喻琼
- 作品数：90 被引量：410H指数：11
- 供职机构：深圳市血液中心更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金深圳市科技计划项目深圳市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学政治法律更多>>
- Landsteiner-Wiener血型系统测序分型技术的建立被引量：5
- 2007年
- 目的建立Landsteiner-Wiener血型系统的测序分型技术。方法(1)随机采集45名非血缘关系无偿志愿捐献者外周血样,用EDTA抗凝。(2)从外周抗凝血样中提取总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,反转录产生LW基因的cDNA(包括3个外显子),采用ABI PrismTM 3100 DNA测序仪对RT-PCR产物中LW基因的第1外显子进行测序。(3)提取基因组DNA,采用一对引物扩增LW基因的第1外显子、第1内含子和第2外显子,全长1224bp,对第1外显子PCR产物直接进行DNA测序分析。结果45例捐血者的样本,分别经RT-PCR产物测序和PCR产物直接测序,均取得了成功,LW基因第1外显子多态性位置第308碱基均为腺嘌呤。结论本研究在国内率先建立了LW血型基因的分子测序方法,可为进一步研究中国人群LW血型基因多态性提供有效方法。
- 杨宝成苏宇清魏天莉喻琼梁延连邓志辉
- 关键词：测序分析
- ABO血型缺失天然抗体分子机制的研究
- 2010年
- 喻琼苏宇清梁延连孙革李大成
- 关键词：ABO血型天然抗体吸收放散试验细胞反应血清学方法
- HLA全长序列测定及测序分型试剂的研制和应用
- 邓志辉徐筠娉杨宝成喻琼王大明邹红岩高素青曾健强何柳媚金士正程良红李桢魏天莉
- 人类白细胞抗原（HLA）为人类主要组织相容性系统，具有高度的分子遗传多态性、种族特性、单倍体连锁遗传和连锁不平衡等特点。PCR-SBT技术为全球公认的HLA基因分型“金标准”，然而，国内使用的HLA测序分型试剂尚依赖于国...
- 关键词：
- 关键词：试剂盒人类白细胞抗原测序分型
- 人类白细胞抗原HLA—DPA1和HLA—DPB1基因高通量测序分型的研究被引量：10
- 2012年
- 目的建立可靠的人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）基因HLA—DPA1和HLA—DPB1同步测序分型方法，研究南方汉族人群HLA-DPA1和HLA—DPB1基因的多态性。方法根据HLA-DPA1和HLA-DPB1等位基因的全长序列，分别采用位点特异性引物扩增HLA-DPA1和HLA-DPB1目的基因片段，涵盖完整的第2外显子。PCR产物经磁珠纯化，用自行设计的测序引物及优化的测序反应体系对HLA—DPA1和HLA—DPB1第2外显子进行双向测序。纯化的测序反应产物经ABI3730测序仪测序，用Assign3．5SBT软件分析结果。结果PCR扩增获得了清晰的HLA—DPA1和HLA-DPB1基因目的片段，对HLA～DPA1和HLA—DPB1基因的第2外显子进行的双向测序结果中，序列无背景信号和杂峰。在176名南方汉族健康无关个体中，共检出了4种HLA—DPA1等位基因，其频率分布依次为：DPA1＊02：02（0．589）〉DPA1＊01：03（0．284）〉DPA1＊02：01（0．096）〉DPA1＊04：01（0．031）。HLA-DPB1检出了14种等位基因，其中频率大于5％的4种等位基因为：DPB1＊05：01、DPB1＊02：01、DPB1＊04：01和DPB1＊02：02，频率介于1％～5％的7种，其余3种等位基因的频率均为1％以下。HLA-DPB1测序分型的结果与用Atria AlleleSEQR商品化测序分型试剂盒检测的结果一致。结论建立了HLA-DPA1及HLA—DPB1测序分型的方法，在群体遗传学及疾病关联研究等领域具有广泛的实用价值。
- 喻琼王大明邓志辉
- 关键词：人类白细胞抗原测序分型
- 9个STR位点荧光法检测与血型血清学方法鉴定亲子关系的对比研究被引量：3
- 2004年
- 目的 对血型血清学与PCR -STR荧光检测这两种鉴定亲子关系的实验方法进行对比研究。方法 常规亲子鉴定中 ,采用血型血清学方法检查ABO、Rh、MN、P、HLA -A、B等血型 ,PCR -STR荧光法分析D8S1 1 79等 9个STR位点长度多态性。结果 ①在 1 66例亲子鉴定中 ,认定亲生关系的为 1 32例 ,排除亲生关系的 34例 ;② 1 32例认定亲生关系案例中 ,血清学方法RCP值介于 83 .40 %～ 99.9% ,平均 96 .2 7% ;而PCR -STR方法RCP值介于 99.82 96 %～ 99.99998% ,平均 99.986 %。③ 34例排除亲生关系的案例中 ,血清学方法排除 33例 ,排除的血型系统和HLA位点为 1～ 4个 ,平均 1 .8个 ;而PCR -STR方法排除 34例 ,排除的STR位点为 3～ 9个 ,平均 5 .8个 ;血清学不排除而STR位点排除亲生关系的案例有 1例。④观察 2 64次减数分裂 ,发现FGA、A7S82 0位点各突变 1次。结论 本文的 9个STR位点的非父排除概率高于血清学方法。当 9个STR位点均符合遗传规律时 ,RCP值通常可达 99.99% ;但STR位点存在基因突变 ,需增加其它的遗传标记进行检测 ,以保证结果的准确。
- 曾健强喻琼
- 关键词：亲子鉴定
- 中国人群ABO血型系统基因分型研究与应用(英文)被引量：3
- 2005年
- 背景:ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点。目的:研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。设计:随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果。单位:一所市级血液中心输血医学研究所。对象:选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血者个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁。1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科。方法:快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因。主要观察指标:260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型。结果:在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.5827,0.1846,0.
- 喻琼吴国光梁延连苏宇清
- 关键词：聚合酶链反应ABO血型系统基因频率
- B亚型中Bx新等位基因的鉴定被引量：7
- 2006年
- 目的对ABO血型中B亚型分子遗传背景的研究,发现并鉴定ABO新等位基因。方法对5份血型血清学鉴定为B亚型的样本,采用PCR-SSP、ABO基因第6及第7外显子直接测序方法进行基因定型;并对目的B亚型样本进行RT-PCR、巢式PCR扩增、测序,分析其cDNA结构的差异。结果5份血清学为B亚型的样本中,血清学鉴定为Bx的个体发现了一个新的B等位基因。该等位基因与B101等位基因相比,差异仅在于第7外显子的B基因序列中nt721位C>T突变。其余4份B亚型样本的ABO基因第6、7外显子都未发现新的点突变。结论首次在中国汉族人中发现一个721C>T新变异的B等位基因,该等位基因nt721位由C转变为T,241位氨基酸由精氨酸转变为色氨酸,可导致糖基转移酶活性的降低,表明ABO基因的第241位氨基酸对决定糖基转移酶活性是至关重要的。
- 梁延连喻琼苏宇清吴国光
- 关键词：B亚型
- 中国汉族人群中Dia抗原和Dib抗原的分子遗传分析被引量：25
- 2007年
- 目的研究中国汉族人群Diego血型系统中Dia和Dib抗原表达的分子遗传背景。方法采用血型血清学方法对2990例非血缘关系的捐血者进行Diego血型鉴定,从中随机选择20例表现型为Di(a-b+)的样本,以及筛选到的所有Di(a+b-)稀有血型样本,采用PCR-SSP、DNA直接测序方法分析Diego血型基因的分子遗传背景。结果2990例捐血者中,发现Di(a+b-)表现型2例,Di(a+b+)167例,Di(a-b+)2821例。随机选择的20例表现型为Di(a-b+)的DNA样本,经PCR-SSP法检测的基因型为DI2DI2,对DI基因第19外显子直接测序,2561位上碱基为C。2例稀有血型Di(a+b-)的DNA序列在19外显子2561位上碱基为T,基因型为DI1DI1。结论中国汉族人群Dia和Dib抗原表达的分子遗传基础是DI基因第19外显子2561位上碱基T-C的置换,引起第854位氨基酸的改变。
- 杨宝成苏宇清喻琼魏天莉李大成梁延连
- 关键词：中国汉族人群PCR-SSP技术直接测序
- 利用孕妇血浆中胎儿游离DNA进行无创伤性产前基因诊断的研究进展被引量：17
- 2012年
- 孕妇血浆中胎儿游离DNA,源于胎儿细胞和/或胎盘的凋亡,经核酸内切酶选择性地剪切为313 bp以下的短片段分子,因相对含量丰富,成为了当前无创伤性产前分子遗传诊断中胎儿DNA的重要来源,业已开展了胎儿性别鉴定、RhD阴性孕妇的Rh(D)基因检测、胎儿非整倍体病的诊断、STR遗传标记检测等应用研究。根据胎儿游离DNA的浓度、纯度、分子片段大小分布的特征和检测的靶基因,采用相应的分子基因诊断策略和实验设计,限制扩增产物的片段长度,有助于提高无创伤性产前胎儿分子遗传诊断的成功率。当前,大规模并行基因组测序技术为直接利用胎儿游离DNA进行无创伤性产前基因诊断开辟了新途径。
- 喻琼邓志辉
- 关键词：无创伤性产前诊断胎儿游离DNA纯度
- 双重复合糖基转移酶的ABO基因启动子CpG岛甲基化被引量：2
- 2013年
- 背景:在ABO血型抗原的研究中,绝大多数样本是相同的ABO基因表达出正常的相同的ABH抗原。但有一定数量的样本表现出具有相同分子遗传背景但表达出来的抗原强度却随着家系\个体不同而有所差异,说明了ABO血型中复杂的表达调控机制。分析一类罕见的双重复合型标本的ABO血型血清学与基因背景情况,深入表观遗传学的研究,有利于部分揭示ABO基因表达机制。目的:探讨双重复合型ABO糖基转移酶表达相关的ABO基因启动子CpG岛甲基化水平与ABH抗原表达的关系。方法:6例经血型血清学定为CisAB或B(A)型的标本,进行ABO基因编码区全长序列和启动子序列的测定,采用重亚硫酸盐处理法检测ABO基因启动子CpG岛甲基化程度。结果与结论:6例双重复合AB型的标本中,在B101等位基因基础上存在nt803C>G突变的2个CisAB05/B(A)06等位基因,在ABO启动子CpG岛区域两者在nt-33(30%)、nt+27(50%)、nt+49(50%)具有甲基化差异;在A101等位基因序列的基础上存在nt803C>G突变的2个CisAB01等位基因,在ABO启动子CpG岛区域两者在nt-26(10%)位置有甲基化差异;在B101等位基因基础上存在nt640A>G突变的2个B(A)04等位基因ABO启动子CpG岛,在nt-33(10%)、nt+16(50%)、nt+57(60%)、nt+59(60%)、nt+68(60%)和nt+74(60%)位有甲基化差异。全部的6例标本ABO基因启动子区域DNA序列无任何突变异常。结果提示在相同的ABO遗传基因背景下,ABO基因启动子CpG岛区域某些位点甲基化可能影响ABH抗原在红细胞膜表面的表达。
- 喻琼苏宇清甄建新邓志辉
- 关键词：正反定型不符ABO基因启动子CPG岛基因甲基化
