：轮状病毒 VP4基因 DNA疫苗抗体

人轮状病毒毒株及其分离,培养与鉴定方法: 一种人轮状病毒毒株，其特征在于该毒株为轮状病毒（<I>RotavirusA</I>）ZTR-5毒株，于2011年06月27日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）提交保藏，编号：CGMCCNo.497...; 孙茂盛李泓钧吴晋元张光明易山; 文献传递

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