南开大学药学院天津市分子药物研究重点实验室
- 作品数：19 被引量：91H指数：5
- 相关作者：李琳孟鹏赵辉周梦鸽刘琳更多>>
- 相关机构：兰州大学药学院广西中医药大学药学院哈尔滨商业大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 基于质量标志物(Q-Marker)“量效转换”的药材质量快速整合评价研究被引量：6
- 2021年
- 目的针对中药复杂的质量属性提出基于质量标志物(quality markers,Q-Marker)的"量效转换"概念,通过多项生物效价的多元整合分析,建立一种药材功效的综合评价方法。方法以当归为例选取药材中具有抗血小板聚集、Ca2+拮抗舒张血管、抑制NO活性释放以及具有抗炎、抗纤维化作用的抑制核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和Smad3蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic protein-3)的关键药效成分作为Q-Marker,分别建立其含量与对应功效之间的多元量效关系函数。以药材不同生物效价的预测值(yi)与其多批次均值(y^(-)i)之间的偏离度(KBio)表示其功效之间的差异。同时引入权重分配系数(Wi)对各生物效价的权重进行优化,并通过质量综合评价指数(Fq)公式(Fq=∑KBio)对上述指标进行整合。结果利用近红外光谱技术分别检测了500批次当归药材中阿魏酸、绿原酸、洋川芎内酯I、欧当归内酯A和Z-藁本内酯等Q-Marker的含量(xi),通过其含量变化分别预测出其抗血小板聚集与Ca^(2+)、NO、NF-κB和Smad3拮抗活性(yi)。并通过限定Fq值的正态分布的置信区间,筛选出功效相对稳定的药材。结论确立了一种基于Q-Marker的"量效转换"关系预测当归活血补血的功效的综合评价方法。基于数据分析和近红外光谱快速检测技术,为筛选品质稳定的药材提供了一种新的科学监管模式。
- 白钢田璐丛龙飞卢玉杰张凯雪姜民侯媛媛杨志刚张铁军刘昌孝
- 关键词：抗纤维化SMAD3洋川芎内酯I
- 偶氮类合成色素检测技术的研究进展被引量：30
- 2012年
- 偶氮类合成色素是我国批准的食用合成色素中比较常用的品种,虽然其价格、着色、性质等方面较天然色素具有明显的优势,但安全性问题不容小视。因此能否对这些化合物做出快捷、准确的含量测定就显得尤为重要。本文总结了多种偶氮类合成色素的含量检测方法及结果,综述了偶氮类合成色素检测技术的研究进展。
- 薛虎寅尹永梅张太昌宋佩田溪张昱孟萌郗日沫
- 关键词：色谱法免疫分析法
- 利用原核表达系统一步法制备生物素标记蛋白质被引量：1
- 2014年
- 传统的蛋白质生物素标记多采用体外化学修饰法,涉及生物素和蛋白质的活化、透析和纯化等多种处理,该方法步骤繁琐,且对目的蛋白的损失较大。本实验利用原核共表达质粒pCDFDuet-1,将含有6个组氨酸标签的人己糖苷酶D(hexosaminidase D,HexD)的cDNA与生物素受体多肽(biotin acceptor peptide,BAP)DNA进行PCR拼接,连入pCDFDuet-1的多克隆位点1(multiple cloning site1,MCS1);将以大肠杆菌Trans5α基因组为模板克隆得到的生物素连接酶(biotin ligase,BirA)基因连入MCS2,构建重组质粒pCDFDuet-hexD-BAP-birA。初步验证后将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,利用0.1 mmol/L的IPTG和80μmol/L的生物素进行诱导表达,采用Ni-NTA亲和层析和超滤对HexD进行纯化,SDS-PAGE检测分子量的大小(60 kDa)和纯度(90%以上)。以anti-HexD和链霉亲和素-HRP为抗体,Western blot检测发现,HexD-BAP表达正确,且被生物素标记;同时以4-MU-O-GalNAc为荧光底物,检测到生物素化标记HexD的糖苷酶活性为3.6 nmol/(min·μg),与未标记HexD的活性(3.06 nmol/(min·μg))相当。结果表明,可以利用BirA及其受体多肽,通过共表达质粒pCDFDuet-1,一步转化、表达和纯化,在大肠杆菌中进行外源蛋白的表达和生物素标记,且不改变目的蛋白的生物活性,可应用于免疫标记、互作蛋白的捕获等生物学研究。
- 谢小丽程剑松王晓敏梅香寒刘琳李静
- 关键词：原核表达生物素标记
- 应用柱前衍生化高效液相色谱法开辟了一种简单、快速的DNJ产生菌的筛选途径
- 2012年
- 【目的】应用柱前衍生化高效液相色谱法筛选产1-脱氧野尻霉素(DNJ)菌株,并对其进行系统鉴定。【方法】利用芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)柱前衍生化高效液相色谱法筛选DNJ产生菌;通过形态特征、培养特征、生理生化特征以及16S rRNA序列相似性分析等多项分类方法对DNJ产生菌进行鉴定;在10 L发酵罐水平进行发酵研究,利用FMOC-Cl柱前衍生化高效液相色谱法测定DNJ含量。【结果】从80株具有α-糖苷酶抑制剂活性的土壤放线菌中筛选得到一株DNJ产生菌,菌株编号为PW409,初步确定为戈壁三素链霉菌(Streptomyces gobitrici);发酵研究表明,DNJ为链霉菌PW409的次级代谢产物,发酵液中DNJ浓度为12.1 mg/L。【结论】首次将FMOC-Cl柱前衍生化高效液相色谱法应用于DNJ产生菌的筛选,并首次报道从戈壁三素链霉菌发酵液中鉴定到DNJ。
- 曹小芳王利强白芳白钢
- 关键词：1-脱氧野尻霉素柱前衍生化
- 基于监管科学的中药质量评价方法的整合研究思路和发展方向被引量：5
- 2022年
- 中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)或生物标志物(quality biomarker,Bio-Marker)的确证需要整合多学科的技术方法,通过探索成分、活性与功效之间的多元整合模式,创新复杂体系质量属性的科学表达方式,建立能体现以中医理论为基础的中药质量属性的客观评价体系。聚焦中药临床价值,结合产品特色优势,揭示其科学内涵,强化其质量属性参数与科学监管的关联,通过“药材来源-制剂加工-药效评价-临床疗效”全过程的传递溯源可控性研究,构建中药复方整体质量一致性的监管体系,以期为中药质量控制方法的研发提供可借鉴的研究路径、科学依据和技术方法。此外融合大数据背景下的中药质量的信息技术与人工智能技术也是未来应该关注的发展方向,通过科学监管保障和提升中药品质,助力中药的高质量发展。
- 白钢张铁军刘昌孝
- 关键词：生物标志物完整性
- HC2作为急性缺血性脑卒中诊断的潜在生物标志物
- 2023年
- 为了探究急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)患者和对照组静脉血血清中的O-GlcNAc糖蛋白差异,筛选AIS诊断的潜在生物标志物.首先对AIS和对照组血清中的O-GlcNAc糖基化修饰进行检测,发现AIS的O-GlcNAc修饰程度明显高于对照组(P<0.05),通过CpOGAD298N富集AIS和对照组血清中的OGlcNAc蛋白并进行质谱鉴定,得到差异蛋白肝素辅助因子Ⅱ(Heparin Cofactor Ⅱ,HC2),Western blot检测结果表明,富集蛋白中HC2丰度在AIS组显著高于对照组(P<0.01),ROC曲线分析显示,HC2对急性缺血性脑卒中具有潜在的诊断价值(AUC=0.882),并且高于常用的血脂指示标志.
- 鲁莹朱彧刘丽李玲张连文
- 关键词：急性缺血性脑卒中HC2
- 复方青芒降糖饮调节血糖的作用及其机制研究被引量：1
- 2019年
- 目的:观察复方青芒降糖饮对db/db小鼠血糖的调节作用并探讨其可能的作用机制。方法:将db/db糖尿病小鼠分为二甲双胍(0.221 g/kg)阳性对照组及复方青芒降糖饮低(2.28 g/kg)、中(4.55 g/kg)、高(9.1 g/kg)剂量组,灌胃给药,另以健康雄性C57BL/6小鼠作为正常对照组,灌胃无菌水。每日对小鼠进行行为学、进食量、饮水量观察,每隔1 d测量体质量,每周检测空腹血糖(FBG)水平。给药8 w后,进行口服葡萄糖耐量(OGTT)试验,检测糖化血红蛋白(GHbA1c)、空腹血清胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),检测肝脏中磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)水平,计算胰岛素抵抗系数(HOMA-IR)、小鼠脏器系数,HE染色法观察小鼠肝脏和胰腺组织的病理变化。结果:复方青芒降糖饮能改善db/db小鼠"多饮多食多尿"现象,但对体质量无明显影响;能改善葡萄糖耐量;调节db/db小鼠FBG、GHbA1c、TC、TG、PEPCK、G-6-Pase水平及肝脏系数;降低db/db小鼠FINS和HOMA-IR水平。结论:复方青芒降糖饮具有改善db/db小鼠糖脂代谢紊乱的作用,并能减轻肝脏和胰腺组织的病理变化。
- 李云鹃郝二伟白钢侯媛媛马逍遥侯小涛邓家刚
- 关键词：2型糖尿病糖代谢
- 一株β-葡萄糖苷酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究被引量：10
- 2012年
- 【目的】分离获得β-葡萄糖苷酶高产菌株,确定该菌分类地位,并对其所产β-葡萄糖苷酶的酶学性质进行初步研究。【方法】采用七叶灵显色法从土壤样品中筛选β-葡萄糖苷酶产生菌,再用对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)显色法进行复筛;通过形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列相似性分析等方法确定其分类学地位;利用超滤、疏水层析、阴离子层析、分子筛层析法对β-葡萄糖苷酶进行分离纯化;以PNPG为底物,测定β-葡萄糖苷酶的最适反应pH及最适反应温度,通过双倒数作图法确定β-葡萄糖苷酶催化不同底物水解的米氏常数Km值。【结果】从土壤样品中筛选得到一株β-葡萄糖苷酶高产菌株ZF-6C,初步鉴定为Bacillus korlensis;芽胞杆菌ZF-6C所产β-葡萄糖苷酶的分子量约为90 kD,最适反应pH和温度分别为7.0和40°C,该酶具有水解β(1,4)糖苷键的活性,最适底物为邻硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷,Km值为0.73 mmol/L。金属离子Ca2+、Pb2+增强酶活,而Cu2+、Fe2+抑制酶活。【结论】首次报道从Bacillus korlensis中分离得到β-葡萄糖苷酶,Bacillus korlensis ZF-6C所产β-葡萄糖苷酶在分子量、最适反应条件及底物特异性等方面均不同于已知酶,可能为一结构新颖且催化效率较高的β-葡萄糖苷酶。
- 郑芳曹小芳张亚玲白芳白钢
- 关键词：芽胞杆菌Β-葡萄糖苷酶酶学性质
- 基于质量综合评价指数的药材品质快速评价被引量：14
- 2021年
- 目的首次提出质量综合评价指数(Fq)的概念,并以当归Angelicae sinensis药材为例,通过多项检测指标的整合分析,建立一种药材品质综合评价与等级划分的方法。方法采用《中国药典》2020年版方法对当归药材中总灰分(x1)、酸不溶性灰分(x2)、水分(x3)、浸出物(x4)、挥发油(x5)和阿魏酸(x6)6项指标进行测定。利用近红外光谱技术(NIRS)构建上述检测指标与光谱之间的拟合模型,并开展多批次样品的系统检测建立数据库。通过定义Fq为各项指标的含量(xi)与其多批次均值(xi)偏离度(Ki)的加合,并基于其对药材品质的贡献引入权重分配系数(Wi),通过正交优化确立综合评价公式。结果所建立的上述6项指标的近红外预测模型效果良好,并应用其完成了对200份当归样本的测定,建立了数据样本库。各检测指标经偏离度计算及权重分配优化,最终确定当归药材的综合评价指数公式。经统计所收集当归样品的Fq值呈高斯分布,按照正态分布概率将样品平均分为5个等级区域,其不合格样品与优质样本可以得到明显区分,等级评价效果较好。结论该方法基于现行的《中国药典》监管体系实现了对当归药材品质的快速综合评价与等级区分,为中药材的科学监管研究提供了新的解决方案。
- 白钢刘昌孝张铁军丛龙飞姜民侯媛媛杨志刚王浩亮曾信陈杰
- 关键词：当归近红外光谱技术
- α-淀粉酶/糖苷酶抑制剂产生菌株PW638的分类地位及其产物的发酵、性质与应用研究(英文)
- 2013年
- 从土壤中分离得到了一株α-糖苷酶抑制剂产生菌株PW638.通过多相分类学研究将菌株PW638初步确定为白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus).该菌经10 L发酵罐水平发酵,发酵液中可积累一定量的A-糖苷酶抑制剂.它们能够显著地抑制重组人源A-淀粉酶和糖苷酶,并能有效降低小鼠餐后高血糖.因此,对于白浅灰链霉菌PW638的进一步研究有助于新型天然A-糖苷酶抑制剂药物的研发。
- 孟鹏张晨白芳白钢
- 关键词：Α-糖苷酶抑制剂发酵
