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下肢动脉硬化闭塞症的microRNA表达特点分析被引量：4: 2014年; 目的探讨人下肢动脉硬化闭塞症(ASO)组织中microRNA的表达特征。方法采用microRNA芯片和real-time PCR芯片技术对正常人下肢动脉(3例)和ASO动脉(10例)中的microRNA的表达谱进行分析。结果正常动脉和ASO动脉的microRNA表达谱之间存在显著差异。MiR-21等microRNA表达上调明显(P<0.05),miR-1298(P<0.01)、miR-125b(P<0.001)、miR-140-3p(P<0.001)表达水平下降明显。进一步通过原位杂交染色发现,表达失调的microRNA主要定位于动脉壁中层平滑肌。结论与正常动脉相比,ASO组织中的microRNA表达谱显著不同,其在ASO发病中的作用有待于进一步研究。; 何琼王冕常光其姚陈殷恒讳朱峥嵘胡伟王深明; 关键词：下肢动脉硬化闭塞症 MICRORNA 动脉平滑肌细胞

ARMS法与下一代测序法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较被引量：2: 2018年; 目的本研究旨在通过对突变扩增阻滞系统(ARMS)法与下一代测序法(NGS)检测非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR基因突变的比较分析,来探索更适合我国临床肺癌患者EGFR基因突变的检测方法。方法收集22例NSCLC患者标本,分别用ARMS法及二代测序法对标本进行EGFR基因突变检测,分析比较两种方法的优劣。结果本次实验的22例标本其中17例EGFR基因突变结果两种检测方法一致,结果为EGFR单突变6例,双突变1例,阴性10例;2例ARMS法检测为单突变,二代测序法检测为双突变;3例ARMS法未检测到突变,二代测序法检测到突变。结论 ARMS法与二代测序法检测EGFR基因突变结果基本一致,但各有优缺点,两种方法结合检测效果更好。; 唐翠兰郑晓克周建文何琼李淑华王连唐柯尊富; 关键词：EGFR基因突变 ARMS法非小细胞肺癌

广东省HER-2基因检测室间质控存在的问题分析被引量：1: 2018年; 目的依托广东省临床病理质量控制中心分子病理组对广东省内医院开展的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)方法检测HER-2基因进行室间质控,全面了解HER-2基因检测的标准操作程序(standard operating procedure,SOP)的关键节点,以更好地指导乳腺癌靶向治疗。方法选择HER-2不同阳性模式的石蜡切片作为质控片,同一表达模式病例采取连续切片,首尾2张各做FISH检测以确保质控片质量的一致性。各参加实验室采用各自的荧光原位杂交法,根据实际情况选择相应的探针和消化酶等。质控结果由质控小组成员采取双盲形式进行结果判读。结果从我省参与HER-2基因检测质控的26家实验室汇报的结果来看,各实验室使用的试剂均为国家食品药品监督管理总局批准的试剂,3种试剂探针本身对质控结果的影响无明显差异;个别实验室仍存在一些细节操作及判读的问题,其中标本(1)结果吻合率96.15%,一家单位误判为簇状扩增,标本(2)结果吻合率84.62%,标本(3)结果吻合率100%;消化液使用了胃蛋白酶和蛋白酶K,2种酶的消化效果无特别明显差异,对质控片进行镜下观察发现有2家单位4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)通道下轮廓显示不清,提示存在消化过度的问题。结论各实验室应严格按照各实验室操作流程,保证染色过程中的温度、缓冲液及清洗液的浓度和p H值、探针的配置等参数准确。只有通过不断健全室间质控系统,科学设计基础与临床实验流程步骤和评价标准,配合孰知各项实验内容的检测团队,定期进行监查活动,才能确保提高我省HER-2检测的准确性和一致性。; 李淑华郑晓克王芳李丽孙世珺何丹彭燕周建文何琼朱宇辛王连唐柯尊富; 关键词：室间质控 HER-2 荧光原位杂交乳腺癌

品管圈活动在自动免疫组织化学仪进行原位杂交中的应用被引量：3: 2018年; 目的探讨品管圈活动在规范自动免疫组织化学染色仪进行原位杂交实验流程中的作用,以及品管圈活动提高染色质量降低实验失败率的应用效果,从而为患者提供更全面更精准的医疗诊断。方法成立品管圈活动小组,选定规范自动免疫组化仪行原位杂交的流程,提高染色质量、降低原位杂交失败率为活动主题。对我科2016年7月至2016年12月(活动前)以及2017年1月至2017年6月(活动后)在自动组化仪操作的全部原位杂交项目分析原位杂交质量不佳或失败的原因,并对引起实验失败的各种原因进行统计学分析,制定相应的整改措施并组织实施。结果原位杂交染色质量提高、失败率从5.54%降低到了2.33%。结论品管圈作为全面的质量管理的工具,能规范原位杂交工作流程,提高原位杂交成功率,增强团队凝聚力,值得推广。; 脱颖蔡炳何琼李淑华周建文梁英杰; 关键词：品管圈原位杂交质量管理

多重MethyLight在结直肠癌相关基因ALX4和SEPT9甲基化检测中的应用被引量：5: 2015年; 【目的】探讨多重Methy Light方法在检测结直肠癌(CRC)外周血ALX4、SEPT9基因甲基化状态中的价值,为CRC无创检测提供新方法。【方法】采用不同的荧光报告基团标记ALX4、SEPT9基因甲基化探针,利用高敏感性、高特异性的多重实时定量甲基化特异性PCR方法(MSP,Methy Light),同时检测ALX4、SEPT9基因在CRC外周血中的甲基化情况。【结果】ALX4、SEPT9基因可分别在48%(24/50),75%(38/50)的CRC患者外周血及6%(3/50),4%(2/50)的健康人群外周血中检测到甲基化;与健康人群相比,CRC患者外周血中ALX4、SEPT9基因的甲基化水平均明显升高(P<0.001)。【结论】利用多重Methy Light多基因联合检测技术,可高效特异地检测到CRC外周血中ALX4、SEPT9基因甲基化水平明显升高。; 何琼王冕周建文刘妮赖英荣; 关键词：结直肠癌甲基化

采用茎环引物实时荧光定量PCR检测胶质瘤细胞系中miR-23a的相对表达量: 2015年; 目的神经胶质瘤是中枢神经系统中最普遍、最具侵袭性的原发性肿瘤,具有高发病率和高死亡率的特征。microRNAs(miRNAs)是一类平均长约22nt的非编码小RNA,主要在转录后水平负责调控基因的表达,参与癌症发生发展过程。miR-23a起着原癌基因的作用,在多种恶性肿瘤中miR-23a高表达,本文比较人正常脑组织和胶质瘤细胞系中miR-23a的相对表达水平。方法分别抽提正常脑组织和胶质瘤细胞系中的总RNA,设计反转录miR-23a的茎环引物及定量的正反向引物,使用SYBR Green试剂对其进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测。结果设计的引物能高效且特异地逆转录并且扩增miR-23a;miR-23a在胶质瘤细胞系A172、U87、U251中均显著高表达,是正常脑组织表达量的4倍以上。结论设计的miR-23a引物能有效地进行qRT-PCR;miR-23a在胶质瘤细胞系中高表达。; 周建文何琼刘俊峰谢晨赖英荣; 关键词：胶质瘤细胞实时荧光定量PCR

去甲基化药物DAC对结肠癌细胞及其TMEFF2基因表达的影响被引量：2: 2015年; 目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2′脱氧胞苷(DAC)对结肠癌细胞及其表皮生长因子和卵泡抑素结构域跨膜蛋白(TMEFF2)基因表达的影响。方法以不同浓度的DAC药物处理结肠癌细胞Caco-2,采用Caspase 3/7试剂盒检测细胞凋亡率,同时提取药物处理前后的细胞总RNA,利用实时荧光定量RT-PCR的方法检测TMEFF2基因表达情况。结果DAC药物处理后Caco-2细胞凋亡率明显增加(P<0.05),且呈时间、药物浓度依赖性。去甲基化药物处理后,Caco-2细胞中TMEFF2基因m RNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论 TMEFF2基因处于甲基化状态时,其在Caco-2细胞株中表达水平升高,提示TMEFF2基因启动子区的甲基化对下游m RNA的表达可能具有调控作用。; 何琼周建文王冕; 关键词：结肠癌去甲基化

干细胞标记物LGR5在小鼠结肠癌模型中的表达被引量：2: 2015年; 目的探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体（LGR5）在小鼠结肠癌模型中的表达特点。方法选取80只6~10周龄C57/BL6小鼠,采用腹腔注射氧化偶氮甲烷法建立小鼠结肠癌模型,以生理盐水注射组作为对照,采用RT-PCR和免疫组化方法检测LGR5 m RNA及蛋白在小鼠结肠癌组织中的表达特点。结果接受氧化偶氮甲烷注射的40只小鼠中有30只成功诱发结肠癌,其中24只结肠癌中LGR5 m RNA和蛋白表达水平显著升高;与LGR5阴性细胞相比,LGR5阳性细胞中的Ki67表达水平明显升高。结论 LGR5在结肠癌组织中表达水平显著升高,可能在结肠癌的发生发展中起到了重要作用。; 何琼江洁周建文王冕; 关键词：结肠癌 KI67蛋白动物模型

肝组织雌激素受体α表达在肝癌病理诊断中的价值被引量：3: 2015年; 目的探讨肝组织雌激素受体α(ERα)表达在肝癌病理诊断中的价值。方法选取68例肝癌患者肝癌组织及癌旁组织标本、15例正常肝脏组织标本,应用免疫组化方法检测ERα的表达情况。结果 ERα在正常肝脏组织中的相对表达量为56.4%,在肝癌的癌旁组织中相对表达量为10.5%,肝癌变组织中无表达。结论 ERα能够将肝癌组织与正常组织相鉴别,并划分癌变组织与癌旁组织。; 刘俊峰何琼周建文赖英荣; 关键词：肝肿瘤肝癌雌激素受体Α 病理诊断

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何琼

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