冉延超
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广州市科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- pQE-hbFGF表达系统的构建及其蛋白质的表达和纯化
- 2005年
- 目的 构建pQE hishbFGF表达载体 ,通过一步纯化得到 6×HishbFGF蛋白质。方法 用PCR扩增目的基因hbFGF ,连接到pQE4 0载体上 ,转化到Top10菌株筛选重组子 ,经测序后将质粒转化到表达菌M15上 ,经IPTG诱导表达 ,超声波破菌后通过镍离子螯合层析一步纯化得 6×HishbFGF蛋白质 ,ELISA鉴定产物 ,用MTT法检测产物促细胞增殖的生物活性。结果 hbFGF基因插入pQE载体中 ,在M15中 6×HishbFGF的表达量达到 2 0 % ,且为可溶性表达。经一步纯化后得到N端带 6个组氨酸的hbFGF蛋白 ,纯度为 96 % ,6×HishbFGF具有免疫原性及促进NIH3T3细胞增殖的活性。结论 6×HishbFGF蛋白质在M15中可溶性地高效表达 ,并经一步亲和层析得到纯度高活性高的产物 ,降低了生产成本 。
- 刘秋英王一飞熊盛胡红梅钱垂文张美英冉延超袁茵吴志聪
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子可溶性表达
- 核酶在AIDS基因治疗中的研究新进展被引量：1
- 2002年
- 利用核酶的核酸内切酶活性将核酶应用于 AIDS基因治疗的研究 ,近几年来有了许多新的突破 ,本文主要在核酶作用的位点。
- 冉延超王一飞
- 关键词：核酶基因治疗艾滋病靶细胞
- 新型rhNDPK-A工程菌的构建及表达产物纯化研究被引量：1
- 2004年
- 目的 :为简化纯化过程 ,获得有临床研究价值的rhNDPK -A蛋白 ,构建新型rhNDPK -A基因的表达质粒 ,利用 6×His标签以Ni+ -NTA亲和层析柱纯化蛋白。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒PBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中。IPTG诱导表达目的蛋白。通过镍离子螯合层析柱一步纯化法纯化目的蛋白。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列完全正确 ;目的蛋白在大肠杆菌M15中的表达量可达 4 9.6 % ;Ni+ -NTA亲和层析柱一步纯化后蛋白纯度为 93%。结论 :构建了带有 6×His纯化标签的新型rhNDPK -A基因表达质粒pQE -nm2 3H1,所构建质粒能高效表达目的蛋白 ,利用Ni+ -NTA亲和层析柱简便高效地纯化了表达产物。
- 冉延超王一飞熊盛张美英黄文韬罗林波刘秋英
- 关键词：核苷二磷酸激酶基因表达蛋白纯化
- SARS灭活试验疫苗免疫小鼠后CD4^+与CD8^+ T细胞动态变化
- 2003年
- 熊盛王一飞刘新建张美英张传海刘石生冉延超杨红宇李久香陆家海万卓越鄢心革郑焕英顾为望
- 关键词：SARS严重急性呼吸综合症CD4^+T细胞CD8^+T细胞
- RNA干扰技术抑制SARS冠状病毒复制研究
- 冉延超
- 关键词：严重急性呼吸综合症RNA干扰
- 重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中 ;梯度变化表达条件获得产物高表达 ;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白 ;Westernblot鉴定产物的免疫原性 ;HPLC测定产物的激酶活性 ;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列无误 ;目的蛋白最高表达量可达 4 9 6 % ;纯化的表达产物能与天然NDPK -A的多克隆抗体特异结合 ;酶比活为 4 72U/mg ;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论 :表达质粒pQE -nm2 3H1能高效表达重组人NDPK -A ,纯化工艺简便 ,产物活性与天然NDPK -A无异。
- 冉延超王一飞熊盛张美英黄文韬罗林波刘秋英
- 关键词：核苷二磷酸激酶肿瘤抑制蛋白质类
- SARS冠状病毒在Vero-E6细胞中的生活周期分析被引量：1
- 2004年
- 鄢心革冉延超李晖方苓黄智钟郑夔万卓越
- 关键词：VERO-E6细胞SARS冠状病毒药物作用SARS-COV抗病毒药物蛋白合成
- 还原酶缺陷型大肠杆菌对重组蛋白溶解性的影响被引量：4
- 2003年
- 探讨大肠杆菌细胞质氧化还原环境对重组蛋白溶解性的影响。选择含有 1对二硫键的牛碱性成纤维细胞生长因子 (BbFGF)作为简单蛋白的模式分子 ,选择含有 2对二硫键的人抗HBsAg单链抗体 (HBscFv)作为复杂蛋白的模式分子 ,分别构建表达质粒并转化普通宿主菌和还原酶缺陷型宿主菌E .coliOrigami(DE3) ,比较表达产物的溶解性和纯化产物的活性。结果发现 ,BbFGF在普通宿主菌中大部分形成包涵体 ,在Origami(DE3)中为可溶性表达 ,但表达量降低。两种工程菌的表达产物经离子交换和肝素亲和层析两步纯化后 ,MTT法测定活性 ,发现来自还原酶缺陷型宿主菌的BbFGF活性高于普通宿主菌表达产物 ,二者的ED50 分别是 1 6ng mL和 2 2ng mL ;HBscFv在两种宿主菌中均形成包涵体 ,包涵体以 6mol L盐酸胍缓冲液溶解后 ,镍离子螯合亲和层析纯化并透析复性 ,间接ELISA测定抗原结合活性 ,发现二者活性无明显差异 ,但在Origami(DE3)菌体破碎后的的上清中可检测到HBscFv活性 ,纯化后产量为 1～ 2mg L ,而在普通宿主菌破碎后的上清中检测不到HBscFv活性。上述结果说明 ,改变宿主菌细胞质氧化还原环境对于含有 1～ 2对二硫键的重组蛋白的可溶性表达具有明显促进作用。
- 熊盛张美英钱垂文冉延超王一飞任向荣粟宽源余宙耀
- 关键词：还原酶包涵体大肠杆菌重组蛋白表达
- BALB/C小鼠对不同佐剂SARS灭活疫苗的早期免疫反应被引量：11
- 2004年
- 目的 :研究含不同佐剂的SARS灭活疫苗免疫小鼠后 ,小鼠的早期细胞免疫和体液免疫反应。方法 :灭活的SARS冠状病毒F6 9株分别与弗氏佐剂、氢氧化铝、CpG佐剂配伍 ,制备灭活疫苗。接种 6周龄SPF级BALB C小鼠。定时采血 ,分析小鼠外周血中CD4 + 、CD8+ T细胞亚群动态变化 ,同时测定鼠血清中特异性IgG抗体及抗体的病毒中和活性。结果 :由3种佐剂制备的SARS灭活疫苗免疫小鼠后 ,CD4 + 、CD8+ T细胞百分比升高或无明显改变 ,CD4 CD8比值无显著性改变。其中 ,弗氏佐剂疫苗免疫小鼠的CD4 + T细胞百分比升高较明显 ,且在一段时间内 ,维持在一个较高的水平 ;铝佐剂疫苗免疫小鼠后 ,未观察到明显T细胞亚群改变 ;而CpG佐剂疫苗免疫小鼠的CD8+ T细胞百分比改变较其它佐剂疫苗改变更明显。与此相异的是 ,3种疫苗均可诱导小鼠产生较高滴度特异性IgG抗体 ,并且所产生的抗体具有中和活性。在初免后第 34天 ,3种佐剂组的IgG抗体滴度分别为 1∶1 2 80 0、1∶32 0 0和 1∶1 6 0 0 ,中和效价分别为 1∶2 5 6 0、1∶96 0和 1∶32 0。结论 :SARS灭活疫苗接种小鼠后 ,可诱导较强的体液免疫反应 ,同时轻度上调CD4 + 、CD8+ T细胞活性 ,程度因佐剂而异。
- 熊盛王一飞刘新建张美英张传海刘石生冉延超杨红宇李久香陆家海张庶民万卓越鄢心革郑焕英孟民杰范江林
- 关键词：SAPS灭活疫苗IGG抗体中和活性
