安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室
- 作品数：17 被引量：77H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3不同剂量对免疫保护性的影响被引量：6
- 2006年
- 目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电洗脱和透析的方法制备纯化的rSj14-3-3蛋白,分5组(第1、2、3组为rSj14-3-3蛋白50μg、100μg和300μg实验组,第4、5组分别为福氏佐剂和生理盐水对照组)免疫BALB／c小鼠并进行攻击感染实验。在尾蚴攻击感染6周后,剖杀小鼠计算各组的减虫率和减卵率。并在试验过程中留取不同时期小鼠血清,检测抗Sj14-3-3特异性IgG抗体。结果成功表达出rSj14- 3-3蛋白,纯化蛋白免疫小鼠行攻击感染后各实验组的减虫率为第1组28．20％、第2组43．10％、第3组40．00％;各组的减卵率分别为(按以上组序)41．80％、57．50％、55．70％。各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(减虫率:第1组t=6．8、第2组t=8．7、第3组t=7．3,各组P值均<0．01;减卵率:第1组t=11．23、第2组t=11．54、第3组t=7．99,各组P值均<0．01);各实验组间两两比较,第1组与第2组间(减虫率:X2=8．96,P<0．05;减卵率:X2=15．69,P<0．05)、第1组与第3组间(减虫率:X2=6．52,P<0．05;减卵率:X2=12．52,P<0．05)差异有统计学意义;第2、3两组间差异无统计学意义(减虫率:X2=1．20,P>0．05;减卵率:X2=0．93,P>0．05)。各实验组的抗Sj14-3-3特异性总IgG水平都有显著升高,所测的4个亚型中以IgG1和IgG2a亚型升高为主,IgG2b和IgG3亚型升高不明显。结论重组Sj14-3-3的免疫保护性与免疫剂量有一定关系,以100μg抗原量免疫小鼠获得的保护性最好。
- 刘庆中胡元生沈继龙江宝玲汪学龙
- 关键词：重组蛋白质类抗体生成
- 中医药现代化与中药指纹库的建立被引量：3
- 2003年
- 沈继龙
- 关键词：中医药现代化生物技术药物设计基因芯片
- 日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达被引量：1
- 2005年
- 目的 从日本血吸虫成虫 c DNA中扩增出信号蛋白 Sj1 4-3 -3编码基因 ,并亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1( +) ,旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法 提取日本血吸虫成虫总 RNA,分离m RNA,RT-PCR法制备c DNA,并扩增出 Sj1 4-3 -3编码基因 ,通过线性 TA克隆载体 p GEM-T连接 ,亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1 ( +) ,经转染至 COS-7细胞中表达 ,Western blotting鉴定。结果 RT-PCR产物、p GEM-T-Sj1 4-3 -3及 pc DNA3 .1 ( +) -Sj1 4-3 -3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段 ,经 SDS-PAGE及 Western blotting鉴定后的分子量为 2 9k D。结论 真核表达重组质粒 pc DNA3 .1( +) -Sj1 4-3 -3在 COS-7细胞中的表达产物是一分子量为 2 9k D的蛋白 ,并能被抗 Sj1 4-3
- 胡元生沈继龙
- 关键词：日本血吸虫真核表达
- 日本血吸虫信号蛋白14-3-3的虫体免疫定位被引量：25
- 2003年
- 目的 研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。 方法 从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和成虫制备冰冻切片。利用rSj1 4 3 3单克隆抗体 ,间接免疫荧光法探讨信号蛋白 1 4 3 3虫体内的分布。 结果 免疫荧光染色结果显示 ,rSj1 4 3 3单克隆抗体可特异性地结合天然Sj1 4 3 3抗原表位 ,背景清晰 ,Sj1 4 3 3广泛分布在雌、雄成虫的皮层、皮下层、肌层和实质层 ,前三种组织中特异性荧光呈线状分布 ,实质中特异性荧光弥散 ;童虫中Sj1 4 3 3也广泛的分布在皮层、皮下层、肌层和实质层。 结论 免疫荧光染色成功地确定了Sj1 4 3 3蛋白在成虫和 1
- 刘庆中沈继龙汪学龙
- 关键词：虫体免疫定位单克隆抗体SJ14-3-3成虫童虫
- 用电穿孔法将绿色荧光蛋白基因导入日本血吸虫童虫并表达被引量：3
- 2005年
- 目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证转基因在童虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在童虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功扩增出760 bp和276 bp的预期大小的片段,Western blotting证实了EGFP基因在童虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察表明EGFP主要定位在童虫的皮层和副皮层,虫体前端尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫童虫体内并获得表达。
- 袁小松沈继龙汪学龙胡元生罗庆礼
- 关键词：日本血吸虫电穿孔转基因基因表达
- 重组弓形虫14-3-3抗原用于弓形虫血清抗体的检测被引量：4
- 2005年
- 目的 探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法 根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较。结果 对400份血清标本的平行检测,Toxo14 -3 -3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2 5%、3 0%和3 .25%,三者之间差异无显著性(P>0 .05);三者之间的符合率为99 0%、98.8%和99 .0%,差异无显著性(P>0. 05 )。结论 重组Toxo14 -3- 3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值。
- 蔡娟都建汪学龙沈继龙
- 关键词：抗体原虫酶联免疫吸附测定
- 重组日本血吸虫14-3-3信号蛋白和GST用于急性血吸虫病的诊断
- 目的用重组日本血吸虫14-3-3蛋白和GST作为诊断抗原,建立间接ELISA法诊断急性血吸虫病。方法从日本血吸虫成虫cDNA文库中分别扩增出Sj14-3-3和SjGST编码基因,亚克隆至表达载体pET28a（+）,诱导表...
- 罗庆礼沈继龙卞茂红刘淼余轶婧
- 关键词：日本血吸虫GST免疫诊断
- 文献传递
- 日本血吸虫酪氨酸羟化酶基因的克隆和序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的 克隆并鉴定日本血吸虫酪氨酸羟化酶(TH)基因,探讨其他信号蛋白在信号传导中对TH的调节及其之间的分子作用机制,从而为血吸虫新型疫苗的设计和药物开发开辟新的途径。 方法 以曼氏血吸虫的 TH cDNA为模板设计引物,以日本血吸虫成虫mRNA为模板逆转录合成cDNA链,将扩增出的日本血吸虫TH蛋白编码基因序列,克隆入 pGEM T easy载体,用单酶双切法和DNA测序进行鉴定,并与曼氏血吸虫的TH基因序列进行同源性比较。 结果 自日本血吸虫RNA经逆转录得到一长度为 480 bp的 DNA片段,经测序与曼氏血吸虫 TH的同源性为 87%。结论 成功扩增出日本血吸虫TH的中间编码区域,为进一步扩增日本血吸虫TH基因全长以及后续实验奠定了基础。
- 胡元生沈继龙汪学龙钟政荣沈继录李小月王家传江宝玲倪婧
- 关键词：酪氨酸羟化酶基因克隆信号转导
- Sj14-3-3核酸疫苗联合CpG,mIL-12和SjGST抗日本血吸虫感染的保护作用
- 目的在证明核酸疫苗Sj14-3-3具有部分抗血吸虫感染的基础上,联合使用CpG,mIL-12 和SjGST,观察此二种佐剂和SiGST的免疫效果及其抗血吸虫感染的初步机制。方法分别用①Sj14-3-3 组;②Sj14-3...
- 胡元生沈继龙
- 关键词：谷胱苷肽-S-转移酶保护性免疫
- 文献传递
- 弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 体外扩增弓形虫 RH株膜表面抗原 SAG1编码基因 ,构建原核表达质粒 ,并表达 SAG1编码基因序列。方法 收集、纯化 RH株速殖子 ,提取 RNA,据已知的 SAG1基因序列 ,在设计合成的 1对引物中引入 Eco RI和 Hind 酶切位点。应用 RT-PCR技术 ,扩增 SAG1基因片段 ,插入原核表达质粒 p ET2 8a中 ,转化大肠杆菌 BL2 1 感受态细胞 ,重组子经 Eco RI和 Hind 双酶切、PCR鉴定 ,转化宿主菌 BL2 1 ,并以 IPTG诱导表达。结果 从弓形虫 RH株 RNA中扩增出 10 1 1 bp的 SAG1基因片段 ,构建重组质粒 p ET2 8a/ SAG1 ,酶切和 PCR鉴定产物大小均与预期值相符 ;IPTG诱导 ,SDS-PAGE显示表达产物的大小约 3 4.8k D。结论 成功地从弓形虫 RH株 RNA中获取 SAG1基因 ,构建了 p ET2 8a/ SAG1重组质粒并获得了高效表达 。
- 都建沈继龙汪学龙王维
- 关键词：弓形虫表面抗原SAG1基因大肠杆菌
