吴风云
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 供职机构：暨南大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bcr/abl融合基因的小干扰RNA对K562细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察特异性bcr/abl融合基因的siRNA对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成bcr/abl融合基因融合位点b3:a221个核苷酸siRNA作用于K562细胞,用WST-8法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR检测bcr/abl mRNA表达水平;PI单染流式细胞仪检测细胞周期;AnnexinV-PI双染测定细胞凋亡比例;Hochest33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果①Bcr/ablsiRNA作用K562细胞24,48,72h后,明显抑制K562细胞增殖,各浓度组间的增殖抑制率差异无显著性(P>0.05);②Bcr/ablsiRNA能显著下调bcr/abl mRNA水平,各浓度组间差异无显著性(P>0.05);③Bcr/ablsiRNA作用组细胞周期阻滞于G1期;④Bcr/ablsiRNA作用后细胞出现明显的早期凋亡群,各浓度组间的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论特异性bcr/ablsiRNA可显着抑制K562细胞bcr/abl融合基因的表达,抑制细胞的增殖,诱导凋亡,但其作用未显示明显的剂量依赖性。
- 张小鹰曾慧兰蒋建伟陈涛吴风云何金花韩新爱廖晓莉
- 关键词：BCR/ABLSIRNAK562细胞凋亡
- 生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用被引量：4
- 2010年
- 目的探讨生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用。方法WST法、台盼蓝拒染法、克隆形成抑制实验检测聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,检测PEI-ASODN联合5-FU对肝癌移植瘤小鼠瘤重、瘤体积的改变,对肝癌腹水瘤小鼠平均存活天数的影响。结果不同浓度的PEI-ASODN作用于SMMC-7721细胞48h后,0.75μmol/L的PEI-ASODN分别作用细胞24、48、72和96h后,均能对细胞产生明显的抑制作用;PEI-ASODN对细胞的克隆形成也有显著的抑制作用,与细胞对照组相比有显著的统计学差异(P<0.01)。肝癌腋下移植瘤小鼠,各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以联合用药组(5-FU+PEI-ASODN)最明显,瘤重抑瘤率高达56.91%,瘤体积抑制率高达57.83%;肝癌腹水瘤小鼠模型,联合用药组生命延长率为94.09%,与生理盐水组相比,具有显著性差异(P<0.01)。结论聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)可显著抑制肝癌细胞生长,并可提高荷肝癌小鼠对5-FU的敏感性。
- 吴风云黄光胜蒋建伟王芳徐向东彭单依
- 关键词：生存素反义核酸肝癌5-FU
- 蛋白激酶Cα反义核酸诱导肺癌A549细胞凋亡被引量：1
- 2009年
- 目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞凋亡的影响。方法以PEI介导PKCαASODN转染A549细胞,设空白对照组、PEI组、PEI-ASODN组(PKCαASODN终浓度分别为1.25、1.50μmol/L),通过Hoechst33258染色和电镜检测,观察细胞凋亡的形态学改变;设空白对照组、PEI组、PEI-随机寡核苷酸(RODN)组(RODN终浓度1.50μmol/L)、PEI-ASODN组(PKCαASODN终浓度分别为1.00,1.25,1.50μmol/L),采用PI单染和AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术,检测细胞亚二倍体峰和早期凋亡率。结果Hochest33258染色和电镜检测均可见PKCαASODN转染组细胞有核固缩、边集和裂解等凋亡形态学变化。流式细胞术示:PKCαASODN转染组细胞出现了明显的亚二倍体峰和早期凋亡细胞群,与空白对照组、PEI或PEI介导的RODN转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05),并呈浓度依赖性效应。结论PEI介导的PKCα反义核酸能诱导A549细胞凋亡。
- 严玉霞蒋建伟黄志宏林春兰吴志慧吴风云
- 关键词：蛋白激酶CΑ反义核酸A549聚乙烯亚胺
- PKCα反义核酸对肺癌A549细胞增殖的影响
- 2009年
- 目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞生长增殖及PKCα基因表达的影响。方法以PEI介导PKCα ASODN,随机寡核苷酸(RODN)分别转染A549细胞,采用WST法和克隆形成抑制实验分析细胞生长增殖抑制效果;RT-PCR检测PKCα mRNA的表达水平;Western blotting检测PKCα蛋白的表达水平。结果PEI介导的PKCα ASODN转染A549细胞后,细胞生长增殖和克隆形成均受到抑制(P
- 严玉霞蒋建伟黄志宏吴志慧林春兰吴风云
- 关键词：蛋白激酶CΑ反义核酸A549聚乙烯亚胺
- Mcl-1反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨髓样细胞白血病-1(Mcl-1)反义寡核苷酸(ASODN)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法:将Mcl-1 ASODN转染入体外培养的肝癌HepG2细胞。用WST-8法检测不同浓度的Mcl-1 ASODN对HepG2细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测Mcl-1 ASODN对HepG2细胞周期和凋亡的影响,用Hoechst33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变。结果:Mcl-1 ASODN作用HepG2细胞48 h后,与空白对照组(blankcontrol)和随机寡核苷酸(RODN)对照组相比,Mcl-1 ASODN组能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和诱导其凋亡(P<0.05),Mcl-1 ASODN组细胞出现S期明显的阻滞;Hoechst33258染色可见大量的细胞核固缩,核碎裂。结论:Mcl-1 ASODN能抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。
- 吴风云蒋建伟张洹
- 关键词：反义寡核苷酸凋亡肝癌细胞
- 辛伐他汀联合5-FU对K562细胞增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨辛伐他汀(Sim)联合5-FU对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养人白血病K562细胞,用MTT法观察Sim联合5-FU对细胞的增殖抑制作用,实时荧光定量RT-PCR观察对bcr/abl融合基因mRNA表达水平的影响。流式细胞术、Hoechst33258染色观察Sim与5-FU联合应用诱导细胞凋亡的作用。结果:低浓度的Sim与5-FU联合应用在抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡,均较各单一高浓度用药组的作用明显增强,并且下调bcr/abl融合基因mRNA表达。结论:Sim与5-FU联用具有明显的协同抑制细胞增殖的作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡,下调bcr/abl融合基因的表达有关。
- 何金花吴风云刘冠杰张小鹰廖晓丽蒋建伟
- 关键词：辛伐他汀5-氟尿嘧啶K562细胞凋亡
- 靶向apollon反义核酸抑制结肠癌细胞增殖并提高化疗药物的敏感性被引量：4
- 2011年
- 研究凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员apollon反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)作用于结肠癌Lovo细胞,观察其对细胞的增殖抑制作用、致凋亡作用及对某些化疗药物敏感性的影响。将人工合成的apollon ASODN,经脂质体包裹后作用于结肠癌Lovo细胞48 h后,采用WST法与克隆形成抑制实验检测不同浓度的apollon ASODN对Lovo细胞增殖抑制作用;实时荧光定量RT-PCR检测细胞apollon mRNA的表达水平;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Hoechst 33258染色观察Lovo细胞凋亡的形态学改变;采用apollon ASODN联合5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、盐酸表柔比星(EPI),观察对Lovo细胞增殖抑制作用。实验表明,apollon ASODN转染Lovo细胞48 h,能明显下调apollon mRNA的表达,细胞增殖和克隆形成均被显著抑制(P<0.05),并呈浓度依赖关系。Apollon ASODN组G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,出现明显的S期阻滞。流式细胞术检测结果显示,apollon ASODN组存在明显的细胞凋亡,经荧光显微镜观察,可见核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化。0.08μmol.L-1 apollon ASODN与不同浓度的化疗药物(5-FU、DDP、EPI)联合作用于Lovo细胞48 h,可提高Lovo细胞对这些化疗药物的敏感性,增敏倍数分别为2.58、4.47和5.33倍。结果提示,apollon ASODN可下调apollon基因的mRNA表达水平,抑制Lovo细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于S期,并提高结肠癌细胞对5-FU、DDP、EPI的敏感性。
- 何金花张小鹰吴风云廖晓莉王威蒋建伟
- 关键词：APOLLON反义核酸LOVO细胞结肠癌
- PKCα siRNAs有效序列的筛选及其对肺癌A549细胞的作用
- 2009年
- 目的探讨人蛋白激酶Cα(PKCα)小干扰RNA(siRNA)对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响。方法设计并化学合成6条PKCα siRNAs,转染A549细胞,通过改良MTT法及RT-PCR筛选;对3条效果较好的PKCα siRNAs,进一步采用克隆形成抑制实验、Hoechst 33258染色、PI单染和AnnexinⅤ/PI双染以及Western blot检测。结果6条PKCα siRNAs均显著下调了PKCα mRNA水平;除No.5siRNA外,其他5条siRNA均显著地抑制了A549细胞增殖(P<0.05)。3条效果较好的PKCα siRNAs转染组PKCα蛋白的表达显著下调,克隆形成抑制率、亚二倍体百分率和早期凋亡细胞比例均显著高于对照组(P<0.05),并出现了核固缩、边聚和裂解等凋亡形态学变化。结论本实验发现3条能显著抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡的PKCα siRNAs。
- 严玉霞蒋建伟黄志宏林春兰张小鹰吴风云
- 关键词：蛋白激酶CΑ小干扰RNA肺癌A549
- 槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究被引量：13
- 2009年
- 目的研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法用终浓度为0、0.5、1、2、4、6 mg/mL的槐耳清膏和10μg/mL的5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用于SGC-7901细胞,分别于24 h和48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48 h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系(P<0.05);槐耳清膏6 mg/mL组的抑制率48 h后达到(77.9±2.3)%,5-Fu组为(53.4±1.6)%,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测显示,槐耳清膏4 mg/mL组的细胞凋亡率最高,早期凋亡细胞达33.2%;6 mg/mL组早期凋亡细胞6.3%,而晚期凋亡细胞为19.9%。RT-PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调。结论槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。
- 吴志慧蒋建伟曹明溶陈涛张小鹰吴风云
- 关键词：槐耳清膏胃癌凋亡生存素
- 靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响被引量：1
- 2010年
- 为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.
- 张小鹰吴风云何金花廖晓莉王威蒋建伟
- 关键词：增殖细胞核抗原真核细胞表达载体HEPG2细胞
