丁静
- 作品数：14 被引量：14H指数：2
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生环境科学与工程轻工技术与工程更多>>
- 旋毛虫不同发育时期基因重组蛋白的免疫原性分析及保护性研究
- 旋毛虫病是一种重要的食源性人兽共患病，可感染人和100多种哺乳动物，当人类生食或半生食含感染期幼虫的肉类时可感染旋毛虫病。由于寄生虫抗原在发育期间的变异及多种分子参与寄生过程，单独使用一种蛋白很难产生有效的免疫保护效力，...
- 孙召金丁静王楠刘菁王艳凤孙尧赵静吴秀萍
- 关键词：旋毛虫重组蛋白免疫原性
- 旋毛虫成虫排泄分泌物对中性粒细胞功能的影响被引量：1
- 2019年
- 利用激光共聚焦显微镜和实时荧光定量PCR等技术,探究旋毛虫成虫排泄分泌物(核酸酶抑制剂ATA阻断DNase酶活性条件下)对中性粒细胞胞外诱捕网形成、活性氧生成和细胞因子产生的影响。结果显示,旋毛虫成虫排泄分泌物能够抑制中性粒细胞胞外诱捕网的形成,减少活性氧生成,促进细胞因子IL-1β、IL-10和TNF-α的表达,降低IL-4的表达,对IFN-γ表达水平无明显影响。结果表明,旋毛虫排泄分泌物能够影响中性粒细胞的功能,为进一步研究旋毛虫免疫逃避机制等奠定良好基础。
- 王静丁静王春王学林白雪唐斌杨勇王光明刘明远
- 关键词：旋毛虫中性粒细胞
- 旋毛虫成虫DNaseⅡ—T3223-7基因的克隆及其表达特性鉴定被引量：2
- 2017年
- 利用RT-PCR技术从旋毛虫成虫得到T3223-7基因,并进行扩增克隆到原核克隆载体pMD18-T中,将重组质粒转入克隆菌DH5α,提取质粒进行酶切和测序鉴定,连接至pET-28a表达载体,最后转入表达菌Rosetta(DE3)。用1mmol/L IPTG诱导培养重组表达菌,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析,发现重组蛋白以包涵体的形式表达,约为40 000,与理论值相符。将纯化后的重组蛋白免疫家兔,制备兔抗T3223-7蛋白多克隆抗体,间接ELISA测定多抗效价达1∶320 000,Western blot检测表明制备的多克隆抗体能与T3223-7抗原发生特异性反应,并能识别和结合旋毛虫成虫排泄分泌物(ES)。
- 王安琪丁静王楠王兆国胡晓祥吴秀萍刘明远廖成水
- 关键词：旋毛虫原核表达多克隆抗体
- 旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶对宿主免疫细胞影响的初步研究
- 旋毛虫病是危害十分严重的一种食源性人兽共患寄生虫病。旋毛虫感染可以致使宿主出现强烈的免疫抑制,然而参与这种抑制作用的关键蛋白分子及其机制仍不明确。目前有关旋毛虫免疫逃逸相关基因的研究薄弱,而寄生虫丝氨酸蛋白酶在入侵宿主组...
- 王艳凤孙尧赵静王楠刘菁丁静孙召金白雪刘明远
- 关键词：旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶免疫抑制
- 旋毛虫新生幼虫期特异性T668蛋白抗原表位分析与鉴定
- 旋毛虫病(trichinellosis)是由旋毛形线虫(Trichinella spiralis)引起的一种人兽共患寄生虫病。对于屠宰动物旋毛虫病的检验,国际兽疫局(OIE)的法规检验方法为镜检法及集样消化法,然而这两种...
- 丁静孙召金刘菁王楠赵静王艳凤孙尧刘明远
- 关键词：旋毛虫抗原表位原核表达免疫荧光
- 伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达及其纯化被引量：2
- 2014年
- 目的原核表达并纯化伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Trichinella pseudospiralis serine protease inhibitor,Tpserpin)基因,并鉴定其抗原性。方法从伪旋毛虫肌幼虫提取总RNA,RT-PCR扩增Tp-serpin基因,插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,转化大肠埃希菌(E.coli)Rosetta gami(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA Agarose亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度,Western blot鉴定反应原性。结果重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,与GenBank中登录的Tp-serpin基因相似性达99%。表达的重组Tp-serpin蛋白相对分子量约43 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以可溶性形式存在;纯化后的重组Tp-serpin蛋白纯度达95%以上,可被伪旋毛虫感染60 d的猪血清特异性识别,具有较好的反应原性。结论成功构建了重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,并在E.coli Rosetta gami(DE3)中表达了重组蛋白,为旋毛虫病的血清学诊断候选抗原的研制及开发提供了科学依据,也为阐明serpin在伪旋毛虫入侵时期调节宿主免疫反应的作用奠定了基础。
- 王艳凤白雪刘晓雷王楠丁静刘明远
- 关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂原核细胞基因表达纯化
- 旋毛虫Ts-DNaseⅡ-7蛋白对Caco-2肠上皮细胞屏障的影响被引量：1
- 2022年
- 为了探索旋毛虫成虫期核酸酶家族Ts-DNaseⅡ-7蛋白对Caco-2肠上皮细胞屏障模型的作用及机制,本研究采用Transwell细胞培养板构建Caco-2肠上皮细胞屏障,当跨膜电阻值(TEER)达到400Ω·cm^(2)即判定肠上皮屏障模型构建成功。将试验组分为对照组(control)、PBS组、Ts-DNaseⅡ-7组(5μg/m L)、阳性对照LPS组(15μg/m L),作用48 h后,检测跨上皮电阻值(TEER)和对FITC的通透性;Western-blot和荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞Claudin 1、Occludin和ZO-1的蛋白表达水平和m RNA表达水平;通过细胞免疫荧光观察各组紧密连接蛋白的分布情况。结果,与对照组相比,Ts-DNaseⅡ-7组在第48小时TEER值降低,FITC的通透性增加;Claudin 1、Occludin和ZO-1的蛋白及m RNA的表达水平降低;免疫荧光试验可见细胞间的网状结构荧光不连续。结果表明,旋毛虫成虫期Ts-DNaseⅡ-7蛋白可破坏肠上皮细胞的物理屏障,有助于旋毛虫实现顺利寄生。
- 李䶮风王静刘晓雷白雪唐斌丁静白玉梅刘明远
- 关键词：旋毛虫肠屏障紧密连接蛋白
- 旋毛虫感染诱导的宿主免疫对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
- 2020年
- 为了探究旋毛虫感染诱导的宿主免疫对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,试验随机将100只Balb/c小鼠分成空白组、旋毛虫组、荷瘤组、旋毛虫+荷瘤组,每组25只。旋毛虫+荷瘤组小鼠在感染旋毛虫后的第7天(试验第7天)接种小鼠肝癌H22细胞,荷瘤组与旋毛虫+荷瘤组小鼠接种肝癌H22细胞的时间相同。在试验第28天,荷瘤组和旋毛虫+荷瘤组均处死10只小鼠用于计算抑瘤率。在试验的第7,14,21,28,35天每组各处死3只小鼠并收集脾细胞进行培养,采用ELISA法和实时荧光定量PCR技术对各组小鼠脾脏中白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的表达量进行检测。结果表明:与荷瘤组相比,旋毛虫+荷瘤组的抑瘤率为62.65%(P<0.05),旋毛虫感染有效抑制了H22肿瘤的生长。旋毛虫+荷瘤组IL-2、IFN-γ的表达量于第7,14,21天明显升高,与空白组和荷瘤组相比差异显著(P<0.05);旋毛虫+荷瘤组IL-4的表达量总体呈逐渐升高趋势。说明旋毛虫感染早期诱导宿主产生Th1细胞因子IL-2、IFN-γ以及后期诱导宿主产生Th2细胞因子IL-4可能抑制肿瘤的进一步发展。
- 李仕存丁静刘晓雷唐斌白雪王学林
- 关键词：旋毛虫H22荷瘤小鼠抑瘤率
- 2D-DIGE技术对microRNA tsp-Novel-46调控的旋毛虫排泄分泌产物的研究被引量：1
- 2015年
- 成熟的microRNA（miRNAs）是一类大小为22-24 nt的小RNA分子转录调节单元。过去10年中,研究人员发现了许多关于miRNAs生物起源和功能的基本机制。对寄生线虫miRNAs的研究（如旋毛虫和捻转血矛线虫）显示,特定的microRNA表达量变化与寄生虫特定生活阶段有关。
- 孙尧刘晓雷丁静王安琪徐静孙召金王楠刘菁李婷婷高鹤白雪李庶东刘明远
- 关键词：MICRORNADIGE寄生线虫捻转血矛线虫转录调节生物起源
- 旋毛虫肌幼虫排泄分泌物激活的巨噬细胞和成肌细胞共培养对成肌细胞分化的影响被引量：4
- 2014年
- 目的体外研究与旋毛虫肌幼虫排泄分泌物(ML ES)作用后的巨噬细胞共培养对成肌细胞分化的影响,为深入了解旋毛虫包囊形成机理提供新的思路。方法通过共培养技术对旋毛虫ML ES激活的巨噬细胞与成肌细胞进行共培养,建立J774A.1-C2C12细胞共培养模型。细胞免疫荧光法以及Western blot分析与旋毛虫ML ES处理的巨噬细胞共培养对成肌细胞分化以及成肌调节因子表达的影响。结果细胞免疫荧光以及Western blot表明,与对照组比较,成肌细胞与ML ES作用后的巨噬细胞共培养明显降低成肌细胞分化调节因子(MyoD、Myogenin)阳性细胞的数量及终末分化标记物MHC的表达。结论旋毛虫ML ES可以直接通过调节巨噬细胞活性来影响成肌细胞的分化,为研究旋毛虫与宿主细胞及旋毛虫感染后,宿主细胞间相互作用复杂机制提供了新的思路。
- 王艳凤王楠丁静孙尧刘晓雷王学林刘明远白雪
- 关键词：旋毛虫巨噬细胞成肌细胞共培养
