史蔚
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南京大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 两种尿激酶原变体(Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His,Lys^(300)→His和Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His)的构建及性质研究被引量：1
- 2000年
- 利用定点突变方法 ,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Ser,Tyr187→His ,Lys30 0→His)及muk2 (Ala175→Ser ,Tyr187→His) .两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL2 1中表达得到包涵体 ,经体外变复性 ,SP Sepharose离子交换柱层析 ,Benzamidine Sepharose吸附除去双链尿激酶 ,得到的蛋白均为银染一条带 .用人工合成的发色底物S2 4 4 4测量muk1、muk2的动力学性质 ,muk1的内在酶活性比野生型 pro UK降低 8倍 ,muk2的内在酶活性比野生型 pro UK降低 2 .5倍 ;它们经纤溶酶 (plasmin)激活后的双链活性与 pro UK相比分别为muk1提高 50 % ,muk2和pro UK相当 .在实验基础上讨论了 pro UK高内源性催化活性的机制及其结构基础 .
- 史蔚朱慧薛宇鸣唐堂马忠
- 关键词：尿激酶原定点突变血栓
- 重组人尿激酶原的体外变复性研究(英文)被引量：5
- 2001年
- 目的 重组人尿激酶原在大肠杆菌中过量表达时形成不溶物包涵体 ,需经体外变复性后才能获得生物活性。本文旨在提高包涵体中变性尿激酶原的复性效率。方法 通过对pH、温度、变性剂种类及浓度、蛋白浓度、以及巯基氧化还原对比率等的定性定量分析 ,研究重组人尿激酶原体外变复性的基本条件 ,并比较了添加一些非特异有效成分、脉冲稀释、梯度透析等方法对提高重组人尿激酶原体外变复性效率的作用。结果 确定了重组人尿激酶原体外变复性的基本方法 ,其复性效率可达 30 %左右。结论 不同的包涵体蛋白的体外变复性效率因蛋白的分子大小、二巯键数目、疏水程度等而异 。
- 朱慧刘伟史蔚薛宇鸣蒯乐天马忠
- 关键词：重组人尿激酶原复性
