郑州大学医学院分子细胞生物学研究中心
- 作品数：12 被引量：27H指数：3
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- 纳米脂质体槲皮素联合8-Br-cAMP对人Rb44细胞组蛋白脱乙酰化酶抑制效应的探讨
- 2012年
- 目的探讨纳米脂质体槲皮素(nanoliposomal quercetin,nLQ)联合8-Br-cAMP对培养的人Rb44细胞组蛋白脱乙酰化酶的抑制效应。方法将培养的Rb44细胞分为4组:nLQ组,以40μmol·L-1nLQ培养;8-Br-cAMP组:以20μmol·L-18-Br-cAMP培养;nLQ+8-Br-cAMP组;以40μmol·L-1nLQ和20μmol·L-18-Br-cAMP共培养;对照组:不加nLQ或8-Br-cAMP。应用MTT实验检测细胞生长抑制率(GSR)。应用免疫斑点印迹检氉测脱乙酰化酶抑制物、NF-κBp65、磷酸化IκBα及c-myc的表达。对表达的靶信号以图像分析仪扫描灰度值。结果与对照组相比,nLQ组和8-Br-cAMP组GSR达44%±1%和40%±1%,均为P<0.05;nLQ+8-Br-cAMP组GSR达60%±1%,P<0.01。nLQ组、8-Br-cAMP组、nLQ+8-Br-cAMP组与对照组相比,脱乙酰化酶抑制物、NF-κBp65及c-myc的表达均减低,均为P<0.05;而磷酸化IκBα的表达均增强,均为P<0.05。结论 nLQ联合8-Br-cAMP可下调脱乙酰化酶抑制物表达,上调磷酸化IκBα的表达同时可抑制NF-κBp65的表达。
- 郭慧丽王予伟郑乃刚吴景兰
- c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:观察c- myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL- 60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用,探讨 ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性。方法:应用c -myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c- myc基因,RT -PCR方法检测该基因表达抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化,绘制细胞生长 曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果:c- myc基因反义寡核苷酸转染HL -60细胞后,c -myc基因表达明显受抑;S 期细胞比值由55.6%降至16.7%;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结 论:c -myc基因反义寡核苷酸对HL -60细胞增殖及c- myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细 胞增殖的核酸药物。
- 孙玲王峰乐晓萍孙慧姜中兴程远东陈绍倩王一浩马鸿雁张钦宪
- 关键词：HL-60细胞C-MYC基因反义寡核苷酸
- 人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸联合顺铂对HL-60细胞增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:研究人端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸(ASODN)联合顺铂(CDDP)对HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:选用20μmol/L ASODN和正义寡核苷酸(SODN)封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,作用48h后加用2.5μmol/L,5μmol/L CDDP,继续作用于HL-60细胞48h;台盼蓝拒染法检测各组细胞的增殖抑制情况,姬姆萨染色后倒置显微镜观察凋亡细胞形态;分别采用流式细胞仪、TUNEL法检测细胞凋亡。结果:hTERT ASODN联合CDDP组HL-60细胞的增殖明显抑制,与hTERT SODN联合CDDP组、单用CDDP组比较差异有统计学意义(P<0.05);hTERT ASODN联合5μmol/L CDDP与hTERT ASODN联合2.5μmol/L CDDP比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP与单用CDDP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。姬姆萨染色后,hTERT ASODN联合CDDP组可见大量凋亡小体,而单用CDDP组仅见少量凋亡小体。流式结果与TUNEL结果一致:hTERT ASODN联合CDDP组对HL-60细胞具有明显诱导凋亡作用,同其余各组比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP组与单用CDDP组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:hTERT ASODN联合低浓度CDDP能明显抑制HL-60细胞的增殖,并提高细胞凋亡率。
- 孙玲巩宏涛任小晶王峰乐晓萍张钦宪
- 关键词：HL-60细胞人端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸凋亡
- hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响
- 2007年
- 目的:研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞诱导凋亡作用及细胞周期的影响。方法:应用hTERT ASODN封闭HL-60细胞hTERT基因,RT-PCR方法检测目的基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分析,TUNEL方法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA梯带。结果:hTERT ASODN作用细胞72h后,hTERT基因表达明显受到抑制(P<0.01)。流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞阻滞于G0/G1期,S、G2/M期细胞减少(P<0.05);细胞增殖指数(PI)明显降低(P<0.05);检测出早期凋亡峰。Annexin V/PI检测及TUNEL检测均显示:ASODN组凋亡细胞阳性率明显高于SODN组(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳显示:ASODN组出现凋亡DNA梯带。结论:hTERT ASODN能够封闭目的基因表达,阻滞HL-60细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,对治疗白血病具有潜在应用价值。
- 王峰孙玲孙慧乐晓萍张钦宪
- 关键词：HL-60细胞HTERT基因反义寡核苷酸细胞周期凋亡
- hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用被引量：3
- 2006年
- 目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对 HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用。方法用流式细胞术检测 hTERT ASODN 转染 HL-60细胞72 h 后细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞 DNA 梯带;将转染及未转染寡核苷酸的 HL-60细胞分别接种BALB/c 裸鼠,观察成瘤情况,切片观察移植瘤组织形态;另取10只 BALB/c 裸鼠,改进成瘤方法使其均匀成瘤后分成两组,在瘤体局部分别注射 ASODN、磷酸盐缓冲液(PBS),经7d 治疗后测量瘤体并切片观察其细胞形态变化,采用 TUNEL 方法检测细胞凋亡。结果 hTERT ASODN 作用于 HL-60细胞72 h 后,流式细胞术检测出早期凋亡峰,琼脂糖凝胶电泳显示 DNA 梯形条带,SODN 组及空白对照组未检测出凋亡峰及 DNA 梯形条带 ASODN 转染的 HL-60细胞组 BALB/c 裸鼠接种后第16～17天成瘤,5只中2只成瘤,未转染组在第12～13天成瘤,5只中4只成瘤,成瘤后 ASODN 治疗组瘤组织间质及血管较少,PBS 治疗对照组瘤组织间质发达,血管丰富。成瘤后 ASODN 治疗前肿瘤体积为(100.9±24.6)mm^3,治疗后肿瘤与 PBS 对照组比较,生长明显减缓[瘤体积分别为(422.7±326.4)mm^3和(786.4±357.6)mm^3](P<0.05) 组织切片显示,ASODN 治疗组瘤组织中可见大量细胞呈现凋亡形态,PBS 治疗组则少见凋亡细胞 TUNEL 检测显示,ASODN 治疗组瘤组织中阳性细胞数较 PBS 治疗组明显增多(P<0.05)。结论 hTERT 基因 ASODN 能够诱导 HL-60细胞凋亡并降低其在 BALB/c 裸鼠体内的致瘤性,抑制移植瘤增长速度。
- 孙玲王峰孙慧乐晓萍葛秀峰刘林湘张钦宪
- 人表皮干细胞群体的分离及其生物学特性
- 目的探讨浓集／分离人包皮内具有增殖能力的表皮裸干细胞群体(NSCP)的方法及其生物学特性。方法对消化分离的人表皮单细胞悬液进行不同目数筛网过滤,P63／k19抗体包被的ELISA法和P63抗体耦联的Sepharose-4...
- 王黎李红文吴景兰张晨阳王一菱丁一
- 关键词：人表皮干细胞生物学特性细胞群体
- 文献传递
- 8-Br-cAMP联合槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的逆转化作用被引量：1
- 2008年
- 目的探讨8-Br-cAMP与槲皮素联合用药对人食管癌Eca-109细胞逆转化的作用。方法将培养的Eca-109细胞随机分为4组:①8-Br-cAMP组(Br):加终浓度为2×10-5mol/L8-Br-cAMP;②槲皮素组(Q):加槲皮素终浓度为43μmol/L;③8-Br-cAMP和槲皮素共同作用组(Br+Q):加终浓度为2×10-5mol/L8-Br-cAMP和终浓度为43μmol/L的槲皮素;④对照组(C):仅加DMEM培养液(含10%胎牛血清)。同时培养48h后分别对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜滴膜两种标本,进行Caspase-3和PCNA的免疫组化和免疫斑点印迹实验;应用完整细胞原位斑点印迹杂交技术检测c-myc、野生型p53(wtp53)、p16和EGFR的基因表达;并进行分化细胞/增殖细胞计数。结果8-Br-cAMP与槲皮素联合或单独应用均可上调Caspase-3免疫反应信号的表达,下调PCNA免疫反应信号的表达;同时上调wtp53和p16基因的表达,下调c-myc和EGFR基因的表达;且分化细胞的比率显著提高。结论8-Br-cAMP与槲皮素联合用药或单独用药均可通过调控人食管癌Eca-109细胞癌基因和抑癌基因的表达对Eca-109细胞起到生长抑制和促分化的作用。
- 孟明利宫璀璀王文丽吴景兰刘影
- 关键词：PCNA癌基因槲皮素
- 老年小鼠腹腔巨噬细胞HSP70、iNOS及iNOSmRNA表达的意义被引量：1
- 2003年
- 目的 :通过观察老年小鼠腹腔巨噬细胞热休克蛋白 (HeatshockproteinHSP) 70、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)及其基因 (iNOSmRNA)的表达 ,探讨老年机体免疫功能低下及易发心脑血管疾病的机制。方法 :取老年小鼠及成年小鼠各 10只 ,采用免疫组化技术检测HSP70的表达 :采用组织化学检测iNOS的活性 :采用原位杂交技术检测iNOSmRNA的表达 ,所有斑点印迹用薄屠扫描仪进行扫描 ,并对扫描值进行统计学处理。结果 :老年小鼠HSPT0 ,iNOS及iNOSmRNA的表达为 4 .34± 1.5 7、3.0 3± 1.2 8及 5 .89± 1.90 ,成年小鼠HSP70、iNOS及iNOSmRNA的表达为 7.13± 2 .12、5 .5 7土 1.36及 12 .39土 2 .6 8,两组相比有显著差异 ,P <0 .0 1。结论 :提示老年机体易发心脑血管疾病、肿瘤及其它疾病的机制之一可能与体内HSP70。
- 马玉红王玉兰吴景兰
- 关键词：老年小鼠腹腔巨噬细胞HSP70INOSINOSMRNA
- c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用
- 目的:研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用,探讨反义c-myc作为药物进行白血病基因治疗的可行性。方法:将硫代修饰的c-myc反义寡核苷酸转染HL-60细胞以封闭c-...
- 孙玲孙慧王一浩马鸿雁王峰乐晓萍张钦宪
- 关键词：C-MYC反义寡核苷酸HL-60基因表达细胞增殖
- 文献传递
- 8-Br-cAMP与槲皮素联合应用对人食管癌Eca-109细胞逆转化作用的研究
- 目的探讨8-Br-cAMP与槲皮素联合用药对人食管癌Eca-109细胞逆转化的作用.方法将培养的Eca-109细胞随机分为四组:①8-Br-cAMP组(Br):加终浓度为2×10-5-mol/L8-Br-cAl4P:②槲...
- 宫璀璀王文丽吴景兰刘影
- 关键词：PCNA抑癌基因槲皮素ECA-109细胞
- 文献传递
