目的:探讨柚皮苷对TNF-α诱导的HUVECs损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:用TNF-α诱导HUVECs的氧化应激和炎症反应模型,采用流式细胞仪检测HUVECs中ROS表达水平;采用Western blot法检测Nox4,p22phox,ICAM-1,VCAM-1,Bcl-2和Caspase-3,-9的蛋白表达情况以及NF-κB与PI3K/Akt活性;采用Real time RT-PCR法检测Nox4,p22phox,ICAM-1,VCAM-1 mRNA的表达情况。结果:柚皮苷可以抑制TNF-α诱导的HUVECs中ROS的产生,Nox4,p22phox,ICAM-1和VCAM-1的mRNA及蛋白过表达,NF-κB通路的激活以及下调凋亡蛋白Caspcase-3,-9的表达;柚皮苷还可以上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和减弱TNF-α对PI3K/Akt通路的抑制作用。结论:柚皮苷可以抑制TNF-α诱导的HUVECs的Nox4/NF-κB信号通路,激活PI3K/Akt信号通路,减弱TNF-α诱导的HUVECs的氧化应激和炎症反应。
目的检测穿山龙多糖(RDNP)是否可以通过影响NADPH氧化酶/ROS信号通路对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤产生保护作用。方法 H_2O_2作用HUVECs 4 h造成损伤,分别给予25、50、100、200、400、800μg/m L RDNP进行干预,选取适当浓度进行后续实验。采用MTT法测定细胞活力;试剂盒检测LDH、MDA、SOD、T-AOC、GSH-Px、ROS水平;Western Bolt及qRT-PCR法检测Nox4、p22phox的蛋白及mRNA表达。结果加入50、100和200μg/m L浓度的RDNP与H_2O_2模型组间相比,活力增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。因此选择50、100、200μg/m L RDNP剂量组进行实验。不同浓度RDNP均可以显著改善H_2O_2损伤,使细胞形态逐渐趋于正常,以200μg/m L RDNP给药组的效果最为显著。RDNP可以降低H_2O_2损伤HUVECs模型中LDH、MDA及ROS的水平,并增强细胞内SOD、GSH-Px、T-AOC活力;且从mRNA水平及蛋白水平抑制Nox4、p22phox的表达。结论 RDNP可以通过干扰NADPH氧化酶/ROS信号通路抑制H_2O_2造成的HUVECs氧化损伤,保护内皮细胞。
