浙江大学实验动物中心 作品数:82 被引量:148 H指数:6 相关作者: 傅军 陈瑜 谢敏 吴凯 沈亮亮 更多>> 相关机构: 浙江科技学院生物与化学工程学院 浙江农林大学动物科技学院 首都医科大学基础医学院 更多>> 发文基金: 浙江省科技计划项目 浙江省医药卫生科学研究基金 卫生部科学研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 环境科学与工程 更多>>
支原体和肺支原体双通道荧光定量PCR法的建立及其在小鼠检测中的应用 目的建立能同时检测支原体通用型和肺支原体特异型的双通道荧光定量PCR方法。并在小鼠检测中进行应用。方法:采用TaqMan探针法进行支原体通用型和肺支原体特异型的双通道荧光定量PCR。取大肠杆菌、表皮葡萄球菌、人巨细胞病毒... 傅军 吴宜栋 余钟声关键词:PCR 阳性标本 双通道 文献传递 不同毛色豚鼠的TYR及MC1R基因多态性及组织表达分析 2025年 目的为定位豚鼠优势性状基因筛选遗传标志,探索豚鼠酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)、黑素皮质素1受体(melanocortin 1 receptor,MC1R)基因多态性及其mRNA表达水平与毛色表型的关系。方法选择自主培育的普通级豚鼠57只,依据毛色分为白(22只)、花(22只)和黑(13只)3组。腹腔注射过量戊巴比妥钠对豚鼠施行安乐死后,取背部皮肤,提取组织中DNA。通过克隆测序,检测各组豚鼠TYR、MC1R基因外显子编码序列(coding sequence,CDS)的多态性,采用实时荧光定量PCR方法检测两个基因在皮肤组织中的mRNA表达,进而探讨两基因与豚鼠毛色的关系。结果在TYR外显子Ⅰ的CDS区域发现1个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,其碱基A被G替换。所有白色豚鼠的TYR基因呈G/G基因型;深色(花、黑)豚鼠无G/G基因型,多数为A/A型,少数为A/G型;黑色豚鼠的A/A基因型频率高于花色豚鼠。MC1R基因外显子有2760 bp序列缺失,标记为-基因;非缺失样本标记为N基因。大部分白色豚鼠的MC1R基因呈-/-基因型;花色豚鼠以-/N为主;黑色豚鼠以N/N为主,-/N次之。白色豚鼠的TYR基因表达水平较高,花色豚鼠较低,黑色豚鼠居中,但三者无显著性差异(P>0.05)。白色豚鼠的MC1R基因表达水平非常低,花色及黑色豚鼠均极显著高于白色豚鼠(P<0.01),黑色豚鼠又显著高于花色豚鼠(P<0.05)。结论豚鼠TYR与MC1R基因协同调控毛色。TYR基因的G位点突变可能导致豚鼠白化,MC1R基因的N位点改变影响毛色的深浅。 汤银根 冯亚仙 钟敏 卫振 汪洌 刘迪文关键词:基因多态性 毛色 酪氨酸酶 绵羊血浆中氟甲喹及其代谢产物7-羟基氟甲喹浓度的RP-HPLC测定 2007年 利用C8色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以V(乙腈)∶V(15 mmol/L KH2PO4)缓冲液=39∶61为流动相,在320 nm紫外光下,利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定了绵羊血浆中氟甲喹及其代谢产物7-羟基氟甲喹的浓度。结果显示,氟甲喹和7-羟基氟甲喹分别在20-10 000 ng/mL和20-500ng/mL范围内线性关系良好(r=0.999和r=0.998),平均绝对回收率分别为84.3%±6.7%和67.5%±5.6%,日内与日间精密度均小于8.3%,最低检测限均为10 ng/mL;内源性物质不干扰测定。表明,RP-HPLC的工作曲线稳定,灵敏度高,操作步骤简单,可用于绵羊血浆中氟甲喹及其代谢产物7-羟基氟甲喹浓度的测定和药动学考察。 周庆关键词:氟甲喹 反相高效液相色谱 Zmu-1:DHP和DHP两个品系豚鼠组胺激发试验气道反应性的比较 被引量:4 2013年 目的研究Zmu-1:DHP和DHP豚鼠组胺激发试验气道反应性的差异,为哮喘研究提供具有较好反应性的动物模型。方法通过活体气管插管及雾化组胺气体吸入,测定豚鼠气道阻力和肺动态顺应性;采用离体气管片组胺滴定法,通过气管片收缩测定气管平滑肌对组胺的敏感性;采用同位素标记药物配位法,测定豚鼠气道组织组胺H1受体的密度及平衡解离常数。结果当豚鼠吸入大于0.5 mg/mL雾化组胺时,Zmu-1:DHP豚鼠气道阻力上升率和肺动态顺应性下降率与DHP豚鼠相比,其速度有增大趋势,但未达到显著水平(P>0.05);两个品系豚鼠雄性个体比雌性的敏感性显著增加(P<0.01)。当组胺浓度为10-5mol/L和10-4mol/L时,Zmu-1:DHP豚鼠气管片平滑肌的收缩率显著大于DHP豚鼠(P<0.01~0.05)。两个品系豚鼠气道组胺H1受体的密度及其平衡解离常数无显著差异(P>0.05)。结论在一定的组胺浓度范围内,Zmu-1:DHP豚鼠气道平滑肌对组胺的敏感性大于DHP豚鼠,雄性豚鼠的敏感性大于雌性豚鼠。两个品系豚鼠气道组胺H1受体数量无差异,提示气道反应可能还受到平滑肌膜上其它受体和化学介质的作用。 卫振 董新威 沈亮亮 刘迪文关键词:气道反应性 组胺 组胺H1受体 小鼠肝炎病毒A59毒株结构蛋白基因的克隆 :获得小鼠肝炎病毒(MHV)S1、S2、M及N结构蛋白基因,构建4个相应基因的重组质粒. 方法:依据Genbank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计S1、S2、M及N结构蛋白基因4对特异性引物,以A59毒株R... 陈晓娟 卫振 刘迪文关键词:肝炎病毒 结构蛋白基因 克隆表达 豚鼠基因组26个多态性微卫星标记的筛选 被引量:5 2014年 目的筛选豚鼠基因组的多态性微卫星标记,为豚鼠遗传质量控制及基因定位等工作奠定基础。方法采用磁珠富集法和豚鼠基因组数据库筛选法获取微卫星位点序列,通过分析和初步筛选,挑选部分候选位点,根据其序列设计引物,对5种不同来源的豚鼠基因组DNA标本进行PCR扩增,以期获得多态性分子标记。结果本实验采用磁珠富集法共获得微卫星序列304个,设计引物125对,最终获得多态性位点1个,暂未发现多态性的特异性位点17个;用数据库筛选法共获得微卫星序列292个,设计并合成相应引物178对,最终发现多态性位点25个,暂未发现多态性的特异性位点28个。结论本实验获得26个多态性微卫星标记,45个潜在的候选标记,为微卫星标记在豚鼠遗传质量监测及突变基因定位等工作的应用奠定了基础。 刘迪文 杨伟伟 吴宝金关键词:微卫星 不同品系豚鼠MHCI类基因的多态性及差异表达 由前期的研究可知,Zmu-1:DHP远交系豚鼠对口蹄疫病毒的敏感性为100%,和其他DHP品系相比存在显著差异。本研究利用不同品系豚鼠(Zmu-1:DHP远交系、Zmu-2:DHP远交系和DHP品系),提取其脾脏RNA,... 卫振 何珂 洪胜辉 刘迪文野菊花提取物对KKAy糖尿病小鼠高血糖、高血脂和血醛糖还原酶的影响 被引量:14 2016年 目的观察野菊花提取物对糖尿病KKAy小鼠血糖和血脂水平的影响,及对醛糖还原酶(AR)的抑制作用。方法 8周龄雄性KKAy小鼠,根据初始空腹血糖随机分为模型组、野菊花提取物20和100 mg·kg^(-1)组及格列美脲0.4 mg·kg^(-1)组,以雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每天ig给药1次,连续7周。每周测量小鼠体质量和摄食量,实验结束前测定空腹血糖并进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)。末次给药后禁食过夜,处死小鼠,取血清进行生化检测,ELISA测定血清中胰岛素、瘦素和AR水平,解剖取肝、肾、脾、睾周脂肪和肾周脂肪,测定脏器系数并进行常规病理组织学检查。实时PCR测定肾组织匀浆中AR m RNA表达。结果与模型组比较,野菊花提取物100 mg·kg^(-1)组小鼠摄食量明显减少(P<0.01),空腹血糖明显降低(P<0.05);OGTT结果表明野菊花提取物可显著抑制葡萄糖吸收(P<0.01),血清谷丙转氨酶、葡萄糖、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、胰岛素、瘦素和AR水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。组织病理学观察显示,模型组小鼠肝、肾、脂肪、胰腺和脾组织出现不同程度病变,野菊花提取物可抑制糖尿病引起的组织病理变化;同时可降低肾组织AR m RNA表达。结论野菊花提取物对KKAy小鼠有降血糖和血脂的作用,并能保护因糖尿病引起的肾、肝、脂肪、胰腺和脾损伤,其对肾的保护作用与降低肾组织AR m RNA表达从而抑制AR作用有关。 陈雁虹 张娟 艾志鹏 陈婷关键词:野菊花 醛糖还原酶 甘油三酯 应用CRISPR/Cas9技术制备阿尔茨海默病小鼠模型 被引量:1 2019年 目的敲除α7烟碱型胆碱能受体(α7nAChR)基因构建阿尔茨海默病(AD)小鼠模型,验证成年敲除(KO)鼠是否有AD表征。方法利用CRISPR/Cas9技术,针对α7nAChR基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵。通过检测DNA序列,鉴定和筛选出KO小鼠进行行为学测试。结果 KO鼠α7nAChR基因有531 bp片段敲除;与野生型(WT)组相比,KO组有高架十字迷宫开壁区活动时间短、条件性恐惧表现出僵直时间百分比增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功制备AD模型鼠,成年KO鼠学习记忆功能正常,但有焦虑样行为趋势。 陈晓娟 李巍 张旭亮关键词:基因敲除 阿尔茨海默病 Zmu-1∶DHP品系豚鼠自发性近视性状的初步测定 目的 Zmu-1∶DHP品系豚鼠表现出较高的自发性近视现象.我们对Zmu-1∶DHP品系和对照系DHP豚鼠进行屈光参数的测定,以期了解该品系豚鼠的近视性状特征.方法 采用传统检影的方法累计对本中心3周龄Zmu-1∶DHP... 卫振 蒋丽琴 魏远华 谢敏 刘迪文关键词:性状特征