广州医学院实验医学研究中心
- 作品数：153 被引量：325H指数：9
- 相关作者：彭燕陈耀勇吕景礼张金栋郑国兵更多>>
- 相关机构：广州医学院第一附属医院第一临床学院广州呼吸疾病研究所广州医学院第一附属医院第一临床学院中国科学院广州地球化学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程电子电信更多>>
- mtHSP70/HSV-TK双基因真核共表达质粒的构建
- 2011年
- 目的构建结核杆菌热休克蛋白70(mycobacterium tuberculosis heat-shock proteins 70,mtHSP70)和自杀基因单纯疱疹病毒-胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidinekinase,HSV-TK)双基因真核共表达质粒pCMV-mtHSP70-IRES-TK。方法登录Genbank查询HSV-TK和mtHSP70基因mRNA序列,应用引物设计软件DNA club分别设计扩增HSV-TK和mtHSP70基因全长cDNA的特异引物。以pcDNA3-TK质粒或mtHSP70质粒DNA为模板,分别采用各自的引物,用prime STAR HS DNA Polymerase进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),获得HSV-TK和mtHSP70基因cDNA片断,连接到T载体pMD18-T上,转化大肠杆菌TG1后用HSV-TK和mtHSP70基因的特异引物进行菌落PCR,确定含有阳性mtHSP70或HSV-TK重组质粒并将阳性pMD18T-TK重组质粒和pMD18T-mtHSP70重组质粒进行上、下游测序,测序结果与基因序列进行同源比较。选定正确的质粒用于HSV-TK和mtHSP70基因的亚克隆,构建质粒PCMV-mtHSP70-IRES-TK,所得阳性克隆摇菌后少量提取质粒,分别用NotⅠ单酶切及EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切进行酶切鉴定。结果构建的pCMV-mtHSP70-IRES-TK质粒分别用NotⅠ单酶切及EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切进行酶切鉴定,酶切产物电泳见特异酶切图谱,确定为重组质粒pCMV-mtHSP70-IRES-TK。结论本实验为后续研究mtHSP70/HSV-TK双基因的协同抗肿瘤作用奠定了实验基础。
- 曾曙光刘启才王素文徐平平章锦才张积仁
- 关键词：真核表达免疫治疗肿瘤
- 脑梗塞恢复期患者进行健身球运动的经颅多普勒观察
- 1998年
- 目的：探讨健身球运动对脑梗塞恢复期神经功能的恢复作用。方法；应用经颅多普勒（TCD）监测30例脑梗塞恢复期患者用患侧和健侧上肢及30例正常对照组分别进行2分钟的健身球运动。结果：对侧大脑中动脉（MCA）平均血流速度（Vm）增加分别为10．4±5．1％；9．7±2．7％；11．3±4．9％。患侧上肢运动时，同侧MCA的Vm增加10．5±4.6％，分别与健侧上肢（1．7±3．7％）及正常对照组（1．8±4．5％）比较，P＜0．01。结论：脑梗塞恢复期用患侧上肢进行健身球运动，双侧MCA的Vm增加，有助于神经功能恢复，也证实了TCD可作为评价脑血流量改变的有效手段。
- 崔一山柳息洪
- 关键词：经颅多普勒脑梗塞平均血流速度健身球运动
- 香烟烟雾暴露对大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达的影响
- 2012年
- 目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达的影响。方法20只雌性SD大鼠，按随机数字表分为对照组和模型组，每组10只。模型组大鼠被动吸入香烟烟雾，每天2次，每次45min；对照组大鼠不接触香烟烟雾。100d后处死动物，光镜下观察肺组织的病理形态学改变，免疫组化法检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Wnt3a和β-catenin蛋白表达，并测定2组大鼠支气管平滑肌厚度。结果模型组大鼠肺组织呈现慢性炎性反应和肺气肿样改变，小气道壁及平滑肌层增厚明显。α-SMA主要表达于气道和血管的平滑肌层。模型组支气管平滑肌厚度高于对照组[（3．06±0．62）μm比（1．86±0．43）μm，P〈0．05]。Wnt3a和β-catenin主要表达于支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞。模型组与对照组支气管上皮细胞Wnt3a蛋白表达分别为74．54±4．14、89．24±3．02；肺泡上皮细胞Wnt3a蛋白表达分别为91．97±2．50、110．46±3．85，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。模型组与对照组支气管上皮细胞胞质β-catenin蛋白表达分别为86．97±4．87、103．18±3．77；支气管上皮细胞胞核β-catenin蛋白表达分别为95．75±3．91、116．12±5．76；肺泡上皮细胞胞质β-catenin蛋白表达分别为106．24±4．57、128．81±3．96；肺泡上皮细胞胞核β—catenin蛋白表达分别为125．44±4．89、152．90±4．10，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论香烟烟雾可诱导大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达匕调。
- 邹威凤胡国平李冰冉丕鑫
- 关键词：慢性阻塞性WNT蛋白质类气道重构
- PI3K/AKT抑制剂联合放射对CNE-1细胞Ku70、Ku80表达的影响
- 2012年
- 目的:分析体外研究磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号转导通路抑制剂(LY294002)联合放射对鼻咽癌细胞CNE-1Ku70、Ku80mRNA表达的影响,探讨PI3K/AKT抑制剂影响放射敏感性的机制。方法:体外培养人鼻咽癌细胞CNE-1,取指数生长期细胞分为四个实验组:对照组(A)、单纯放射组(B)、单纯药物组(C)、加药联合放射组(D);RT-PCR检测各组Ku70、Ku80mRNA的表达水平。结果:RT-PCR结果显示,放射后Ku70mRNA的表达增高,而抑制剂LY294002单纯作用CNE-1细胞后Ku70mRNA的表达水平无改变,但联合放疗后,可以降低放射后的Ku70mRNA的表达水平(P<0.05);本实验中Ku80mRNA的表达水平在各实验组中未观察到明显改变。结论:LY294002联合放疗可抑制Ku70表达,通过减少CNE-1细胞DNA损伤后的再修复影响放射敏感性。
- 翁成荫刘国龙关明媚彭燕李宝秀毛海波
- 关键词：鼻咽癌PI3K/AKT抑制剂
- TCD对脑梗死恢复期患者进行运动的观察
- 脑梗死患者神经功能恢复的机理非常复杂。因此,对其机理的基础研究日趋深入, 本文应用经颅多普勒(TCD)观察脑梗死恢复期患者进行健身球运动的脑血流动力学改变,探讨健身球运动对脑梗死恢复期神经功能的恢复作用及其机理。
- 崔一山柳息洪
- 文献传递
- 尾加压素Ⅱ促兔肺动脉平滑肌细胞增殖及机理探讨被引量：10
- 2004年
- 目的探讨尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[3H]-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂,观察对U-Ⅱ效应的影响。结果U-Ⅱ(10-9mol/L-10-7mol/L)浓度依赖地促进PASMCs的A值增加及[3H]-TdR掺入,以10-7mol/LU-Ⅱ的作用最明显,A值和[3H]-TdR掺入量分别较对照组高429%和685%(P<005)。10-10mol/LU-Ⅱ对PASMCs增殖无作用。尼卡地平、W7、H7、PD98059在一定浓度范围内(10-7mol/L-10-5mol/L)均可以浓度依赖地抑制U-Ⅱ诱导的PASMCs的A值增加及[3H]-TdR掺入增加。在浓度为10-5mol/L时,其抑制作用最明显,A值的抑制率分别为423%、196%、232%和105%(P<005),[3H]-TdR掺入量的抑制率分别为466%、98%、217%和147%(P<005)。结论U-Ⅱ具有较强的促PASMCs增殖的作用,其诱导PASMCs增殖是通过Ca2+、CaM、PKC、MAPK来介导的。
- 彭公永何志义刘启才李冰钟南山冉丕鑫
- 关键词：肺动脉血管
- 双重实时荧光定量PCR法鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌
- 2007年
- 目的建立一种快速、灵敏、特异的鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌的双重实时荧光定量PCR方法。方法以核糖体基因内转录间隔区Ⅱ（ITSⅡ）为靶目标，设计并合成分别针对克柔念珠菌、光滑念珠菌的种特异引物和探针。建立双重实时荧光定量PCR反应体系，并用该体系对呼吸道相关致病菌进行检测。鉴定结果与临床常规鉴定方法对照，评价其敏感度、特异度及重复性。结果通过对100例样品的检测，结果显示该双重实时荧光定量PCR法检测标本的鉴定结果与常规鉴定方法的结果对照，特异度为100％，敏感度为100％；最小能检测到10个拷贝数的重组质粒；批内重复实验和批间重复实验结果均与常规鉴定方法结果相符。结论双重荧光定量PCR法鉴定克柔念珠菌和光滑念珠菌，特异度和敏感度高，重复性好，且快速、简便，该方法将有助于念珠菌病的早期诊断和针对性治疗。
- 杨淳黄红川李冰刘启才彭燕袁锦屏杨灵苏丹红邱贵霞杨其霖黎毅敏
- 关键词：克柔念珠菌念珠菌
- 大蒜素对大鼠肺泡上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响被引量：5
- 2006年
- 目的观察大鼠肺泡上皮细胞(CCL149细胞系)谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)等表达变化,了解大蒜素对CCL149细胞抗氧化能力的影响。方法在以四甲基偶氮唑盐(MTT)法确定大蒜素适当作用浓度的基础上,用不同浓度大蒜素(0、0.1、1.0、5.0μg/ml)作用CCL149不同时间(6、12、24、48h),用分光光度法检测细胞内GSH、MDA的变化;用Westernblot法检测细胞内γGCS蛋白的表达,分析不同处理剂量、不同处理时间大蒜素对细胞内GSH、MDA及γGCS的影响。结果(1)大蒜素浓度≤5μg/ml不影响细胞活力。(2)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在处理6h后细胞内GSH含量[6h组GSH含量分别为(16.45±0.69)、(16.81±0.79)、(17.80±1.10)mg/g蛋白]较对照组[(13.38±1.16)mg/g蛋白]显著增加(t=3.92～4.78,P均<0.05),MDA含量[(1.07±0.02)、(1.02±0.06)、(1.00±0.05)nmol/mg蛋白]较对照组[(1.23±0.05)nmol/mg蛋白]下降(t=5.75～6.34,P均<0.05)。细胞内GSH水平升高至24h达顶峰,48h有所下降,仍较对照组高,相同时间点不同大蒜素浓度组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(3)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在刺激6、12、24h细胞内γGCS蛋白表达(24h为0.693±0.027、0.646±0.081、0.667±0.077)较对照组(0.531±0.007)显著增强(t=2.82～9.92,P<0.05),各观察指标未呈现剂量依赖性。结论大蒜素能增强大鼠肺泡上皮细胞的抗氧化作用,可能与其促进γGCS的表达有关。
- 熊丽红于亮李冰冉丕鑫
- 关键词：谷胱甘肽丙二醛大蒜素大鼠肺泡上皮细胞
- 香烟烟雾对人支气管上皮细胞氧化应激作用研究被引量：7
- 2010年
- 目的观察香烟形成的可吸入并沉积在呼吸道的香烟烟雾是否对人支气管上皮细胞造成的氧化应激。方法用FA-1型多级撞击式空气采样器对形成的烟雾进行采样,收集到6种大小不同的香烟烟雾颗粒,将采得的不同大小的香烟烟雾颗粒分别对人支气管上皮细胞(16HBE)进行刺激。6h后用荧光探针检测16HBE细胞中的活性氧。结果与未加香烟烟雾颗粒刺激对照组比较,香烟烟雾颗粒明显造成人支气管上皮细胞中活性氧增加。不同大小香烟烟雾颗粒中,第四级(2.1～3.3μm)的香烟烟雾颗粒造成的氧化应激最明显。第六级(0.65～1.1μm)大小的颗粒能直接对人支气管上皮细胞造成损伤。结论可吸入并沉积在呼吸道中的香烟烟雾能造成呼吸道上皮细胞的氧化损伤。也能对呼吸道上皮细胞造成直接损伤。
- 周问渠李冰洪玮
- 关键词：氧化应激
- F10蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：11
- 2007年
- 目的:表达F10蛋白,并制备兔抗F10多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增F10基因片段,经BamH I和EcoR I酶切后连接入pET-GST原核表达载体,构建的pET-GST/F10融合重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯化。表达产物用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。以纯化的F10蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗F10的多克隆抗体,并以ELISA法检测抗体效价。结果:经酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的F10读码框。SDS-PAGE电泳分析显示pET-GST/F10诱导后表达一相对分子质量(Mr)约为61 000的融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后的纯度达90%以上,Western blot证实该蛋白是GST/F10的融合蛋白。将纯化的GST/F10融合蛋白免疫家兔,得到的兔抗F10抗体效价达1∶20 000。结论:成功构建了人F10基因原核表达载体,并获得了高纯度的F10重组蛋白及兔抗F10抗体,为下一步研究F10基因功能奠定了实验基础。
- 付欣邹东霆周问渠邢福祺李冰
- 关键词：原核表达抗体
