周家华
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目教育部留学回国人员科研启动基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡黑素皮质素4受体cAMP/PKA信号通路特点及其细胞筛选模型的建立
- 本文旨在研究三种黑素皮质素4受体(MC4R)激动剂和拮抗剂对鸡MC4R(cMC4R)WT及4个突变体(Q18H、G21R、S76L和L299P)cAMP/PKA信号通路的影响,建立了基于cMC4R信号通路以cMC4R为靶...
- 周家华王志强
- 关键词：突变体信号通路
- 文献传递
- 反应元件CRE和SRE参与猪CCR1和CCR5信号通路的分析
- 2015年
- 为探明调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)与趋化因子受体1(CCR1)、趋化因子受体5(CCR5)的信号通路关系,采用分子克隆技术、Western blotting技术构建、鉴定猪CCR1和CCR5真核表达载体,通过双荧光素酶报告系统检测RANTES分别作用CCR1和CCR5后萤火虫荧光素酶的表达量间接反映出cAMP反应元件(CRE)和血清反应元件(SRE)的表达水平。结果显示,RANTES作用于CCR1能降低HEK293T细胞内CRE的表达水平,对SRE有激活作用,而作用于CCR5后既能提高CRE的表达水平,也能增强SRE的表达。结果证明,RANTES通过CCR1受体能激活SRE,降低由毛喉素升高的CRE表达水平;RANTES通过CCR5受体对CRE和SRE均有激活作用。
- 柴继田姜军娜李栋王建兵王建兵李颖颖周家华
- 关键词：RANTESCCR1CCR5CRESRE
- 猪趋化因子受体5基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2014年
- 为了构建猪趋化因子受体5(CCR5)真核表达载体[CCR5-pcDNA3.1(+)],试验采用PCR、TA克隆、DNA重组、酶切等方法进行鉴定。结果表明:试验成功构建了猪CCR5的真核表达载体。
- 伏智亮于宁柴继田周家华王志强
- 关键词：克隆DNA重组
- 鸡趋化因子受体2和趋化因子受体5真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 试验旨在构建鸡趋化因子受体2(CCR2)和趋化因子受体5(CCR5)真核表达系统,并瞬时转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)观察其表达情况。以鸡基因组DNA为模板,PCR克隆出鸡的CCR2和CCR5基因的编码序列(CDS),将克隆出的片段插入真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pc DNA3.1(+)-CCR2、pc DNA3.1(+)-CCR5,酶切鉴定后测序。加Kozak序列和myc分子标签后,瞬时转染CHO-K1细胞,用反转录PCR(RT-PCR)、Western blot分别从转录、翻译水平鉴定重组质粒是否能在真核细胞中表达。结果显示,成功克隆出鸡CCR2、CCR5的CDS序列,酶切和测序结果表明pc DNA3.1(+)-CCR2-myc、pc DNA3.1(+)-CCR5-myc构建成功,RT-PCR、Western blot证实转染的重组质粒能在CHO-K1细胞中转录和翻译。本试验成功构建出鸡CCR2和CCR5真核表达载体,并能在真核细胞中表达,为进一步研究CCR2、CCR5的功能奠定了基础。
- 周家华张敏敏李栋柴继田王建兵王志强
- 关键词：真核表达
- 鸡黑素皮质素受体-4反向激动剂细胞筛选模型的建立被引量：2
- 2015年
- 本试验旨在建立体外鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R)反向激动剂的细胞筛选模型,为从中草药中筛选出能与cMC4R作用且存在活性的中药成分提供一些基础性的研究。将成功构建的cMC4R真核表达质粒cMC4RpcDNA3.1(+)-myc与报告基因质粒pGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]按1∶5的比例共转染到CHO-K1细胞,两周后经有限稀释法获得单克隆;将获得的单克隆分别用CRE激活剂Forskolin和MC4R激动剂NDP-MSH作用6h,挑选萤火虫荧光素酶的相对表达量最高的单克隆作为阳性细胞株;提取阳性细胞总RNA,RT-PCR检测阳性细胞内cMC4R基因、荧光素酶报告基因的转录水平;对MC4R激动剂NDP-MSH的终浓度、NDP-MSH孵育时间及溶剂DMSO的终浓度进行优化,应用Z’因子对筛选方法进行评估。结果显示,获得了5个单克隆(A2、F7、F8、F9、H10),其中单克隆A2的萤火虫荧光素酶的相对表达量最高,将其作为阳性细胞株;RT-PCR在预期位置扩增出大小分别为996和1 653bp的两条目的条带;激动剂NDP-MSH终浓度为10-9 mol/L、NDP-MSH孵育时间为8h、溶剂DMSO终浓度小于2%时,筛选模型Z’因子为0.82。结果表明,本试验所建立的筛选方法可靠、稳定,细胞筛选模型可用于cMC4R反向激动剂的筛选,为进一步从中药中筛选出有效物质奠定了基础。
- 周家华李栋姜军娜柴继田王建兵李颖颖王志强
- 关键词：报告基因
- 100g/kg磷酸替米考星可溶性粉和100g/L替米考星溶液在鸡体内的比较药动学被引量：1
- 2015年
- 采用单剂量平行随机对照试验设计,将24只健康肉用商品鸡随机分成2组,每组公母各半。分别单剂量(12mg/kg,根据体重以替米考星计)经口内服100g/kg磷酸替米考星可溶性粉和100g/L替米考星溶液(对照品)。给药后按预定时间采集血样,血浆中替米考星的质量浓度采用HPLC紫外检测器进行定量分析。对实测的血药浓度-时间数据采用Winnonlin5.2药动学分析软件计算药代动力学参数,对100g/kg磷酸替米考星可溶性粉和100g/L替米考星溶液在鸡体内的药动学参数进行比较研究。结果显示,100g/L替米考星溶液对照品单剂量内服后,平均消除半衰期(t1/2β)为17.316h,达峰时间(tmax)和峰值浓度(Cmax)分别为1.083h和0.399μg/mL,平均药时曲线下面积(AUC)为1.891h·μg/mL,平均滞留时间(MRT)为8.286h;100g/kg磷酸替米考星可溶性粉单剂量内服后,t1/2β为13.207h,tmax和Cmax分别为1.333h和0.372μg/mL,AUC为1.813h·μg/mL,MRT为7.612h。结果表明,100g/kg磷酸替米考星可溶性粉和100g/L替米考星溶液口服给药在鸡胃肠道内吸收迅速,消除较慢。两者经口给药的主要药动学参数之间均无显著差异(P>0.05)。
- 王建兵李栋柴继田周家华姜军娜李颖颖吴天兴韩孝欣曹杰王志强
- 关键词：口服药动学
