四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室
- 作品数：59 被引量：157H指数：6
- 相关作者：雷高鹏马晓瑞徐青锐郑红波尤芳芳更多>>
- 相关机构：东北农业大学食品学院更多>>
- 发文基金：四川省自然科学基金国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 高产脂肪酶菌株的筛选鉴定及酶学、转酯特性被引量：9
- 2014年
- 从自然环境中筛选水解酶活高且酶学、转酯特性优良的产脂肪酶菌株,对脂肪酶工业化发酵生产及生物柴油制备的研究具有重要意义.采用罗丹明B平板初筛和摇瓶发酵复筛法,从70份含油脂丰富的样品中筛选产脂肪酶酶活较高的菌株进行16S rRNA鉴定,研究其酶学性质;用大孔树脂固定酶,在无溶剂体系中催化橄榄油制备生物柴油,研究其转酯特性.结果筛选到一株高产脂肪酶的菌株WZ10-3,通过p-NPP法测得其初始酶活为78.68 U/mL,经16S rRNA鉴定属于伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.),与B.stabilis同源性达到99%.该菌在发酵48 h时达到产酶高峰,所产脂肪酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH为7.0,70℃下的半衰期可达1 h,pH为7-9时稳定性良好.以大孔树脂NKA-9和HPD600为载体制备的2种固定化脂肪酶,催化橄榄油生产生物柴油的转酯率均可达到97%.综合表明,菌株WZ10-3脂肪酶的初始水解酶活高于大多数野生脂肪酶,热稳定性好且转酯特性优良,有很好的后续研究价值.
- 马抒晗张玮佳吴茜姜腾飞乔代蓉曹毅
- 关键词：脂肪酶酶学性质生物柴油
- 一株高产油酵母的筛选、鉴定及发酵条件优化被引量：6
- 2014年
- 为丰富高产油菌株资源和促进微生物油脂工业化进程,通过苏丹黑B染色对土壤样品进行产油菌种筛选,并进一步优化发酵条件以提高产油率.共筛选到33株产油真菌,其中17株油脂含量较高,菌株ZWY-2-3油脂含量最高,经5.8S rDNA-ITS序列分析,将其鉴定为隐球酵母(Cryptococcus podzolicus).菌株ZWY-2-3初始生物量、油脂产量和油脂含量分别为7.786 g/L、4.331 g/L和55.63%,经单因素和正交试验优化后分别提高到13.670 g/L、8.311 g/L和60.80%.利用GC-M S对油脂进行脂肪酸成分分析,主要成分为棕榈酸、软脂酸、硬脂酸和油酸,与植物油相似,适合用于生产生物柴油.本研究表明,菌株ZWY-2-3是生产生物柴油的潜在菌株,具有广阔的应用前景.
- 黄成毅杨赟博秦汉冯顺利郭明月徐青锐乔代蓉曹毅
- 关键词：微生物油脂发酵条件优化单因素试验正交试验脂肪酸
- 富油小球藻Chlorella protothecoides胞内多糖和油脂提取工艺优化被引量：5
- 2014年
- 对小球藻(Chlorella protothecoides)胞内多糖和油脂的提取工艺进行优化,旨在最大程度地提高其高价值代谢产物的综合利用价值.结果显示,在先提取小球藻胞内多糖、后提取油脂的情况下,不仅胞内多糖可以得到充分的提取,油脂的损失量也很小.当提取介质的pH为14时,胞内多糖提取量最高,剩余的油脂含量也最高,油脂损失最少.对胞内多糖提取条件进行正交优化,料液比为主要影响因素,超声时间、提取时间和提取温度为次要因素,最佳工艺条件为:料液比1:25(m/V),超声时间20 min,提取时间180 min,提取温度70℃.在此条件下得到的胞内多糖含量为4.72%,剩余的油脂含量为41.18%.胞内多糖提取前后小球藻的脂肪酸组成基本上没有变化.小球藻的脂肪酸组成主要为C16和C18,不饱和脂肪酸含量丰富,占总脂肪酸含量的80%以上.
- 孙建瑞宋涛孙显宋济君王川乔代蓉
- 关键词：胞内多糖油脂提取液正交试验设计小球藻
- 产油脂微生物菌种的筛选、鉴定及其油脂组成分析被引量：4
- 2010年
- 从富含油脂的土样中分离获得47株产油脂菌株,筛选获得7株油脂含量高的菌株,其中菌株华2-1的油脂含量达到48.60%,菌株鉴定表明该菌株为深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina),其油脂的脂肪酸组成与植物油相似,主要为亚油酸、棕榈酸、油酸、亚麻酸和硬脂酸,含量分别:39.25%,19.67%,2.67%,18.81%和6.67%,不饱和脂肪酸含量达87.07%,为微生物油脂生产奠定基础.
- 郑红波刘光华李昕然李璟谢洁乔代蓉曹毅
- 关键词：微生物油脂
- 盐生杜氏藻CPD光裂合酶FAD结合结构域Gln336在逆境胁迫下的修复活性
- 2017年
- 为了解盐生杜氏藻环丁烷嘧啶二聚体(CPD)光裂合酶的作用机制,通过定点突变的方法对其黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合结构域α13中保守氨基酸残基Gln336进行突变,并比较野生型菌株PGEX-4T-1-Ds PHR2(WT)和突变菌株PGEX-4T-1-Ds PHR2-Q336H(Q336H)表达的光裂合酶在体内外的光修复活性及其在不同盐浓度下修复光损伤的效果.结果显示:采用Dpn I法定点突变,成功获得盐生杜氏藻CPD光裂合酶突变体Q336H的基因,构建表达载体并导入到大肠杆菌BL21(DE3)中,构建了突变菌株Q336H.体内外活性研究发现,野生型菌株的CPD光裂合酶的活性显著大于突变菌株Q336H(P<0.05).在不同盐浓度条件下,野生型菌株存活率基本没有变化,而突变菌株Q336H随着盐浓度增加存活率迅速下降.在体外修复实验中,甘油浓度对突变酶Q336H活性影响显著大于对CPD光裂合酶活性影响(P<0.05).甘油浓度增加导致突变酶Q336H修复活性逐渐下降,而CPD光裂合酶活性变化趋势是先增加后下降.因此,Gln336对盐生杜氏藻CPD光裂合酶活性具有重要影响,而且可能是该酶在盐胁迫下发挥功能的关键氨基酸残基.
- 姜腾飞王雨昊唐滋一黄国印徐辉乔代蓉曹毅
- 关键词：盐生杜氏藻
- 盐藻LHCB3蛋白的表达纯化及抗体制备
- 2011年
- 为了解盐生杜氏藻(Dunaliella salina)主要光捕获蛋白LHCB蛋白的功能,将已获得的盐藻Lhcb3基因构建到原核表达载体pET32a-DsLhcb3,通过优化表达条件,建立了高效的重组系统.pET32a-DsLhcb3在大肠杆菌中的优化表达条件为1 mmol/L IPTG在37℃下诱导4 h.采用镍离子亲合层析纯化获得LHCB3蛋白,并以此为抗原制备了多克隆抗体,经琼脂糖扩散检测效价,在1:16处有明显沉淀.提取盐藻总蛋白,经过制备的LHCB3抗体杂交,在29 000处获得两条明显的杂交条带,为进一步研究盐藻LHCⅡ蛋白表达机理奠定了基础.
- 赵锐金楠陈卫民马根徐青锐乔代蓉曹毅
- 关键词：盐生杜氏藻表达纯化抗体
- 盐胁迫下Dslhcb3和cao基因的表达及类囊体磷酸化状态转化被引量：2
- 2011年
- LHCⅡ在在类囊体膜中除了进行光能的吸收和传递之外,在维持类囊体膜的结构,调节激发光能在两个光系统之间的分配,光保护以及对各种环境的适应等过程中都起着重要的作用.为揭示盐藻LHCB在盐胁迫下的作用机制,以盐生杜氏藻(Dunaliella salina为材料,应用实时PCR的方法和蛋白电泳技术,研究lhcb3和叶绿素a加氧酶cao基因在低盐胁迫下的表达变化,以及盐藻类囊体膜的磷酸化水平和磷酯酶的变化.结果表明,在低盐环境下,lhcb3和cao基因的表达活性都呈降低的总趋势,这可能是盐藻适应不浓度盐环境胁迫的不反应.类囊体膜蛋白磷酸化水平先是降低,之后有所升高.时,发现磷酸酯酶有着相的变化趋势,并在12 h时最高.由此认为低盐条件下,类囊体膜蛋白在前期磷酸化水平的降低与磷酸酯酶活性降低有关,但在12 h后磷酸化水平有所升高,可能是细胞内平衡调节的结果,即磷酸激酶活性增强的结果.
- 文韬尚慧毅高志强陈卫民李璟李世林乔代蓉曹毅
- 关键词：盐藻实时PCR磷酸酯酶类囊体膜
- 黑曲霉多聚半乳糖醛酸酶AnPGA耐热性和酶活性的定向改造
- 2021年
- 果胶是一种蕴藏丰富的生物质资源,多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)是降解果胶的关键酶,在食品领域也有很广泛的应用,其酶活性和耐热性是制约果胶及其自身利用的关键.采用PoPMuSiC工具结合分子动力学模拟对Aspergillus niger SC323来源的多聚半乳糖醛酸酶AnPGA进行改进,预测影响解折叠自由能显著的位点结合柔性位点的策略,旨在提高其耐热性或酶活性.通过重叠PCR进行定点突变,并构建突变体的表达载体,电转化Pichia pastoris GS115后,进行诱导表达,成功筛选到酶活力和热稳定性均提高的突变体D73P,其最大反应速度是野生型的2.72倍,在65℃下的半衰期t_(1/2)比野生型增加了7 min,在65℃下处理30 min后的残余酶活性为野生型的1.86倍.本研究利用PoPMuSiC结合分子动力学模拟的设计策略提高了AnPGA的酶活力和耐热性,为工业应用提供了新的酶资源,也为其他工业酶的定向改造提供了参考.
- 颜佳超曹瑜杨丹妮吴勇徐辉乔代蓉曹毅
- 关键词：多聚半乳糖醛酸酶定点突变热稳定性酶活性
- 若尔盖高原湿地纤维素降解菌组成及产酶特性被引量：6
- 2010年
- 以青藏高原湿地若尔盖地区不同生境土壤为材料,通过富集,计算降解圈个数,分析该地区纤维素降解菌的含量.分离得到15株具有纤维素降解能力的菌株,从中复筛得到一株降解能力较强的菌株3C-6.12,经16S rRNA和Biolog鉴定为野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris).该菌株在以质量比例3:2的麸皮与玉米芯为发酵培养基时,酶活最高为66.44U/mL,最适pH值为6～8,最佳生长温度为30℃.该菌株的成功选育为后续高效、充分利用纤维素类物质生产生物能源提供了很好的菌种来源.
- 冯晓虎朱卫华吴弘谢洁张书巨艳乔代蓉曹毅
- 关键词：纤维素降解菌野油菜黄单胞菌湿地青藏高原
- 特殊生境油脂微生物多样性及其生物柴油的评价
- 随着化石石油的日益耗尽,能源安全问题日益突出,迫使人们寻找一种可再生的生物燃料。从油脂微生物出发产生物柴油还具有诸如生产周期短、容易培养、不占耕地、不受气候和季节变化影响、能连续发酵,发酵底物丰富且可再生等特点,是目前生...
- 巨艳张玲李世林乔代蓉曹毅
- 关键词：生物柴油物种多样性
- 文献传递
