中国农业大学动物科技学院农业生物技术国家重点实验室
- 作品数：17 被引量：60H指数：4
- 相关作者：张忠诚白丽华李文海杜正霖刘伟更多>>
- 相关机构：北京农学院食品科学与工程学院华中农业大学食品科学技术学院西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 不同冷冻和解冻方法对小鼠桑椹胚发育的影响被引量：3
- 2006年
- 本试验以2种程序化冷冻液和2种玻璃化冷冻液对昆明白系小鼠的桑椹胚进行细管法冷冻保存,比较程序化冷冻-管外解冻和玻璃化冷冻-管内解冻对胚胎体内、外发育的影响。胚胎体外培养结果表明:玻璃化冷冻组及程序化冷冻组胚胎发育率(95.3%￣95.8%,98.9%)无显著(P>0.05)差异。将程序化冷冻、EFS30玻璃化冷冻以及新鲜的胚胎各168枚移植给假孕受体鼠,妊娠受体产活仔率各组间相比(50.8%,58.3%,54.9%)无显著性(P>0.05)差异。结果证明,玻璃化冷冻保存的胚胎管内解冻效果好,为生产中家畜的胚胎移植提供了理论和技术参考。
- 杨中强朱士恩周光斌侯云鹏闫长亮
- 关键词：畜牧学玻璃化桑椹胚小鼠
- 鸡胚胎干细胞能量代谢的特点
- 2010年
- 细胞能量代谢与细胞生命活动紧密相关,但目前对于鸡胎干细胞能量代谢特的研究较少.本研究利用前期建的chES细胞模型,通过电子显微发现未分化的chES细胞胞质内储存大量糖原颗和卵黄颗.逆转录-聚合酶链反应对能量代谢途中的要限速酶的基因表达分析显,未分化的chES细胞不表达丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶,与鸡胎成纤维细胞相比低表达葡萄糖转运蛋白1和磷酸果糖激酶,高表达己糖激酶1和糖原合成酶;分化中的chES细胞与成年母鸡肝脏相比少量表达PCX和PCK2,与CEF细胞相比高表达GLUT1,HK1,PFK,而GYS的表达没有显性差异.过酸希夫氏染色显,细胞养过程中未分化chES细胞中储存的糖原颗未见减少,而分化中的chES细胞的糖原颗逐渐减少.此外,通过赫斯特荧光染料33342和化丙啶双染色发现,大量未分化的chES细胞在体外养过程中死亡,而添加外源性6-磷酸葡萄糖显减少细胞死亡.上述果说明,未分化chES细胞要以糖原合成为,无糖异生代谢,而分化中的chES细胞以糖酵代谢为.未分化的chES细胞以大量消耗代谢中间产物G6P为代价进行糖原合成,造成细胞内源性G6P相对不足引起细胞死亡.因此,细胞内糖原的含量反映了chES细胞的分化程度.chES细胞在体外养时可通过添加G6P来提高生存率.
- 李佳张宝路韩红兵曹之辰连正兴李宁
- 关键词：能量代谢糖原细胞命运
- Henna基因突-变是导致北京紫眼果蝇眼部蝶呤含量减少的重要原因被引量：3
- 2008年
- 苯丙氨酸羟化酶被认为参与黑腹果蝇眼部蝶呤代谢,但是始终都缺乏有力证据.Henna是苯丙氨酸羟化酶的编码基因,"北京紫眼"果蝇(Hnbp)是Henna基因的一个隐性突变体,Hnbp突变形成的原因是Henna基因的第二外显子上具有插入片段.在Hnbp中,其编码产物的Biopterin-Hydroxyl功能域中增加了15个氨基酸残基.蛋白预测结果显示,插入的残基改变了原有的蛋白结构,这种变化很可能降低了苯丙氨酸羟化酶与四氢生物蝶呤结合的能力.为了恢复突变表型,利用UAS-GAL4转基因体系使野生型Henna基因在Hnbp的背景下表达.在双拷贝的转基因系GMR-GAL4 UAS-Henna/UAS-Henna;Hnbp/Hnbp中,突变表型得到完全恢复:果蝇的眼色由突变体的紫色恢复到野生型的红色,蝶呤含量也从突变体的30%升至98%,与野生型差异不显著(P>0.05).上述实验结果充分说明,Henna基因突变是导致Hnbp突变体眼部喋呤含量降低的重要原因,为苯丙氨酸羟化酶参与果蝇眼部蝶呤代谢提供了体内实验的直接证据.
- 王勤赵春江白丽华邓学梅吴常信
- 关键词：黑腹果蝇苯丙氨酸羟化酶
- 荧光探针JC-1与PI联合染色法在猪精子线粒体膜电位检测中的应用被引量：3
- 2010年
- 目前,对于精子线粒体膜电位(MMP)的检测分析,通常采用JC-1单独染色,这种染色方法可以准确地区分高、低MMP精子,但不能明确区分精子的存活状态。本研究采用JC-1与碘化丙啶(propidium iodide,PI)2种荧光染料联合染色的方法,对6种不同保存条件下的猪精子进行染色,分别使用流式细胞仪与荧光显微镜2种检测手段对猪精子MMP进行检测。结果表明:死亡精子头部呈红色,高MMP精子尾部呈橙红色,低MMP精子尾部为绿色。2种检测手段的结果比较显示,荧光显微镜能够有效地区分出高、低MMP死精子,但对于活精子MMP的高低检测效果不甚理想。相反,流式细胞仪则能够有效地区分活精子MMP的高低,但对于死精子MMP高低的检测仍较困难。因此,对于猪精子线粒体MMP的检测,采用JC-1与PI双染的方法,用流式细胞仪与荧光显微镜进行联合检测,能比较全面的反映出精子线粒体的功能状态。
- 任康李俊杰王亮王彦平侯云鹏朱士恩
- 关键词：精子线粒体膜电位PI公猪
- 全基因组关联研究理论及其在流行病中的应用被引量：1
- 2011年
- 全基因组关联研究（GWAS）利用遍布于全基因组范围的分子标记（主要为单核苷酸多态性，SNP）并借助强大统计学工具，对影响某些复杂性状如疾病易感的遗传变异进行鉴定和分析。
- 卢昕阚飙刘剑锋张勤
- 关键词：全基因组关联研究流行病
- 牦牛乳酸脱氢酶-1两种遗传变异体的纯化及酶学特性比较被引量：6
- 2009年
- 【目的】从乳酸脱氢酶(LDH)水平上探索牦牛(Bos grunniens)低氧适应性分子机制。【方法】利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析牦牛组织中LDH同工酶谱;用比色法测定牦牛、黄牛和水牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力;采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析从牦牛心肌组织中纯化LDH1(由4个H亚基组成)的2种遗传变异体,进行酶学性质的比较。【结果】电泳方法检测发现牦牛LDH1存在2种遗传变异体,根据电泳迁移率分别命名为快型和慢型(LDH1-F和LDH1-S)。获得纯化的牦牛LDH1-F和LDH1-S,比活力分别为21.4U·mg-1蛋白和17.8U·mg-1蛋白,在SDS-PAGE和PAGE上均显示1条区带。2种变异体以NADH为底物的米氏常数(Km)值差异不大,均显著高于普通牛的LDH1;以丙酮酸钠为底物的Km值LDH1-F小于LDH1-S。试验进一步比较了携带不同LDH1变异体的牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力和各种同工酶谱,未见显著差异,而牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力显著或极显著低于黄牛和水牛。【结论】牦牛LDH12种遗传变异体的Km值存在差异,且Km(NADH)高于普通牛;牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力低于普通牛。
- 郑玉才赵兴波周静朴影金素钰贺庆华洪键李宁吴常信
- 关键词：牦牛乳酸脱氢酶
- Tazol减缓玻璃化冷冻造成的体外成熟猪卵母细胞线粒体、脂肪颗粒损伤
- 本实验对玻璃化冷冻中冷冻液毒性、OPS法玻璃化冷冻对体外成熟猪卵母细胞线粒体、脂肪颗粒的分布和超微结构的影响展开研究，同时探讨紫杉醇(Taxol)在玻璃化冷冻中对卵母细胞的保护作用。结果表明：(1)冷冻液毒性处理与OPS...
- 傅祥伟史文清阿布力孜·吾斯曼任康王亮裴燕朱士恩
- 关键词：线粒体脂肪颗粒玻璃化冷冻紫杉醇猪卵母细胞
- 文献传递
- cDNA芯片差异表达基因检测的非转换方法(英文)
- 2006年
- cDNA微阵列数据中包含许多变异因素,用于检测差异表达基因和其它统计分析前,必须将这些“噪音”剔除。对 数比法(背景校正、对数比转换和数据标准化)已经被广泛应用于cDNA微阵列数据分析中,然而这种方法却存在着一些 亟待解决的缺陷。对此,该文提出一种非转换方法,它可免去对数比的转化过程,直接在背景校正后进行数据标准化,可 以有效剔除实验“噪音”。研究结果表明:在检测差异表达基因的效率方面,非转换方法比常规的对数比法具有更好的稳 健性和更高的检测功效,基因检出率和准确性大大提高。
- 张纪刚殷宗俊张勤
- 关键词：CDNA芯片差异表达基因
- SSH法结合定量PCR技术研究双肌臀猪肌肉组织的差异表达基因被引量：14
- 2005年
- 利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH) 成功地构建了双肌臀与非双肌臀大白猪肌肉组织差异表达的消减cDNA文库,获得有效克隆686个. 对整个文库测序分析,共获得587条有效序列. 利用BLAST在线软件与GenBank、GenBank EST和Tigr Porcine EST等数据库进行同源序列比较,发现其中有11个未知新序列,可能代表“双肌臀”大白猪肌肉组织特异表达的新基因. 对文库中所包含的兰尼啶受体基因(RYR1) 、钙依赖性蛋白激酶基因(CAMK2)、人类胰岛素生长因子结合蛋白-7 基因(IGFBP7),以及695号、882号和480号3个新基因进行了实时荧光定量PCR检测,结果显示:RYR1、CAMK2及IGFBP7基因在双肌臀猪肌肉组织RNA池中的表达量,分别为对照的非双肌臀猪肌肉组织RNA池中表达量的1.87、1.90和1.85倍;695号、882号和480号3个新的ESTs在双肌臀猪肌肉组织RNA池中的表达量为非双肌臀猪肌肉组织RNA池中表达量的1.48、1.44和1.78倍. 这提示我们,上述基因的上调表达很可能与猪双肌臀性状的发生有密切的关系,可以作为研究该性状的候选基因.
- 李文海邓学梅李宁王少华赵毅强杜正霖张然吴克亮吴常信
- 关键词：双肌臀大白猪抑制性消减杂交基因差异表达
- 澳洲波尔山羊胚胎3种冷冻方法对其胚胎移植效果的影响被引量：4
- 2007年
- 在25℃室温下，采用细管法（一步法、二步法）和OPS法，以不同浓度的EFS、EDFS为玻璃化冷冻液，对澳洲波尔山羊致密桑椹胚和囊胚进行玻璃化冷冻保存。同时利用1．5mol／L EG为抗冻保护剂对胚胎进行常规法冷冻保存。分别将上述3种方法冷冻解冻后的胚胎移植于同期发情后6～7d的云南黑山羊受体。结果表明，细管法胚胎玻璃化冷冻保存效果均以EFS40组为佳，解冻后胚胎移植产羔率分别为40．54％（15／37；一步法）和51．35％（19／37；二步法）。与新鲜胚胎移植产羔率（52．50％，21／40）和常规法冷冻保存的胚胎移植产羔率（45．16％，14／31）相比无显著性差异（P〉0．05）。另外，用EDFS30玻璃化溶液，OPS法冷冻解冻后的胚胎移植产羔率高达51．43％（18／35），为整个玻璃化冷冻试验的最佳值。玻璃化冷冻方法简便、迅速，无论是细管法还是OPS法均获得了比较理想的胚胎移植效果。
- 洪琼花朱士恩田树军冯建忠刘国世曾申明张忠诚
- 关键词：波尔山羊胚胎玻璃化冷冻胚胎移植
