广州医学院药物研究中心 作品数:61 被引量:253 H指数:8 相关作者: 袁牧 余清声 朱柳 刘新艳 申青 更多>> 相关机构: 中国科学技术大学生命科学学院 广东轻工职业技术学院食品与生物工程系 中国科学院南海海洋研究所 更多>> 发文基金: 广州市科技计划项目 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 理学 化学工程 文化科学 更多>>
南海海绵Iotrochota sp.中抗氧化活性成分的研究 被引量:2 2009年 目的研究南海海绵Iotrochota sp.中的抗氧化活性成分。方法以95%乙醇浸提得南海海绵总浸膏,经多步分配得乙醇、正己烷和正丁醇部位。采用DPPH法进行活性示踪、反相柱层析和HPLC法分离,光谱方法进行结构鉴定。结果分离得到的化合物鉴定为purpurone,其清除DPPH自由基的IC50为19μg.m l-1。结论Purpurone为海绵Iotrochota sp.的特征性成分和主要抗氧化活性成分,对Iotrochota属海绵的分类具有重要意义。 季红 刘永宏 袁牧 朱柳 黄碧云关键词:抗氧化 DPPH自由基 青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究 被引量:9 2007年 目的探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕,采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后,取第3~5代成纤维细胞,采用含60、120和240mg/LArt培养液各5ml培养作为实验组,仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察,采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3~5代成纤维细胞,实验组采用30、60和120mg/LArt培养液,对照组仅加入等量的培养液,观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长,免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达;倒置显微镜下观察Art在60~240mg/L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性,细胞出现凋亡征象;透射电镜观察,各实验组出现染色质浓缩,沿着核膜排列,甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较,凋亡细胞比例、处于G0~G1、S、G2~M期细胞数差异均有统计学意义(P〈0.05),实验组均出现典型的凋亡峰,且随药物浓度增加,峰值越大。Art在30~120mg/L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡,细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。 孔恒 余清声 朱柳 袁牧 王肃生 冀航 张志华 梁刚 黄宗海关键词:增生性瘢痕 青蒿琥酯 成纤维细胞 钙离子浓度 中华眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞增殖及其机制探讨 被引量:1 2007年 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)对新生牛肺主动脉血管内皮细胞增殖的抑制作用,并探讨其抑制细胞增殖的胞内机制。方法采用胰酶消化法体外培养新生牛肺主动脉血管内皮细胞,将不同浓度的CCVAF与细胞在高血清、VEGF条件下共孵育,应用MTT法检测细胞增殖,免疫组化方法检测各组c-myc,c-fos,PCNA表达。结果CCVAF终浓度为1.25,2.5,5.0μg/ml,对常规培养的细胞增殖抑制率分别为22%,54%,83%,对VEGF诱导的体外培养的细胞增殖抑制率分别为18%,39%,72%,对高血清诱导的细胞增殖抑制率分别为20%,44%,79%;CCVAF终浓度为2.5μg/ml,c-myc,c-fos及PCNA阳性细胞标记指数比对照组分别降低89.7%,47.1%及88.0%。结论CCVAF可抑制常规培养的、VEGF及高血清诱导的新生牛肺主动脉血管内皮细胞增殖,这种抑制作用呈剂量依赖性;抑制胞内c-myc,c-fos,PCNA的表达可能是其抑制细胞增殖的机制之一。CCVAF抑制血管内皮细胞增殖作用可能在抗血管生成方面具有重要意义。 朱柳 余清声 袁牧 刘新艳 王桂平 楼晓华 腾脉坤关键词:蛇毒 中华眼镜蛇毒 血管内皮细胞 细胞增殖 葛根素固体脂质纳米粒保护长爪沙鼠脑缺血-再灌注损伤的分子机制初探 被引量:4 2010年 目的:探讨葛根素固体脂质纳米粒灌服给药对长爪沙鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及其分子机制,为葛根素固体脂质纳米粒口服新剂型应用提供初步实验依据。方法:将长爪沙鼠随机分成假手术组、脑缺血-再灌注损伤模型组、葛根素固体脂质纳米粒组和葛根素注射液对照组,采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作长爪沙鼠前脑缺血-再灌注损伤模型,应用HE染色及免疫组织化学法观察脑组织形态学变化及Bcl-2、Caspase-3和HSP70的蛋白表达变化。结果:脑缺血-再灌注24 h后,与模型组比较,葛根素固体脂质纳米粒组脑组织病理变化改善,在海马区和皮质区Bcl-2及HSP70阳性细胞表达显著升高(P<0.01),而Caspase-3阳性细胞表达比模型组显著降低(P<0.01);葛根素注射剂对照组脑保护作用结果及机制与葛根素固体脂质纳米粒组结果一致。结论:葛根素固体脂质纳米粒口服给药可通过诱导HSP70及Bcl-2蛋白水平高表达并同时降低Caspase-3蛋白表达对脑缺血-再灌注损伤起保护作用。 朱柳 罗承锋 袁牧 陈敏生 季红关键词:葛根素 固体脂质纳米粒 脑缺血-再灌注损伤 CASPASE-3 HSP70 手性高效液相色谱法测定萘哌地尔对映异构体(英文) 被引量:2 2009年 建立一种手性高效液相色谱法分离与分析萘哌地尔对映异构体。采用AD-H(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱, 检测波长为283nm流动相为正己烷-异丙醇-三乙胺(85:15:0.1,v/v/v)流速1.0 mL/min。萘哌地尔对映体得到良好分离,其R体和S体线性范围分别为0.78~50 μg/mL(r=0.9999)和0.84~54μg/mL(r=0.9998),相应的日内及日间精密度不高于0.5% 及0.7%。本文报道了萘哌地尔对映异构体的分离及测定方法,同时也可用于萘哌地尔合成对映体的纯度分析。 孙银香 黄碧云 袁牧 石京山关键词:对映体 萘哌地尔 法呢基砜的简便合成 2009年 目的:研究卤化物介导的法呢基砜的简便合成方法。方法:以THF为溶剂,先用卤化试剂NBS和Ph3P对法呢醇进行活化,活性中间体在NaI催化下与苯亚磺酸钠于室温反应6h得法呢基砜。结果:在优化条件下合成香叶基砜的收率高于90%。结论:该法反应条件温和、操作简便,简化了从法呢醇制备法呢基砜的步骤。 季红 袁牧 朱柳柱前衍生化RP-HPLC分离巴氯芬的对映异构体 被引量:7 2008年 目的建立巴氯芬对映异构体的拆分方法。方法采用柱前衍生化RP-HPLC法,以2,3,4,6-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯为柱前手性衍生化试剂,考察衍生化时间、试剂用量、流动相组成及其pH等因素对手性分离的影响。结果采用ZORBAX-C8(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,在流动相为甲醇-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾溶液(40:60,pH6.0)、紫外检测波长为254 nm、流速为1.5 m.lmin-1、柱温35℃的色谱条件下,巴氯芬对映体衍生物获得了基线分离,分离度为1.93,并确认了R(+)-衍生物的色谱峰。结论所建方法简便、快速,为巴氯芬的光学异构体的测定提供了参考。 张春艳 袁牧 黄碧云 季红 朱柳关键词:巴氯芬 反相高效液相色谱法 对映体拆分 卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究 被引量:6 2005年 目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析.结果检测的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32~750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100 μg·L-1)、中(300 μg·L-1)、高(1 000 μg·L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%~3%之内,板间变异系数在8%以内.结论 特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点.该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据. 王桂平 余清声 刘新艳 朱柳 覃媛 黄劭关键词:眼镜王蛇毒 IGG类抗体 中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡的机制 2011年 目的通过检测内皮细胞Bcl-2和caspase3的表达水平,探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的可能机制。方法采用血管内消化法原代培养牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)。实验分为不同浓度的CCVAF组(1.25,2.5,5,10 mg/L)和对照组(等体积的培养基)。采用流式细胞仪检测CCVAF作用24 h后各组BAVEC的Bcl-2表达水平;采用比色法测定caspase3的活性。结果经CCVAF作用后,流式细胞仪测定各组均未见到有阳性峰出现在M1,抗凋亡蛋白Bcl-2表达并没有受到药物的影响。而与对照组相比,capase3活性在1.25mg/L组即出现升高,此后随浓度的增加而升高,呈剂量依赖性(r=0.929,P<0.05)。各浓度组加入capase3活性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)后,capase3活性明显降低,但仍然高于对照组(P<0.05)。结论 CCVAF不影响内皮细胞Bcl-2的表达,而能够上调capase3的活性。其可能不经Bcl-2影响的线粒体所在的凋亡通路调节细胞的凋亡。 刘新艳 余清声 王桂平 余红娥 朱柳 袁牧 楼晓华 腾脉坤关键词:眼镜蛇毒 内皮细胞 BCL-2 凋亡 血管生成 中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡 被引量:3 2008年 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的作用。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pulm onalis vascular endothelialcells,BAVEC)凋亡形态学、DNA、细胞周期以及凋亡指数的影响。结果经AO染色、流式细胞仪分析均证实CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡。荧光显微镜下观察到CCVAF各浓度(0.15625、0.3125、0.625、1.25μmol.L-1)组处理的内皮细胞,核染色质固缩或断裂成片段状,染色不均匀,出现凋亡小体,凋亡细胞的比例随浓度升高而增加,0.625μmol.L-1组视野内凋亡细胞最多;流式细胞仪分析结果表明CCVAF在浓度低于0.625μmol.L-1,细胞生长被阻滞在S期,1.25μmol.L-1时则被阻滞在G0/G1期,且细胞凋亡率随浓度升高而逐渐增加。结论CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡,通过此途径抑制内皮细胞的生长增殖,这可能是其对抗血管生成的机制。 刘新艳 余清声 余红娥 朱柳 王桂平 袁牧 楼晓华 腾脉坤关键词:眼镜蛇毒 内皮细胞 细胞凋亡 血管生成 肿瘤