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潍坊医学院口腔医学院口腔医学研究所: 作品数：25 被引量：26H指数：3; 相关作者：曹雪梅袁杰魏亚红李江曲正更多>>; 相关机构：滨州医学院口腔医学院徐州医学院口腔医学院山东大学口腔医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省卫生厅科研基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究被引量：1: 2011年; 目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用。方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成c-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,re-al time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响。结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;②成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降。结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达。; 孙岩张娟娟刘晓影何永云梁广智李武修高玉光; 关键词：原癌基因小RNA干扰

釉成熟蛋白Amelotin抗体的制备和初步鉴定被引量：7: 2009年; 目的:表达并纯化小鼠釉成熟蛋白(Amelotin),制备多克隆抗体,并进行初步鉴定。方法:RT-PCR获得Amelo-tin成熟肽片段,构建pET32a-Amelotin,IPTG诱导表达Amelo-tin,纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗体滴度。Western blot和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果:成功构建了Amelotin重组表达载体pET32a-Amelotin,表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,得到的多克隆抗体ELISA显示抗体效价可以达到1∶12800。Western blot分析表明该抗体能特异结合Amelotin,免疫组化分析表明自制的抗体能特异的与Amelotin相互作用。结论:以纯化的Amelo-tin为免疫原,成功地制备了效价及特异性较高的兔抗Amelo-tin抗体,为进一步建立简便的Amelotin检测方法及研究Amelotin生物学功能奠定了良好的基础。; 孙岩张娟娟韩婷婷李东亮曹雪梅李武修高玉光; 关键词：原核表达多克隆抗体

FGF2对成骨细胞矿化及矿化基因ENPP1，ANK和TNAP表达的影响: 2012年; 目的研究碱性成纤维细胞生长因子（FGF2）对分化不同阶段的成骨细胞（MC3T3．E1）矿化基因ENPP1，ANK和TNAP表达的影响，从细胞和分子水平上探讨FGF2对成骨细胞矿化的机制。方法构建不同分化阶段的MC3T3-E1细胞，诱导前为未分化阶段，矿化诱导后为分化阶段。50μg／LFGF2分别作用于未分化和分化阶段的MC313-E1细胞，测定细胞内碱性磷酸酶表达情况，用茜素红染色法观察MC3T3-E1细胞矿化结节的变化，实时荧光定量RT—PCR检测细胞矿化基因ENPP1，ANK和TNAP表达的差异并进行统计学分析。结果茜素红染色显示FGF2抑制MC3T3-E1细胞的矿化。FGF2作用于未分化的MC3T3-E1细胞，ENPPl，ANK基因表达明显上调，TNAP基因表达明显下调；而FGF2作用于分化的MC3T3-E1细胞后基因表达变化不明显、结论体外细胞研究显示，FGF2可能是通过调节焦磷酸盐加工因子ENPPI，ANK，TNAP基因表达的变化来抑制MC3T3-E1细胞的矿化过程．; 李静刘金盼杨世茂文玉珍王明国; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子成骨细胞

骨涎蛋白、骨桥蛋白在小鼠骨组织和牙胚组织发育中的表达被引量：3: 2009年; 目的:探讨骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在小鼠骨组织和牙胚组织发育过程中的分布特点及两者在骨组织形成和牙矿化过程中的作用。方法:取E16d胎鼠及出生后第10、30天的BALB/c小鼠共9只,拉颈处死,分离解剖下颌骨及其他骨组织,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜,常规石蜡包埋,近、远中向5μm连续切片,采用免疫组化法检测E16d胎鼠不同骨组织及10d、30d小鼠牙胚组织中BSP、OPN的表达及分布情况。结果:BSP、OPN在牙胚及骨组织发育中的分布模式存在差异。BSP在已经矿化成熟的矿化组织基质中呈阳性表达,而OPN主要在矿化的前沿及矿化活性强的矿化组织中强阳性表达。结论:BSP、OPN参与骨组织的发育和牙胚组织的矿化成熟,并在小鼠牙及骨组织的形成和矿化中具有重要作用。; 郑纪伟高玉光胡温庭李武修; 关键词：骨涎蛋白骨桥蛋白牙胚矿化

置管引流冲洗术治疗颌骨巨大囊性病变的应用与研究: 2010年; 目的探讨置管引流冲洗术治疗颌骨巨大囊性病变的治疗效果。方法病例选自课题组成员医院口腔科就诊的临床表现和影像学表现符合颌骨巨大囊性痛变患者104例。在临床上随机分为实验组（置管引流冲洗术）和对照组（常规手术）。结果比较两组术后两年的疗效，P〈0．05为差异有显著性。结论置管引流冲洗术手术简单，可在局麻下完成，创伤小，既根除了病变，修复了面部的膨隆畸形，又最大限度地保存颌骨的连续性，避免了因切除过多的组织给患者带来的巨大痛苦，患者容易接受，尤其是风险低，经济性好，术后复发率低，较传统手术有明显优越性。; 郝建忠李德仁付显俊孙丽美高玉光; 关键词：颌骨巨大囊性病变

人牙釉质蛋白Amelotin,Ameloblastin及Enamelin基因启动子的初步研究被引量：1: 2009年; 目的分析人釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)、成釉蛋白(Ameloblastin,AMBN)与釉蛋白(Enamelin,ENAM)基因上游启动子序列,构建不同长度的基因上游启动子报告基因载体,为进一步判断启动子序列的转录调控区奠定基础。方法利用软件分析基因启动子序列,以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中。结果成功地获得了不同长度的Amelotin,Ameloblastin及Enamelin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功。结论成功构建了不同长度启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,为进一步研究牙釉质蛋白基因启动子的转录活性及转录调控特点奠定基础。; 刘晓影高志芹韩婷婷官秀梅高玉光; 关键词：AMELOBLASTIN ENAMELIN

人牙成釉细胞相关蛋白启动子的克隆和转录活性分析被引量：1: 2010年; 目的:构建人牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-asssociated protein,ODAM)基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,比较不同的启动子片段在成釉细胞、Hela细胞中的活性,为进一步判定上游启动子的转录调控区奠定基础。方法:以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果:成功地获得了不同长度的ODAM基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在不同的细胞中活性不同,-333～-195与-195～-96区域为特异的转录调控作用区。结论:初步确定了ODAM基因启动子的转录活性区,为进一步研究该基因转录调控特点奠定基础。; 韩婷婷刘晓影郝建忠高玉光; 关键词：启动子成釉细胞

转录因子JunB和JunD调控成釉细胞MMP-20基因转录活性的研究: 2013年; 目的通过研究转录因子JunB,JunD对成釉细胞中MMP-20基因表达的调控作用,从而进一步明确Jun家族在牙釉质形成中的影响。方法首先构建JunB和JunD真核表达载体重组质粒并瞬时转染重组质粒进入成釉细胞中;利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同浓度JunB,JunD对MMP-20启动子特征性序列区域的转录活性的影响;确定有明显作用的启动子区段,利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统分析JunB对MMP-20基因启动子转录活性的影响;最后再观察JunB与JunD共转染时对MMP-20基因活性表达的改变。结果成功构建JunB,JunD真核重组表达载体,顺利将重组质粒转染入成釉细胞;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示JunB对MMP20启动子活性表达上调,而JunD对MMP20启动子活性表达无作用;突变MMP20启动子AP1的两个结合位点后,MMP20启动子的转录活性下降,同时JunB也失去了上调MMP20启动子转录活性的作用。最后将JunB和JunD共转染时,在JunB存在的前提下,随着JunD转染量的增加,小鼠成釉细胞MMP20启动子转录活性明显减弱。结论该研究表明转录因子JunB与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP20的表达水平;而JunD对MMP20启动子特征性序列无明显作用。所以为进一步研究Jun家族成员在釉质发育过程中的作用建立了重要的生物学基础。; 郝佳张新新袁杰张娟娟刘晓影孙岩高玉光; 关键词：JUND 基因定点突变

SPDEF调控小鼠成釉细胞MMP-20基因表达的分子机制研究: 2013年; 目的通过克隆转录因子SPDEF以及其真核表达载体的构建,分析该基因对成釉细胞MMP-20基因表达的影响,为进一步研究转录因子SPDEF在牙釉质形成中发挥的作用奠定基础。方法利用RT-PCR技术从小鼠成釉细胞中获得SPDEF基因,测序正确后克隆至pcDNA3.1/myc-HisA载体中,将重组质粒瞬时转染成釉细胞,并用双荧光素酶报告基因系统检测技术来检测MMP-20启动子区域的转录活性。结果①SPDEF基因经过RT-PCR扩增得到的产物与预期片段978bp相符,将所获得的目的基因与GenBank提供的已知序列(NM:013891.4)完全一致。②重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-SPDEF转染成釉细胞后,用荧光素酶分析系统检测显示MMP-20启动子转录活性升高。结论成功构建了SPDEF真核表达载体,初步研究证明SPDEF可能与MMP-20特征性序列结合从而上调MMP-20的表达。; 纪虹利杜森董超张世龙靖旭高玉光

TGF-β1调控成釉细胞ODAM基因表达的研究被引量：1: 2011年; 目的:探讨TGF-β1对ODAM基因表达的作用。方法:通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对成釉细胞ODAM基因表达的影响;利用c-jun小RNA干扰(siRNA)技术,阻断转录因子c-jun基因表达,观察c-jun基因沉默对TGF-β1诱导ODAM基因表达的影响;利用双荧光素酶基因报告系统研究成釉细胞中TGF-β1对ODAM启动子转录活性的调控作用。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,ODAM基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使c-jun基因沉默,实时定量RT-PCR法研究显示,TGF-β1调控ODAM基因表达的作用减弱。将pGL3-ODAM转染成釉细胞后,用TGF-β1刺激成釉细胞一定时间,ODAM启动子的转录活性增强。c-jun基因沉默抑制了TGF-β1对ODAM启动子的激活作用。结论:在釉质发育过程中,TGF-β1通过转录因子c-jun调控成釉细胞ODAM基因表达。; 郝建忠孙学玲何永云梁广智刘晓影孙岩高玉光

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