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孔德升: 作品数：12 被引量：12H指数：2; 供职机构：复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室更多>>; 发文基金：上海市重大科技攻关项目国家自然科学基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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高抗凝活性抗人组织因子单克隆抗体及其制备方法和应用: 本发明属生物技术领域，涉及一种高抗凝活性抗人组织因子单克隆抗体及其制备方法和应用。通过对组织因子与X因子的结合位点进行生物信息学和抗原免疫原性分析，寻找免疫原性好且包括关系着组织因子与X因子结合的关键氨基酸残基的氨基酸序...; 马端蔡旭刘静彭卓醇孔德升李笑天; 文献传递

组织因子途径抑制物-2及其结构域1的基因克隆、表达和功能研究: 组织因子途径抑制物一2(tissuefactorpathwayinhibitor-2，TFPI-2)，又称胎盘蛋白一5(placentaprotein-5，PP-5)和基质相关丝氨酸蛋白酶抑制剂(matrixassoci...; 孔德升; 关键词：组织因子途径抑制物模式生物基因克隆信号传导; 文献传递

斑马鱼组织因子途径抑制物－2基因和蛋白: 本发明属于生命科学领域。涉及斑马鱼组织因子途径抑制物－2(zTFPI－2)的基因和蛋白。本发明克隆并鉴定了斑马鱼组织因子途径抑制物－2(zTFPI－2)基因，其编码的蛋白质与人TFPI－2具有很高的同源性，原位杂交证实z...; 马端孔德升宋后燕; 文献传递

脑源性神经营养因子-绿色荧光蛋白融合基因载体的构建、鉴定及初步应用研究: 2009年; 目的构建脑源性神经营养因子（BDNF）绿色荧光蛋白（GFP）融合表达质粒，观察其融合蛋白的特性。方法将BDNFcDNA片段插入pcDNA3．1／NT-GFP—TOPO真核表达质粒，使其与GFP同处一个阅读框架中，测序鉴定后，转染培养的雪旺细胞，用免疫组织化学和蛋白质印迹（Western botting）观察外源性目的蛋白的表达情况，并用该质粒活体转染视神经切断的大鼠模型，观察所表达外源性蛋白的神经保护作用。结果测序证实质粒构建成功。Westernbotting结果显示，BDNF—GFP融合蛋白表达一相对分子质量为41×10^3。大小条带。荧光显微镜下可见BDNF～GFP转染的细胞发出绿色荧光，免疫组织化学染色后，可见绿色荧光与红色荧光完全重合。转染BDNF—GFP质粒和GFP质粒的大鼠视神经切断术后7d存活视网膜神经节细胞（RGC）分别为（1201±286）、（482±151）个／mm^2，存活百分比分别为（51．39±12．24）％和（20．62±6．46）％；28d时存活的RGC分别为（715±71）、（112±24）个／mm^2，存活百分比分别为（30．59±3．04）％和（4．79±1．03）％。两组存活百分比比较，差异有统计学意义（t=3．144，11．378；P〈0．01）。结论BDNF-GFP融合表达载体可以转录翻译为一融合蛋白，该蛋白可自发绿色荧光，并具有BDNF的生物学活性。; 方媛樊嘉雯莫晓芬孙兴怀郭文毅孔德升马端田洁; 关键词：基因疗法动物实验

脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体被引量：2: 2006年; 目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养;建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-C3、2-G9、3-H9;进而在小鼠体内诱生腹水,并用rprotein A亲合层析法纯化;经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上,建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果纯化的单抗用SDS-PAGE测定纯度,在Mr为150 000左右呈现一条带;Western blot测定显示1-C3、2-G9、3-H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF,经免疫球蛋白(Ig)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgG1;用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)pg/mL。结论用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立,为TF的制备纯化和检测奠定了基础,也使TF的临床深入化研究成为可能。; 蔡旭彭卓醇孔德升郭泓珅白浩宋后燕马端; 关键词：免疫单克隆抗体

TFPI-2 kunitz结构域-1在毕赤酵母中的表达及其性质研究: 研究背景和目的:组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)又称胎盘蛋白5(PP5)和基质系列蛋白酶抑制物(Matrix Serine Protease In...; 孔德升蔡旭宋后燕马端; 文献传递

重组TFPI缺失突变体TFPI_(1-161)在毕赤酵母中的高效表达及功能鉴定被引量：2: 2004年; 人组织因子途径抑制物 (TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI1 - 1 6 1 仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域 ,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒pGEM 3Zf( ) TFPI为模板 ,用PCR方法获得TFPI1 - 1 6 1 基因 ,构建表达质粒pPIC9K TFPI1 - 1 6 1 并转化毕赤酵母GS115。通过筛选多拷贝转化子及优化发酵培养条件 ,首次在毕赤酵母中高效表达了TFPI1 - 1 6 1 ,经纯化后最终产量高于酿酒酵母 2 0倍以上。由于糖基化程度不同 ,TFPI1 - 1 6 1 表达为TFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和TFPI1 - 1 6 1 (2 7kD)两种分子形式 ,其等电点分别为 4 8和 4 9。根据等电点差异 ,二者可通过阴离子交换层析得到分离 ,其活性无显著性差异。经分子筛和阴离子交换层析分离纯化后 ,从 4L发酵培养液中可分别获得 1 4gTFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和 1 8gTFPI1 - 1 6 1 (2 7kD) ,其比活性分别达 12 880u mg和 12 4 0 0u mg ,回收率达 5 5 %。经稀释的凝血酶原时间及发色底物法检测 ,重组TFPI1 - 1 6 1 具有良好的抗凝及抑制FXa活性的作用。为获得大量TFPI1 - 1 6 1 提供了一种廉价高效的蛋白表达纯化方式。; 白浩马端宋后燕莫炜顾银良孔德升郭泓珅; 关键词：组织因子途径抑制物 PICHIA PASTORIS

构建睫状神经营养因子绿色荧光蛋白融合表达载体电穿孔转染雪旺细胞的研究被引量：2: 2009年; 目的构建睫状神经营养因子-绿色荧光蛋白（CNTF-GFP）融合表达质粒，以电穿孔法辅助转染培养的雪旺细胞，为优化细胞移植、促进视神经再生提供效果更好且便于观察的方法。方法实验研究。构建重组质粒pcDNA3．1／CNTF-GFP；经测序鉴定后，电穿孔法辅助转染培养的雪旺细胞；荧光显微镜下动态观察转染效果，流式细胞计数；转染24h后，用RT—PCR及免疫组化法检测基因转染及蛋白表达情况。结果重组质粒经测序鉴定无误；在3h即可见部分荧光，12h逐渐增多，24—72h到达高峰，持续至7d仍有表达；流式细胞计数得转染率为44．93％±12．92％，转染24h后，RT-PCR示目的基因有较高转录，免疫组化示有CNTF蛋白的高表达，并与GFP蛋白表达部位完全重合。结论成功构建了CNTF-GFP融合表达质粒；电穿孔法转染雪旺细胞后，表达良好，为制备转基因的种子细胞从而促进视神经再生的研究奠定了基础。; 方媛莫晓芬孙兴怀郭文毅田洁孔德升马端张萌; 关键词：睫状神经营养因子绿色荧光蛋白质类电穿孔

抗重组人组织因子途径抑制物1单抗抑制rhTFPI-1的抗凝作用被引量：1: 2006年; 目的研制抗重组人组织因子途径抑制物1单克隆抗体(rhTFPI-1 M cAb),了解其对rhTFPI-1抗凝活性的抑制作用。方法将分泌rhTFPI-1 M cAb的杂交瘤细胞注入经降植烷预处理的Balb/C小鼠腹腔中,诱生腹水。腹水先经硫酸铵沉淀处理,再用rprote in A亲和层析柱进一步纯化。对纯化后的单克隆抗体进行SDS-PAGE检测和W estern b lot分析。并用发色底物法测定rhTFPI-1 M cAb对rhTFPI-1的活性抑制。结果纯化后的抗rhTFPI-1 M cAb经SDS-PAGE检测,其纯度为98%;W estern b lot分析显示其能特异识别rhTFPI-1抗原。发色底物法检测结果表明,其能有效阻断rhTFPI-1的抗FVIIa/TF活性,M cAb浓度为8 mg/L时FVIIa/TF剩余活性达到86%;但对rhTFPI-1的抗FXa活性作用不明显,M cAb浓度为80 mg/L时FXa的剩余活性为48.4%。结论rhTFPI-1 M cAb可明显抑制rhT-FPI-1活性,阻碍rhTFPI-1对TF/FVIIa的抑制活性。纯化后的rhTFPI-1 M cAb的各项鉴定指标均较为理想,rprote inA亲和层析柱纯化方法简便易行值得推广。; 蔡旭白浩孔德升郭泓珅梁旺宋后燕马端; 关键词：单克隆抗体组织因子途径抑制物

长效TFPI突变体的分子设计及性质研究: 组织因子途径抑制物(Tissue Factor Pathway Inhibitor,TFPI)是外源性凝血途径的特异性抑制物,具有抗凝和抗炎的双重作用,对重度败血症、感染性休克/DIC等疾病具有明显的治疗作用.但其半衰期...; 白浩孔德升郭泓珅林伊凤彭卓醇蔡旭张农马端; 关键词：TFPI 突变体半衰期药代动力学; 文献传递

孔德升

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