孙吉平
- 作品数：14 被引量：99H指数：5
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞体外横向分化为胰岛素分泌细胞被引量：2
- 2006年
- 目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均体外进行诱导分化,细胞免疫组化染色鉴定诱导后胰岛素分泌阳性细胞。结果:限制性酶切分析和序列测定证实成功构建了含有Pdx-1基因的真核表达载体,荧光显微镜观察证实Superfect能高效介导重组载体转染MSC;细胞免疫组化染色显示Pdx-1+MSC分化为胰岛素分泌细胞的数量较Pdx-1-MSC明显增多,阳性率分别为(28.23±2.56)%和(7.08±2.69)%。结论:Pdx-1能增强大鼠MSC体外分化为功能性胰岛素分泌细胞的能力,为胰岛移植开辟新的思路,对1型糖尿病治疗有重要的应用价值。
- 孙吉平杨于嘉贾延劼
- 关键词：骨髓间充质干细胞胰岛
- 黄芩苷抑制大鼠胰岛细胞瘤细胞株增殖的分子机制研究被引量：24
- 2006年
- 目的探索黄芩苷对大鼠胰岛细胞瘤细胞的影响及作用的分子机制。方法应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪、报告基因分析以及WesternBlot等方法,探讨黄芩苷对细胞增殖和细胞周期的影响及作用分子机制。结果黄芩苷处理大鼠胰岛细胞瘤细胞后,分裂相细胞显著减少,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率下降,随黄芩苷浓度的增加和/或作用时间的延长,抑制率呈上升趋势,并出现凋亡细胞;胰岛细胞瘤细胞株凋亡过程中caspase3活性以时间依赖性方式增高;通过流式细胞仪检测细胞周期发现,随黄芩苷处理浓度增加,S期细胞逐渐减少,从38.2%下降至9.4%,G0/G1期细胞所占百分率逐渐增加,从56.4%上升至85.9%,细胞出现G1阻滞;同时,细胞周期蛋白基因启动子活性显著下调,细胞周期蛋白表达明显降低。结论黄芩苷能诱导细胞凋亡,其作用可能与caspase3活化有关;黄芩苷还能以剂量依赖性方式和时间依赖性方式抑制胰岛细胞瘤细胞增殖,黄芩苷诱导细胞周期蛋白基因转录和表达下调可能在其中起着重要作用。
- 孙吉平贾延劼宋健辉杨于嘉
- 关键词：黄芩苷胰岛细胞瘤增殖细胞周期蛋白
- Ⅰ型戊二酸尿症一例被引量：7
- 2004年
- 钟乐杨于嘉罗芳孙吉平余小河
- 关键词：小儿常染色体隐性遗传病
- 胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞被引量：4
- 2006年
- 虽然骨髓间充质干细胞(BMSCs,bonemarrowmesenchymalstemcells)具有极强的自我更新能力及多向分化潜能,但最近发现其体外分化为胰腺内分泌细胞的效率并不高,不能产生足够用于移植的胰岛样细胞.胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1,pancreaticduodenalhomeobox-1)在胰腺胚胎发育和胰岛素基因表达调控方面均具有重要作用,因此构建含有Pdx-1的真核表达载体,并使用新型纳米介质Superfect介导重组载体转染BMSCs,研究Pdx-1表达在BMSCs体外分化为胰岛样细胞中的作用.结果表明,转染重组载体后(Pdx-1+BMSCs)分化为胰岛素阳性细胞比例为(28.23±2.56)%,较转染空白载体和未转染组(Pdx-1?BMSCs)明显增多(分别为(7.08±2.69)%和(4.59±3.02)%);细胞免疫化学染色显示诱导后细胞表达胰岛素、胰高血糖素和生长抑素蛋白,而且Pdx-1+BMSCs诱导后表达明显增加,与Westernblotting和RT-PCR结果相似;葡萄糖诱导的胰岛素分泌量测定显示Pdx-1+BMSCs对不同浓度葡萄糖有不同的胰岛素分泌,25和5.5mmol/L葡萄糖刺激后胰岛素分泌量分别为(115.29±2.56)和(56.61±4.82)μU/mL,明显高于Pdx-1?BMSCs分泌量(分别为(53.26±7.56)和(25.53±6.49)μU/mL).Pdx-1+BMSCs分化的细胞同种异体移植后可以恢复糖尿病模型大鼠的血糖水平,移植物平均存活时间(30.5±15.7)天.本试验提示大鼠BMSCs体外能分化为胰岛样细胞;Pdx-1能显著增强上述分化能力;BMSCs体外分化的胰岛样细胞移植能改善STZ糖尿病大鼠的生存状态.这将为糖尿病的治疗提供一条新的途径.
- 孙吉平杨于嘉王晓莉宋建辉贾延劼
- 关键词：骨髓间充质干细胞胰岛PDX-1
- Superfect高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达被引量：3
- 2007年
- 目的:构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体,并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率,为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。方法:RT-PCR体外扩增PDX-1基因,双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体,对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定;利用Percoll细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测细胞周期后,Superfect介导正确重组的载体转染骨髓MSCs,检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化;G418筛选阳性细胞后,RT-PCR和Western blotting检测PDX-1基因在骨髓MSCs中的表达。结果:重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示85.9%的MSCs处于G0/G1期,提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能;荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光,Superfect介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关;RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓MSCs表达,随转染时间延长,表达逐渐增强,与Western blotting结果一致。结论:成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体;Superfect能高效介导外源性基因在骨髓MSCs中表达;转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。
- 孙吉平贾延劼王晓莉杨于嘉
- 关键词：骨髓间质干细胞基因糖尿病
- 体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为胰岛样细胞的研究被引量：5
- 2006年
- 目的探索大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的方法,为解决胰岛移植物来源匮乏问题提供新的思路。方法采用横向分化技术,将成年大鼠MSCs诱导成胰岛素分泌细胞;间接免疫荧光法鉴定诱导前后的细胞巢蛋白、胰岛素、胰高血糖素、生长抑素的表达;RTPCR法检测诱导前后的细胞胰岛素1、Pdx1、Pax6mRNA的表达;24h累积分泌量测定和胰岛素刺激实验评价诱导前后细胞的功能。结果诱导5h,巢蛋白阳性细胞为(44.6±7.3)%,诱导24h增至(61.8±8.4)%。此后,巢蛋白阳性细胞数开始下降,诱导第14天后,巢蛋白表达基本消失。而且,诱导后细胞可表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等蛋白;表达胰岛素1及其多种转录因子基因mRNA;胰岛素刺激实验反应敏感,而诱导前MSCs不具备上述特点。结论体外大鼠MSCs可诱导成为胰岛素分泌细胞,为胰岛移植开辟新的研究思路。
- 孙吉平贾延劼宋建辉罗芳杨于嘉
- 关键词：胰岛分化
- 黄芩苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞被引量：1
- 2007年
- 目的体外诱导大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为胰岛样细胞。方法采用分步法体外诱导后,间接免疫荧光法鉴定诱导前后细胞nestin、胰岛素蛋白表达;RT-PCR法检测诱导前后胰岛转录因子mRNA表达;EHSA检测诱导后细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌。结果免疫荧光染色显示诱导5 h,nestin阳性细胞为(44.6±7.3)%。诱导24 h,nestin阳性细胞增至(61.8±8.4)%。此后,nestin阳性细胞数目开始下降,诱导第14天后,nestin表达基本消失;同时诱导后的细胞可以表达胰岛素蛋白。另一方面,RT-PCR结果显示诱导后细胞可以表达胰岛素-1、葡萄糖转运子-2及其转录因子mRNA。ELISA结果显示不同浓度的葡萄糖刺激的胰岛素分泌量不同,5 mmol/L和25mmol/L葡萄糖刺激的胰岛素分泌量分别为(25.53±6.49)和(53.26±7.56)mU/L,而诱导前MSCs不具备上述特点。结论大鼠BMSCs体外可以诱导成为胰岛素分泌细胞。
- 孙吉平杨于嘉贾延劼
- 关键词：骨髓胰岛
- 脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达被引量：1
- 2005年
- 目的:用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法:构建的重组载体鉴定后,以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果:限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX 1基因;克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致;质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳;细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX 1基因表达。结论:成功构建了含有PDX 1基因的真核表达载体;通过优化转染条件提高了pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。
- 孙吉平贾延劼罗芳宋建辉杨于嘉
- 关键词：外源性基因细胞表达大鼠骨髓基质细胞阳离子脂质体介导显微镜下观察细胞免疫化学
- 胰腺十二指肠同源框1基因在大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞定向分化过程中的作用被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨胰腺十二指肠同源框1基因(PDX-1)在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向胰岛素分泌细胞定向分化过程中的作用。方法:新型纳米载体Superfect介导含有PDX-1基因的真核表达载体转染骨髓MSCs,G418筛选,分步法进行体外诱导;流式细胞仪检测诱导后胰岛素阳性细胞的比例,SABC免疫细胞化学染色和Western印迹法检测诱导后细胞胰岛素蛋白的表达;ELISA法检测诱导后细胞对葡萄糖刺激的反应能力。结果:Superfect可高效介导重组载体在骨髓MSCs表达,随着转染时间延长,表达逐渐增强PDX-1^+MSCs分化为胰岛素阳性细胞数较转染空白载体和PDX-1^-MSCs组明显增多;诱导后细胞表达胰岛素,转染PDX-1基因后表达明显增加;PDX-1^+MSCs对不同浓度的葡萄糖刺激表现出不同的胰岛素分泌反应。结论:骨髓MSCs体外能分化为胰岛素分泌细胞,PDX-1能显著提高其分化效率。
- 于丽孙吉平陈燕春岳炳德管英俊
- 关键词：骨髓间充质干细胞胰岛素分泌细胞细胞分化
- 黄芩苷对胰岛细胞瘤细胞系增殖的影响被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨黄芩苷对胰岛细胞瘤细胞的影响及其分子机制。方法:应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪和Westernblotting等方法,研究0, 100, 200, 400μg/ml黄芩苷处理胰岛细胞瘤细胞24h,或200μg/ml黄芩苷处理胰岛细胞瘤细胞不同时间后,黄芩苷对细胞增殖速度、细胞存活率、细胞周期分布的影响。结果:随黄芩苷浓度增加,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率逐渐下降;随着黄芩苷作用时间的延长,细胞的生存率也逐渐下降;流式细胞仪结果显示,随着黄芩苷处理浓度增加,S期细胞明显减少,从38. 2% ( 0μg/ml)下降至9. 4% ( 400μg/ml),G0 /G1期细胞所占百分率增加,从56. 4% (0μg/ml)上升至85. 9% (400μg/ml),细胞出现G1阻滞。同时,Westernblotting结果显示细胞周期蛋白cyclinD1表达显著下调。结论:黄芩苷能抑制胰岛细胞瘤细胞株增殖;黄芩苷诱导所致细胞周期蛋白cyclinD1表达下调在其中起着重要作用。
- 宋健辉孙吉平贾延劼杨于嘉
- 关键词：黄芩苷细胞系增殖胰岛细胞瘤细胞周期分布MTT测定S期细胞
