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华南农业大学兽医学院广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室: 作品数：22 被引量：40H指数：3; 相关作者：谢杰雄更多>>; 相关机构：昆明理工大学生命科学与技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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昆明理工大学生命科学与技术学院

犬流感病毒重组核蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：1: 2015年; 为建立H3N2亚型犬流感病毒（cIv）血清学检测方法，本研究利用H3N2亚型CIV重组核蛋白（rNP）作为检测抗原，通过优化反应条件，建立了检测CIV核蛋白血清抗体的间接ELISA方法。通过检测10份SPF犬血清样品确定阴阳性临界值为0．288。该方法检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感毒、犬腺病毒II型、狂犬病病毒、犬弓形虫、犬弓首蛔虫、犬复孔绦虫的阳性血清均为阴性，具有良好的特异性，但与H1N1、H3N8和H9N2亚型CIV有交叉反应。该方法检测H3N2CIV血清抗体的灵敏度为血凝抑制试验（HI）的3～12．5倍；而且其批内批间变异系数为1．85％～6．57％，重复性良好。通过对H3N2CIV攻毒犬血清进行分析，表明该检测方法具有滞后性，检测到CIV抗体的时间晚于HI试验。利用本研究建立的方法和以H3N2CIV为诊断抗原的HI检测方法对450份血清样品进行检测，结果显示该方法对血清样品具有初筛作用，两者阳性符合率为58-3％，阴性符合率为100％。本研究可以结合其它血清学方法为CIV流行病学调查进行快速、高效的检测。; 李陆涛袁子国孙凌霜涂黎晴闫中山李秀珍李守军; 关键词：间接ELISA

牛流行热病毒TaqMan实时定量PCR检测方法的建立及应用被引量：2: 2020年; 通过对牛流行热病毒(bovine ephemeral fever virus,BEFV)中G片段保守区的分析,运用SnapGene设计探针、引物,并优化反应条件。运用最适条件对该方法的敏感性、特异性及重复性进行试验,并检测临床采集的样品。结果显示,本方法特异性较好,其对牛蓝舌病病毒、牛赤羽病病毒进行检测的结果为阴性。该方法线性关系较好,在105~10^10拷贝/μL相关系数达到0.998。该方法较为灵敏,可检测到10拷贝/μL。批内和批间分别重复3次试验得到的变异系数平均值结果较低(<3%)。使用该方法对广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室收集的109份牛抗凝血样品进行检测,阳性率为7%。本试验成功建立牛流行热病毒TaqMan实时定量PCR检测方法,并将该方法初步运用于牛流行热病毒的临床检测,为BEFV在临床上的快速检测提供更好的方法。; 汪祥斌贾坤贾荣荣李守军; 关键词：牛流行热病毒 TAQMAN探针实时定量PCR

一起A型产气荚膜梭菌致奶牛猝死的病例分析被引量：3: 2021年; 某大型奶牛场接种产气荚膜梭菌⁃巴氏杆菌二联苗将近2个月后,相继出现五头奶牛突发致死的病例。奶牛发病当天无任何征兆,突然倒地,两眼呆直,受到刺激后发生抽搐,而后很快死亡。根据临床症状初步怀疑为产气荚膜梭菌所导致的猝死病例。取死亡奶牛肺脏组织和一段肠道样品进行实验室检查。通过细菌培养,运用多重PCR进行分型鉴定,结果均为A型产气荚膜梭菌。通过调查奶牛的发病情况、临床症状,结合肺脏组织、肠黏膜、肠内容物等样品的实验室检查结果,找到牛场多例奶牛突发猝死的病因,并对牛场以后的预防治疗提出有效的建议。本文对此奶牛场的突发猝死病例进行分析,旨在为奶牛生产提供临床参考。; 陈柳妃张凯川贾荣荣罗静龙贾坤; 关键词：A型产气荚膜梭菌免疫失败奶牛饲养管理

一例猫黏液炎性纤维母细胞肉瘤的病理学诊断: 2019年; 笔者针对1例猫脾脏增生病例,采用X射线检查、大体观察、病理组织学诊断等检测方法,结合文献对其进行确诊。结果表明:该增生组织呈结节状生长,局部有黏液样变性,增生细胞体积大、异型性明显,易见核分裂相,最终诊断为疑似黏液炎性纤维母细胞肉瘤。鉴于彻底剥离该肿物难度较大,采取将脾脏整体切除的方法治疗,以降低其对机体的影响。; 宋如月贾坤王京煜陈万里曾梦李守军王衡; 关键词：病理学诊断 X射线

D型流感病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用: 2023年; 为了建立一种可以快捷、灵敏、安全地检测D型流感病毒(Influenza D virus,IDV)的实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,RT-qPCR)方法,试验首先将IDV NP基因作为检测目标,根据其序列的保守区设计了一对RT-qPCR引物,然后采用单一变量法对RT-qPCR反应条件中的引物浓度和退火温度进行优化,建立了一种可检测IDV的RT-qPCR方法,并对该方法的灵敏度、重复性和特异性进行检测,最后应用该方法进行临床样本检测。结果表明:所建立的RT-qPCR方法的最佳引物浓度和退火温度分别为400 nmol/L和61℃,标准曲线为y=-3.572x+42.02(R^(2)=0.9993);该方法能检测到的最低拷贝数为8.30×10^(1)copies,灵敏度是常规PCR的100倍左右;组内重复和组间重复变异系数(CV)值均小于3%;同时检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛疱疹病毒4型(BHV-4)和牛流行热病毒(BEFV)的结果均为阴性;应用该方法对收集到的244份有呼吸道症状的牛鼻拭子样品进行检测,阳性率为1.23%。说明成功建立了IDV RT-qPCR检测方法,该方法具有灵敏度高、重复性和特异性好的特点,为IDV的防控提供了可靠的技术支撑。; 王旭阳卢刚程娇娇蔡思棋钟林涛赖志颖贾斌徐亮欧嘉俊肖雨晴胡学瑞王芳赖悯婷邵冉郑飞燕远立国

基于B646L、EP402R、MGF360/505基因的非洲猪瘟病毒ERA检测方法的建立被引量：11: 2021年; 【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序列,设计特异性的ERA探针和引物,经过反应条件的优化,建立42℃等温条件下检测ASFV DNA的ERA方法。【结果】ERA-ASFV-B646L、ERA-ASFV-EP402R和ERA-ASFV-MGF3个检测方法分别在16、7和13 min内即可得出检测结果;特异性强,对阳性样品拷贝数的检测下限均为102μL-1;与我国非洲猪瘟诊断技术标准中的方法对比,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的ERA检测方法可以用于ASFV的快速检测,为流行病学调查和现场检测提供了一种快速有效的检测方法。; 曾宇晨龚浪王京煜潘昊鸣梁杏玲马俊张桂红王衡; 关键词：非洲猪瘟

快速检测细菌性腹泻3种厌氧菌多重PCR方法的建立和应用被引量：1: 2022年; 为快速检测厌氧菌引起的细菌性腹泻,建立一种产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、艰难梭菌(Clostridium difficile)和脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)的多重PCR检测方法,本试验参照GenBank中产气荚膜梭菌Cpa基因序列、艰难梭菌Glud基因序列和脆弱拟杆菌Leu基因序列上设计合成了3对特异性引物(目的片段分别为326、750 bp和448 bp),通过对PCR反应条件的优化建立多重PCR检测方法。结果显示,多重PCR能从试验的产气荚膜梭菌、艰难梭菌、脆弱拟杆菌扩增出其目的条带,而其他细菌均不能扩增出目的条带;多重PCR对产气荚膜梭菌、艰难梭菌和脆弱拟杆菌的最低检出量分别为1.6×10^(-2)、0.7pg/μL和2.8pg/μL。结果表明本试验建立的多重PCR方法具有良好的稳定性与特异性,为鉴别诊断这3种致病厌氧细菌所导致的腹泻提供一种快速、准确的检测方法。; 张凯川陈柳妃贾坤; 关键词：产气荚膜梭菌脆弱拟杆菌艰难梭菌细菌性腹泻

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7特异性抗体体外抑制病毒复制被引量：3: 2015年; 为进一步探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白7(Nsp7)在病毒复制过程中发挥的生物学作用,本研究在获得Nsp7可溶性重组蛋白的基础上,首先制备了抗Nsp7蛋白兔源多克隆抗体。确定抗体的免疫活性后,将其与PRRSV共同接种Marc-145细胞。孵育1h后弃掉混合物,加细胞维持液继续培养48h,应用TaqMan探针Real Time PCR方法对培养物中病毒拷贝数进行检查。结果显示,本研究制备的多克隆抗体可以和大肠杆菌表达的Nsp7α、Nsp7β重组蛋白发生特异性结合,并有效用于病毒感染Marc-145细胞后其Nsp7蛋白分布情况的原位检测;更为重要的是,与正常家兔血清相比,不同稀释倍数的抗Nsp7多克隆抗体均可对病毒的复制产生抑制作用,其中10-3倍稀释血清的抑制率可达88.4%。结果表明,Nsp7特异性抗体可有效用于PRRSV抑制试验的研究;Nsp7作为PRRSV复制酶多聚蛋白成员之一,在病毒复制过程中发挥着重要作用。; 刘荣昌张桂红崔进谢杰雄宁章勇王衡; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒抑制

犬MG53基因的克隆与表达: 2017年; 为进一步研究犬MG53在机体内的分布情况及其生物活性,本研究设计特异性引物进行犬MG53目的基因的克隆,并将其连接至p MAL-C5X表达载体中,利用大肠杆菌表达系统进行表达。结果显示,克隆得到由1 435个核苷酸构成的犬MG53基因;获得MG53蛋白与麦芽糖结合蛋白标签(MBP)融合表达的可溶性重组蛋白,大小约为95 ku。通过结构及生物学功能预测发现,该蛋白易降解,具有RING、B-Box、Coiledcoil及SPRY-PRY四个功能结构域,并分布有半胱胺(Cysteamine)、2-氨基乙硫醇(2-Amino-1-Ethanethiol)、硫代乙醇胺(Thioethanolamine)、2,3-Deshydrolanthionine、Zn2+及Mg2+等分子结合位点,具有蛋白结合能力。上述结果表明,犬MG53与人、家兔、小鼠、大鼠MG53的结构相似,并可能具有参与泛素化、骨骼肌细胞修复等重要的生物学功能。; 温圣文贾坤陈万里曾梦李守军王衡; 关键词：克隆生物学功能

动物肠类器官培养技术被引量：1: 2023年; 类器官被定义为三维(three-dimensional,3D)多细胞体外自组装组织结构,在细胞类型、结构和功能方面能模拟还原相应的体内器官,具有明显的组织特异性,可作为新型体外模型。随着技术的发展,肠类器官已被应用于器官发育、器官功能、器官修复与移植、疾病诊断和药物筛选等多个研究领域。目前除了小鼠肠类器官外,关于其他种属动物肠类器官培养的研究较少。但在临床中,其他动物,特别是家畜动物仍存在多种传染性或非传染性的肠道疾病,亟待新型的体外模型用于揭示致病机理或开发新的治疗方案。为此,本文对近十年动物肠类器官培养的研究进展进行综述,总结了动物肠类器官培养的优、缺点并对动物肠类器官培养进行了小结与展望,以期为动物肠类器官的培养提供参考。; 陈奡蕾黄德如安娅菲李守军

华南农业大学兽医学院广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室

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