何芳青
- 作品数：11 被引量：46H指数：4
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用BmNPV多角体包埋外源蛋白的观察被引量：11
- 2009年
- 家蚕核型多角体病毒在感染晚期大量表达产生多角体蛋白,并形成结构致密的超大分子蛋白质晶体,以有效保护内部包埋的病毒粒子,保证子代病毒的传播。借鉴多角体包埋病毒粒子的原理,观察到多角体也能将外源蛋白质固定入多角体内部。利用能形成多角体的BmNPV Polh+Bac-to-Bac表达系统构建的含有绿色荧光蛋白(EGFP)的重组病毒能在表达、产生正常多角体的同时也表达EGFP蛋白。共聚焦分析表明,该重组病毒感染后形成的多角体能够发射绿色荧光。被包埋的EGFP蛋白放置1个月后仍能检测到绿色荧光,干燥处理30min后仍能检测到荧光。由此说明将多角体与外源基因同时表达,多角体中会包埋外源蛋白,且能较长时间保存外源蛋白的生物活性。这一现象为解决蛋白质长期保存提供了新思路,对于开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂也有很好的参考意义。
- 曹翠平郭爱芹相兴伟陈琳何芳青姚慧鹏吴小锋
- 关键词：家蚕核型多角体病毒多角体
- 家蚕Polh^+ Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建被引量：8
- 2008年
- 为利用杆状病毒的强启动子——多角体启动子而构建的重组杆状病毒一般是多角体缺失型(polh-)病毒。为了解决家蚕生物反应器规模化生产中病毒必需经皮接种而效率低下的问题,在建立家蚕Bac-to-Bac快速表达系统的基础上,构建了能形成多角体的家蚕Polh+ Bac-to-Bac表达系统。通过该系统能够产生表达外源目的基因的重组病毒,获得的该重组病毒能在培养细胞内表达,也能通过经口添食感染表达。利用EGFP报告基因分析了该系统的表达效果,构建的重组病毒不仅有效表达了EGFP蛋白,还在细胞核中形成了大量多角体。该系统较好解决了重组病毒必需经皮接种感染的缺陷,提高了生产效率,拓宽了杆状病毒在生物杀虫剂、基因治疗等领域的应用前景。
- 曹翠平兰丽盼姚慧鹏何芳青郭爱芹吴小锋
- 关键词：家蚕杆状病毒表达系统多角体经口感染
- 中国野桑蚕抗病毒蛋白基因(Lipase)的克隆与活性鉴定被引量：9
- 2008年
- 从中国野桑蚕幼虫中肠细胞克隆获得了抗家蚕核型多角体病毒BmNPV的脂肪酶基因(Lipase)cDNA(GenBank:AY945212)。该基因cDNA大小906 bp,编码301个氨基酸,蛋白质分子质量约为28.9 kD。进一步克隆了其全长基因组,结果表明该基因由2 147 bp组成,包含4个外显子和3个内含子。该基因在野桑蚕体内的表达具有组织特异性,仅限于野桑蚕中肠组织表达,且在幼虫龄中表达水平较高,而在幼虫眠期和熟蚕期几乎没有表达。通过基因体外表达获得的重组蛋白Lipase,能够有效抑制BmNPV病毒对家蚕的感染,说明该蛋白具有较强的抗BmNPV的生物学活性。
- 姚慧鹏何芳青郭爱芹曹翠平鲁兴萌吴小锋
- 关键词：野桑蚕脂肪酶活性鉴定
- 利用家蚕BmNPV多角体晶体固定外源蛋白质的研究
- 家蚕核型多角体病毒在感染晚期大量表达产生多角体蛋白,并形成结构致密的超大分子蛋白质晶体,其作用是有效保护内部包埋的病毒粒子,保证子代病毒的传播得以延续。本研究借鉴多角体包埋病毒粒子的原理,观察多角体是否也能够将外源蛋白质...
- 曹翠平何芳青郭爱芹相兴伟陈琳吴小锋
- 关键词：多角体
- 文献传递
- 家蚕Hemolin蛋白的分子生物学研究
- Hemolin,即类免疫球蛋白,是昆虫的一种重要的先天性免疫蛋白,也是迄今为止发现的唯一一个非脊椎动物免疫球蛋白家族成员。目前只在鳞翅目昆虫体内发现有Hemolin的存在。昆虫体内Hemolin的转录一般发生在脂肪体内。...
- 何芳青
- 关键词：家蚕分子生物学
- 文献传递
- 中国野蚕一种强抗病毒蛋白的基因分析和活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 以最近报道的家蚕抗病毒蛋白基因为线索,从中国野蚕(Bombyx mandarina Moore)中肠内克隆了抗家蚕BmNPV病毒的SP-2cDNA(GenBank登录号:AY945210),基因大小855bp,编码284个氨基酸的蛋白质,分子量29.6kD,基因组全长1376bp,包含5个外显子和4个内含子.该基因的表达仅限于中肠,具有组织特异性,在幼虫龄中表达水平较高,而在眠期和熟蚕没有表达.推导其氨基酸序列,发现其C端氨基酸序列与已报道的家蚕相应序列差别较大,有8个氨基酸完全不同.通过体外重组技术,由高效基因表达系统获得大量重组蛋白,发现该蛋白具有很强的抗家蚕BmNPV活性,与家蚕对应的抗病毒蛋白BmSP-2相比,其抗BmNPV活性高1.6倍.初步认为,该蛋白质C端序列差异可能是造成家蚕与野蚕抗病毒活性差别的主要原因.
- 姚慧鹏何芳青郭爱芹曹翠平鲁兴萌吴小锋
- 关键词：活性分析
- 家蚕类免疫球蛋白(hemolin)基因的克隆及表达特征和抗菌活性研究被引量：2
- 2010年
- Hemolin是昆虫的一种重要先天性免疫蛋白,属于免疫球蛋白超家族。克隆了家蚕hemolin基因,其序列全长5 100bp,含有5个外显子和4个内含子,基因cDNA编码含410个氨基酸的蛋白质,预测蛋白的分子质量约44.79 kD,pI 5.12。对该基因表达规律和生物学活性的结果研究表明:该基因只在家蚕蛹期脂肪体内特异性转录和表达,并能够被细菌和病毒诱导在幼虫期表达;该基因体外表达获得的重组蛋白具有抗菌生物学活性,能够有效抑制苏云金芽孢杆菌等的生长,由此暗示家蚕Hemolin蛋白可能在蚕体抵御病毒与细菌的感染过程中发挥重要作用。
- 何芳青陈琳姚慧鹏郭爱芹相兴伟吴小锋
- 关键词：家蚕基因克隆抗菌活性
- 家蚕培养细胞BmN的蛋白质组学研究
- 家蚕BmN细胞是家蚕分子生物学研究的重要实验平台。利用一维SDS凝胶电泳和串联质谱LTQ-Orbitrap连用的方法研究了家蚕培养细胞BmN蛋白质组的组成,最终鉴定到包含两个肽段以上共1478种蛋白质。这些蛋白具有不同的...
- 姚慧鹏郭爱芹何芳青陈琳相兴伟曹翠平吴小锋
- 关键词：家蚕蛋白质组学
- 文献传递
- 家蚕类免疫球蛋白Hemolin基因的克隆、表达和活性鉴定
- 从家蚕蛹脂肪体细胞克隆获得了具有抗菌活性的类免疫球蛋白（Hemolin）基因的cDNA（GenBank FJ911550）。该基因cDNA大小1,233bp,编码410个氨基酸,蛋白质分子质量约为44.8kD。进一步克隆...
- 何芳青郭爱芹相兴伟陈琳吴小锋
- 关键词：家蚕
- 文献传递
- 昆虫杆状病毒表达系统的新技术被引量：3
- 2008年
- 昆虫杆状病毒表达系统自上世纪八十年代成功以来发展很快,近年产生了许多新技术,主要包括快速产生重组病毒的技术、改造昆虫细胞系使表达蛋白糖基化以及提高和稳定昆虫细胞中蛋白的表达水平等。
- 何芳青吴小锋
- 关键词：昆虫杆状病毒
