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泸州医学院基础医学院医学分子生物学实验室: 作品数：134 被引量：301H指数：9; 相关作者：谢华福李昕冯宁崔维佳陈熔更多>>; 相关机构：四川大学华西基础医学与法医学院四川农业大学小麦研究所四川农业大学玉米研究所教育部作物基因资源与遗传改良重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅科学研究项目四川省教育厅资助科研项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>

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卵巢癌组织蛋白双向电泳分析技术的建立被引量：2: 2005年; 目的初步建立卵巢癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性。方法提取卵巢癌肿瘤组织中蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,对关键环节如样品处理、上样量分析和水化等进行一系列优化。进一步采用垂直SDS-PAGE进行第二相分离,银染显色、图像分析或软件分析电泳图谱。结果通过实验条件的反复筛选获得了较为满意的卵巢癌双向凝胶电泳图谱。结论本文初步建立了卵巢癌蛋白质组双向电泳分析方法,具有较好的分辨率和重复性,为进一步研究卵巢癌的差异表达及特异性分子标志物的筛选奠定了基础。; 甘淋李娟段春燕林海蕤何涛; 关键词：双向电泳卵巢癌双向电泳分析分析技术组织蛋白双向凝胶电泳技术固相PH梯度

流行性乙型脑炎病毒E蛋白基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：2: 2008年; 目的;获得JEVE蛋白基因,构建重组表达载体并在E.coli中高效表达。方法:参照GeneBank中的日本乙型脑炎病毒SA14-14株序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因全长,克隆至PUCm-T载体,经测序证实后克隆至原核表达载体pET32a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了JEVE蛋白基因全长1500bp,成功构建了重组质粒pET-32a/JEVE,SDS-PAGE分析显示目的蛋白主要以包涵体的形式在大肠杆菌中获得表达,表达量占总菌体蛋白的35%。结论:在大肠杆菌中成功表达了JEVE蛋白,为ELISA早期诊断试剂盒的研制和E蛋白基因结构与功能的分析奠定了基础。; 王丽李洪张志霞刘晓燕谢华福宋杰梅志强; 关键词：流行性乙型脑炎病毒基因克隆

肝细胞简易分离、培养和鉴定方法初探: 2004年; 长期以来,Guguen等[1]的两步胶原酶灌注法分离获得肝细胞的方法,几乎成了肝细胞分离的经典方法;在此基础上又发展了多种不同的培养方法,如在培养瓶内加纤连蛋白(febronectin)以促进肝细胞附壁[2],添加生长因子于培养基促其生长等.但上述方法步骤繁琐,成本较高,且两步胶原酶灌注法主用于大鼠肝细胞的分离,不适于新生鼠肝细胞的分离,甚至分离成年小鼠肝细胞,都因为血管的纤细,在实际应用中也很困难.; 谢华福刘晓燕何涛余鸿刘广益; 关键词：肝细胞细胞分离细胞培养细胞鉴定胶原酶

应用蛋白质组分析法初步探讨胆囊收缩素在皮质神经元中的信号转导途径: 2006年; 目的:通过应用蛋白质组学的方法与技术,对八肽胆囊收缩素(octapeptitecholecystokinin,CCK8)作用于乳小鼠皮质神经元后蛋白质磷酸化状态进行分析,为初步探讨胆囊收缩素在皮质神经元中的信号转导途径提供依据。方法:培养乳小鼠皮质神经元,掺入32P-NaH2PO4(2.03×105Bq/ml)2h,实验组及对照组分别加入CCK8和无磷培养基进行培养,收集细胞,提取蛋白,蛋白含量测定。双向电泳分离蛋白,放射自显影获得磷酸化蛋白质的电泳图谱。结果:①对蛋白质组分析法中各个环节实行了筛选及优化,得到比较清晰的放射自显影图谱。②由放射自显影图谱可见,与CCK8信号转导相关的磷酸化蛋白质大约有46个,包括了多种蛋白激酶、细胞膜受体、胞内信号分子、转录因子等。结论:蛋白质组学的方法与技术可以行之有效的应用于信号转导途径中蛋白质磷酸化状态的分析。根据神经元蛋白质磷酸化状态分析的结果,可推测CCK8在皮质神经元的信号转导途径可能包括肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径等。; 李娟王丽甘淋刘晓燕谢华福何涛; 关键词：胆囊收缩素信号转导磷酸化蛋白质

小鼠肝癌细胞H22膜蛋白组的双向电泳被引量：2: 2009年; 目的运用双向电泳及生物信息学技术，对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的膜垡白进行比较和鉴定，以期为探索膜蛋白在肝癌发生、发展及侵袭转移过程中的作用提供实验依据。方法运用顺序抽提法结合与双向电泳兼容的膜蛋白抽提试剂盒提取小鼠肝癌细胞H22和小常小鼠肝细胞膜蛋白，用考马斯亮蓝法定量，经舣向凝胶电泳分离、银染，Image Master 2D Platinum软件分析，切取差异蛋白点，采用蔡质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术检测，Aldente软件检索Swiss-Prot数据库进行匹配鉴定。结果与正常小鼠肝纠胞膜蛋白双向电泳图谱对比分析鉴定了8个在小鼠肝癌细胞H22中表达明晁增强的膜赁白，分别为硫酸酯酶修饰因子2，蛋白激酶C和肌酸激酶Ⅱ底物蛋白3，序列装配结构组件50同系物，巨噬细胞清道人受体Ⅰ／Ⅱ，非特异生白C9或f135同系物，紧密结合蛋白ZO-2，3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶，空泡蛋由序列相关蛋白52同系物。结论已鉴定的8个膜蛋白的生理功能涉及细胞代谢、细胞增殖、细胞信号转导、细胞骨架等，且在肝癌细胞H22中表达明显增强，提示小鼠肝癌细胞H22发牛发聪及侵袭转移可能涉及相关膜蛋白生理功能的改变。; 刘秋均李洪严冬梅刘友平杨烨; 关键词：肝细胞电泳膜蛋白质类

血管紧张素Ⅱ对高血压患者肠系膜动脉平滑肌细胞增殖、p22^(phox)及活性氧的影响被引量：1: 2010年; 目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对正常血压和高血压患者的肠系膜动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞内NADPH氧化酶-活性氧信号传导通路的影响。方法选取开腹手术正常血压和高血压患者肠系膜动脉培养的二至四代人VSMC作为标本,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分别测定细胞增殖率、细胞内活性氧及p22phox蛋白mRNA的表达。结果①与空白对照组比较,孵育组的细胞增殖率、细胞内活性氧物质生成量、细胞内p22phoxmRNA的表达均明显增高(均P<0.01)。②与正常血压组比较,给予AngⅡ刺激后,高血压患者的肠系膜动脉VSMC增殖率和细胞内p22phoxmRNA的表达量均明显增高(均P<0.01)。结论AngⅡ对高血压患者肠系膜动脉VSMC促细胞增殖作用较正常血压者更强。; 罗廷福李家富何涛冯健龚武田; 关键词：NADPH氧化酶活性氧平滑肌细胞增殖

川产道地药材三叶黄连HPLC指纹图谱研究被引量：2: 2012年; [目的]建立川产道地药材三叶黄连的指纹图谱检测标准。[方法]以盐酸小檗碱为参照物,采用依利特SinoChrom ODS-BP(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-浓度0.1%乙酸和10 mmol乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为345nm。[结果]药材有14个共有峰,共有峰的参数符合"中药注射剂指纹图谱技术要求"的有关规定。[结论]该方法准确、重复性好,建立的指纹图谱检测标准,可作为川产道地药材三叶黄连质量评价与品种鉴别的重要依据之一。; 李春红何兵梅志强田吉; 关键词：HPLC 指纹图谱

槲皮素及其衍生物对中性粒细胞功能的影响被引量：4: 2005年; 李昕刘佳佳; 关键词：中性粒细胞功能槲皮素黄酮类化合物衍生物

PBL教学法在医学分子生物学教学中的应用被引量：2: 2012年; PBL教学法是一种近年来引入我国的一种全新教学模式,它可以提高学生的自学能力和解决问题的能力。本文作者总结了在《医学分子生物学》理论课教学中采用PBL教学模式的实践经验,证明了PBL教学方法对于提高学生综合思考能力很有帮助,激发了学生学习的积极性、主动性和创造性,同时也显示学生对于PBL教学模式有很高的热情,通过讨论合作,提高了学生的团队合作精神。; 梅志强曾永秋龚舒; 关键词：PBL 医学分子生物学

人FHIT基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立: 2010年; 目的:建立检测人脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因的荧光定量RT-PCR方法。方法:根据GenBank中人FHIT基因序列,在保守区设计合成一对特异引物,将PCR扩增得到的FHIT基因克隆至PMD18-T载体上,构建的重组质粒标准品倍比稀释后运用SYBR Green I染料法绘制标准曲线,并进行融解曲线分析。结果:FHIT基因的标准品稀释度在1×107～1×103copies/μl范围内具有良好的线性关系,Ct值线性范围为14.28～28.36,相关系数为0.998,融解曲线分析表明,产物为特异的单峰,Tm为92.3±0.1℃。结论:建立了人FHIT基因实时荧光定量RT-PCR方法,为在mRNA水平对人FHIT的定量分析奠定了基础。; 王丽陈晞崔维佳段承刚刘晓燕何涛; 关键词：SYBR

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