吕宁
- 作品数：13 被引量：27H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点区的表达及其优化
- 猪传染性胃肠炎/(Transmissible gastroenteritis of swine,TGE/)是由猪传染性胃肠炎病毒/(Transmissible gastroenteritis virus of swine...
- 吕宁
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点
- 文献传递
- 一种生态环境地下水监测装置
- 一种生态环境地下水监测装置，涉及水环境检测装置技术领域，包括支撑架、升降装置、若干个监测装置，支撑架顶部设置升降装置，内部设置若干个与升降装置连接的监测装置，检测装置包括排水动力箱、防护箱、监测箱、排水板和进出水头，监测...
- 王琪叶一禾王建梅吕明吕宁张继平曹庆喜郝新忠席艳芸艾如刘晓利付选齐秦于倩
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点片段的真核表达被引量：2
- 2007年
- 为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺癌细胞EMT6,在倒置荧光显微镜下可观察到明亮的绿色荧光分布于阳性细胞,并且RT-PCR检测结果显示,RT-PCR扩增产物与目的基因片段大小相符,证明其确实源于重组质粒转录后的mRNA。
- 吕宁彭树英张涌
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因
- 牛精原干细胞体外长时间存活增殖及鉴定
- 探索了血清浓度以及SCF、LIF、GDNF对牛精原干细胞体外存活和增殖的影响,并对其进行了鉴定．试验1:以高糖DMEM为基础培养液,添加浓度为0％、2．5％、5％和10％的胎牛血清(Fetal bovine serum,...
- 毕聪明张仕强彭树英吕宁张涌
- 关键词：精原干细胞SCFLIFGDNF
- 文献传递
- 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4
- 2012年
- 【目的】构建兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】以保存的VP60基因的质粒(pTeasy-VP60)为模版,用PCR方法获得VP60基因,并将其克隆到pET28a(+)载体上,构建重组表达载体pET28a(+)-VP60,酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,优化诱导表达时间和IPTG浓度;利用镍离子螯合层析纯化重组蛋白,并制备了高效价的抗VP60多克隆抗体。【结果】成功构建了兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达质粒pET28a(+)-VP60,其在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,重组蛋白分子质量为60ku,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性。【结论】成功实现了VP60基因的原核表达,制备了重组蛋白VP60的多克隆抗体,为进一步的VP60转基因研究奠定了基础。
- 张大鹏吕宁符容婕郭蔼光
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 苹果枝条钾含量与腐烂病发生程度关系研究
- 苹果树腐烂病引起苹果树枝干溃疡,严重时造成整树枯死,甚至毁园。钾元素是苹果树生长发育的大量元素之一。树体中钾营养元素的含量与苹果树腐烂病的发生和扩展关系密切。本研究探讨了苹果树二年生枝条周年钾含量动态变化、树体抵抗腐烂病...
- 吕宁
- 关键词：苹果树腐烂病组织学木质素
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白全基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2007年
- 采用RT-PCR和重组PCR扩增猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)TSX毒株纤突蛋白(spike protein,S)基因全长cDNA序列,分离纯化PCR产物,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆pGEM-S,并对其进行酶切鉴定和测序,对测序结果及推导氨基酸序列进行同源性分析。结果表明,S基因全长为4 350 bp(GenBank登录号DQ001167),编码1 449个氨基酸,N端前16个氨基酸为推测的信号肽序列,其后1 433个氨基酸构成成熟蛋白;与GenBank中已发表的9个TGEV毒株S基因进行比较,核苷酸序列同源性为95%～98%,推导的氨基酸序列同源性为95%～98%。基于S基因及其推导氨基酸序列的聚类分析表明,TSX株与Miller、T014、TS和HN2002株亲缘关系较近。S基因变异是由于碱基突变造成10处氨基酸发生改变,但主要抗原部位未发生任何变异,为进一步研制猪传染性胃肠炎基因疫苗提供了良好的候选基因。
- 彭树英吕宁何晓宁张涌
- 关键词：纤突蛋白基因克隆
- 不同培养条件对牛精原干细胞增殖的影响与特性鉴定被引量：6
- 2007年
- 探索血清浓度以及干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对牛精原干细胞体外增殖的影响,并对其进行鉴定。试验1:以高糖DMEM为基础培养液,添加浓度为0%、2.5%、5%和10%的胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS),分为4个试验组。结果表明,血清浓度影响牛精原干细胞的体外增殖,添加2.5%的FBS比较合适。试验2:培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及GDNF,可增加精原干细胞的数量,其中加入20μg/L SCF、80μg/L GDNF、10μg/L LIF后,与对照组比较能显著提高精原干细胞数(P<0.05)。采用碱性磷酸酶染色、细胞免疫组织化学染色和RT-PCR对牛精原干细胞进行鉴定,结果碱性磷酸酶染色呈弱阳性;细胞免疫组织化学染色Integrinβ1阳性、c-kit阳性;经RT-PCR扩增,获得了120 bp的Gfrα1序列和280 bp的c-kit序列,与预期的产物大小一致。因此,培养液中添加2.5%FBS、20μg/L SCF、80 ng/mL GDNF、10μg/L LIF对精原干细胞的增殖有利。
- 张仕强毕聪明彭树英吕宁张涌
- 关键词：精原干细胞SCFLIFGDNF
- 苦荞二氢黄酮醇4-还原酶的原核表达与多克隆抗体制备被引量：3
- 2015年
- 苦荞二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)是花青素合成途径的关键酶。该研究以苦荞种子灌浆期cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆苦荞DFR编码基因,并将其连接到表达载体pET47b上,转化获得苦荞DFR编码基因的大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,通过IPTG诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物,用亲和层析方法纯化蛋白,制备苦荞DFR多克隆抗体。RT-PCR技术获得了苦荞DFR编码基因的开放阅读框,重组表达载体经PCR和测序鉴定,表明表达载体构建成功,SDS-PAGE分析表达产物分别以可溶和不可溶的形式高效表达,亲和层析纯化得到融合蛋白,Western blotting显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的苦荞DFR蛋白在苦荞种子灌浆期中大量表达。苦荞DFR编码基因的原核表达与多克隆抗体的制备,为进一步开展DFR编码基因功能的研究奠定了基础。
- 李蒙陈芳霞吕宁陈鹏
- 关键词：苦荞原核表达多克隆抗体
- pEGFP-hTERT载体的构建及其在牛A型精原细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的牛A型精原细胞,观察绿色荧光表达,G418筛选阳性克隆。结果表明,pEGFP-hTERT载体与预设计的一致;pEGFP-hTERT载体转染牛A型精原细胞后,经筛选获得了1个表达绿色荧光蛋白的阳性细胞克隆。由此可见,hTERT表达载体得到了成功构建,并在牛A型精原细胞中实现了表达。
- 毕聪明张仕强彭树英吕宁张涌
- 关键词：基因重组HTERT
