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免疫Leptin对肉种鸡产蛋率、采食量和脂肪沉积的影响: 本研究通过对鸡进行免疫鸡Leptin重组融合蛋白来检测鸡Leptin的生物学作用。将鸡Leptin重组融合蛋白和牛血清白蛋白(BSA)分别制成终浓度为1mg/mL的油乳剂疫苗。选择20羽40周龄的黄羽肉种鸡,随机分成两组...; 邵西兵于迎春施振旦刘颖梁少东; 文献传递

羊抑制素α亚基N端1-33序列肽段多聚体的构建及其表达纯化被引量：2: 2005年; 为了提高短肽的免疫原性以制备短肽基因工程疫苗 ,将羊抑制素α亚基N端 1_33氨基酸残基片段的基因序列插入表达质粒pRSET A的BamHⅠ \SacⅠ位点之间构建重组质粒pR INH ,然后利用质粒中的一对同尾酶位点BamHⅠ \BglⅡ和下游的另一酶切位点HindⅢ ,经过简单的酶切后 ,将产物按各种组合连接 ,构建了抑制素串联 2至 6聚体基因。含 3至 6聚体基因的重组质粒pR 3INH、pR 4INH、pR 5INH和pR 6INH经IPTG诱导均能在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1(DE3)中表达目的蛋白 ,分别占菌体蛋白的 6 %、6 %、7%和 8% ,且都以包涵体形式存在。结果说明 ,利用同尾酶切技术可以快速正确地构建短肽片段的串联多聚体重组质粒 ,为构建短肽半抗原的高免疫原性基因工程疫苗提供了新的思路。; 黄运茂施振旦于迎春邵西兵; 关键词：抑制素同尾酶

鸡Leptin基因正确性的免疫验证被引量：11: 2005年; ①取20只240日龄的粤黄鸡种母鸡平分为处理组和对照组,分别在第3、31、63和84d对之接种鸡Leptin重组融合蛋白(处理组)或BSA(对照组)1mL/羽。每天记录产蛋率,每10天测定采食量,每两周称重,在试验的第1、31、53、78和91d采血。结果表明Leptin处理组的血浆抗Leptin抗体水平和Leptin水平在免疫后显著高于对照组(P<0.01);第3和4次免疫后处理组产蛋率比对照组显著低约50%(P<0.05);在第98d试验结束时,处理组腹脂量为(115.60±15.07)g,显著高于对照组[(77.98±5.70)g,P<0.05];试验期间处理组的采食量略低于对照组,增重则略高于对照组,但两者差异均不显著(P>0.05);处理组血浆总T3和总T4水平与对照组差异不显著(P>0.05)。②取12只50日龄的粤黄鸡后备小母鸡,平分成处理组和对照组,分别肌注含抗Leptin抗体的卵黄提取液和生理盐水6mL/只,处理组在2、4、6h的累积采食量显著高于对照组(P<0.05),但在8h的累积采食量与对照组差异不显著(P>0.05)。两个试验通过免疫重组鸡Lep tin融合蛋白,使鸡表现出Leptin功能的丧失,证明目前所克隆的鸡Leptin基因在家鸡中的确存在和其正确性。; 邵西兵施振旦于迎春刘颖梁少东陈楠; 关键词：LEPTIN基因免疫采食量脂肪沉积产蛋率粤黄鸡

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化被引量：8: 2004年; 从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m; 施振旦邵西兵方梅霞于迎春刘颖陈楠; 关键词：CDNA 克隆重组蛋白纯化瘦素

鸡催乳素和抑制素-α亚基重组蛋白的构建及表达被引量：6: 2002年; 将鸡催乳素 (PRL)和抑制素 - α亚基 (INB- α)基因编码序列重组为融合基因 ,制备了同时包含这 2种激素基因的融合蛋白。通过 PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡 PRL成熟肽 c DNA克隆到载体 p RSET A的 Bgl 和 Eco R 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p PRL- RSET。鸡 INB- α片段经扩增后分别被克隆到质粒 p RSET A和 p PRL- RSET的 Nhe 和 Xho 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p INB- RSET和 p INB- PRL。以上重组质粒构建的正确性分别由各特定引物组合扩增的 PCR产物长度、特定限制性内切酶消化各重组质粒所得产物长度以及对各质粒的测序结果得到验证。重组质粒 p PRL- RSET和 p INB- PRL 转化 E.coli BL2 1(DE3)株 ,IPTG诱导后所表达的产物经 SDS- PAGE显示 ,其分别与所预期的重组蛋白分子大小相符。质粒 p PRL - RSET和 p INB- PRL的表达产物和用 Ni- NTA凝胶纯化的 2重组蛋白产物都可与抗鸡 PRL 抗体产生特异的免疫印迹 ,并且表达菌裂解液和相应纯化蛋白的免疫印迹处于同一位置。结果说明 ,试验已成功完成了鸡 PRL、INB-α及 2者融合蛋白的构建。; 刘颖施振旦黄运茂于迎春张细权张贵学; 关键词：催乳素重组基因融合蛋白基因表达

免疫Leptin对肉种鸡产蛋率、采食量和脂肪沉积的影响: 通过免疫中和方法证实Leptin具有影响鸡采食、脂肪沉积和参与调节繁殖活动等一系列生物学功能,以上结果再次解答了禽类Leptin基因存在与否的问题以及对Leptin功能方面的一些疑问,免疫Leptin会抑制种鸡的产蛋性能...; 邵西兵于迎春施振旦刘颖梁少东; 关键词：产蛋率采食量脂肪沉积肉鸡; 文献传递

利用羊抗鸡抗体检测鹅血浆中的抗体水平被引量：2: 2007年; 利用商品供应的山羊抗鸡抗体ELISA检测鹅血液中抗体水平的可行性.在相同条件下,以羊抗鸡抗体作为第2抗体,在ELISA分析中检测利用同一抗原免疫后鸡和鹅血浆样品中抗体水平.经过相同倍数梯度稀释的鸡和鹅血浆样品中,所测到的鹅血样的D450 nm值曲线在处理组和对照组均与鸡的D450 nm值曲线变化趋势相同,只是随血样的稀释倍数上升,鹅血样D450 nm值的下降速度较慢.结果表明只要反应条件适当,抗鸡抗体可以作为第2抗体用于ELISA检测鹅血液中的抗体.通过抗原/血浆浓度梯度交叉试验,ELISA中抗原的最适包被质量浓度为100μg/mL(150μL/孔),血样最佳稀释比为1∶12 800.ELISA测定所得鹅免疫试验中的抗体变化与理论预计结果一致,与在鸡上的变化也类似.; 黄运茂苏记良于迎春李孝伟施振旦; 关键词：抗体检测

免疫鸡催乳素和抑制素重组融合蛋白对鸡繁殖行为的影响: 该研究通过用鸡抑制素和催乳重组素融合蛋白对黄羽种鸡进行主动免疫,来检测抑制素和催乳素对鸡繁殖行为的影响.研究结果说明免疫抑制素仅部分提高黄羽鸡的产蛋性能,增加产蛋的同时也促进其就巢发生,这限制了最终主动免疫抑制素对产蛋性...; 于迎春; 关键词：粤黄鸡免疫调控抑制素催乳素

主动免疫重组鸡抑制素和催乳素融合蛋白对鸡繁殖表现的影响: 本研究通过用重组鸡抑制素和催乳素融合蛋白对黄羽种鸡进行主动免疫,来检测抑制素和催乳素对鸡繁殖性能的影响.; 于迎春刘颖邵西兵黄运茂郭文军施振旦; 关键词：粤黄鸡免疫调控抑制素催乳素; 文献传递

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于迎春

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