深圳华大方舟生物技术有限公司
- 作品数：43 被引量：17H指数：2
- 相关机构：深圳华大基因科技有限公司中国科学院遗传与发育生物学研究所云南农业大学更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目转基因生物新品种培育专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生一般工业技术更多>>
- 一种人工透明带及其制备方法和用途
- 本发明属于发育生物学领域，涉及一种人工透明带及其制备方法和用途。具体地，所述人工透明带为分布有一个或多个空腔的琼脂糖凝胶，所述空腔能够容纳一细胞期的胚胎，并且所述空腔有开口，所述开口能够移植入一细胞期的胚胎。本发明还涉及...
- 林琳杜玉涛刘田宾
- 文献传递
- 利用TALENs和手工克隆技术高效获得GHR基因敲除巴马猪被引量：8
- 2014年
- DNA编辑技术是基因靶向修饰技术的研究热点,已广泛应用于生物医学和农业研究。然而,传统基因打靶技术存在效率低、成本高、工作量大等缺点,其应用受到了极大的限制。文章利用最近发展起来的新型人工核酸酶——转录激活因子样效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALENs)介导的基因组定点修饰技术,通过构建特异识别猪生长激素受体(GHR)基因的TALENs表达载体,共转染巴马胎猪成纤维细胞系,酶切鉴定G418抗性克隆细胞株的基因修饰效率为46.2%,其中2个为双等位基因敲除的克隆细胞株。以双等位基因敲除的克隆细胞株为核供体,利用手工克隆技术制备GHR-KO巴马猪克隆胚,第6 d囊胚率为43.5%,654枚体外发育的囊胚移植6头受体母猪,共获得10头存活的GHR-KO巴马仔猪,其中7头为双等位基因敲除。体重检测结果显示,第20周龄的GHR-KO巴马猪体重仅为对照巴马猪的50%。研究结果表明,TALENs和手工克隆技术能够高效制备出基因敲除大动物。GHR-KO巴马猪的成功制备为研究猪GHR基因生理功能以及人类侏儒症分子机理提供了重要模型,也证明该技术比传统基因打靶和克隆技术具备更简捷、快速、高效,更易于在生物医学和农业基因靶向修饰研究中推广。
- 李飞达李勇刘欢张欢欢刘楚新张兴举窦红伟杨文献杜玉涛
- 关键词：基因敲除
- 利用TALEN技术快速高效敲除猪GHR基因
- 李飞达田凯张欢欢李勇杜玉涛
- 关键词：TALENGHR五指山猪基因敲除
- 可多次交换的无标记定点整合转基因系统及其应用
- 提供了可多次交换的无标记定点整合转基因系统及其应用，其中该转基因系统包括：第一构建体，所述第一构建体为TALEN载体，所述TALEN载体识别并剪切友好位点序列；第二构建体，所述第二构建体包含左同源臂、右同源臂、筛选标记表...
- 张欢欢李勇刘楚新刘欢张兴举李飞达杜玉涛
- 文献传递
- 显微注射制备转基因小鼠的优化被引量：2
- 2015年
- 显微注射法是目前应用最广泛的转基因小鼠制备技术,但其效率较低,提高显微注射法制备转基因小鼠的效率有重要意义。外源DNA浓度、小鼠品系均是影响转基因小鼠制备效率的因素,但目前较多文献采用KM小鼠进行转基因小鼠制备效率的优化,对C57/BL6小鼠研究较少。本实验以C57/BL6小鼠为对象,分别进行2.5 ng/μl、5.0 ng/μl的外源DNA浓度原核注射。结果显示,2.5 ng/μl组的怀孕率、出生率、小鼠阳性率、转基因效率均显著高于5.0 ng/μl组的结果(P<0.05)。结论:通过原核注射方式获得C57/BL6转基因小鼠,注射的外源DNA浓度2.5 ng/μl效果较好。
- 张译捷王智锋陈文彬李杏杨珍珍杜玉涛
- 关键词：外源DNA
- 猪孤雌激活胚胎与手工克隆胚胎共移植对受体分娩率和产仔数的影响
- 张译捷窦红伟徐颖杨珍珍杜玉涛
- 关键词：孤雌激活囊胚共移植
- 转录激活因子样效应因子核酸酶及其应用
- 本发明提供了转录激活因子样效应因子核酸酶及其应用，其中，该转录激活因子样效应因子核酸酶特异性识别生长激素受体基因。该转录激活因子样效应因子核酸酶能够有效用于对非人动物生长激素受体(GHR)基因进行定点敲除，从而能够有效地...
- 李飞达李勇张欢欢田凯刘楚新刘欢张兴举杜玉涛
- 文献传递
- PGM-CSF对手工克隆猪生产效率的影响
- 2015年
- 为了优化猪的手工克隆技术方案,从而提高猪手工克隆效率,通过比较不同浓度(2和10 ng/m L)的猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(PGM-CSF)对孤雌胚胎和克隆胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数的影响,并将PGM-CSF处理过的手工克隆囊胚进行移植,比较对照组和试验组的妊娠率、产仔率及克隆整体效率。结果显示:用10 ng/m L PGM-CSF处理重构胚后,试验组胚胎细胞数统计略高于对照组((47.74±3.88)vs(43.69±3.72)),囊胚率高于对照组((39.10±0.01)%vs(36.27±0.02)%),但差异均不显著(P>0.05);试验组10只受体中有5只怀孕且分娩,而对照组10只受体只有1只怀孕且分娩;试验组出生仔猪存活率略高于对照组(36.36%vs 30.00%),克隆总效率略高于对照组(0.37%vs 0.30%),但没有显著差异(P>0.05)。综上所述,PGM-CSF有利于提高猪手工克隆胚胎整体发育能力,有提高猪手工克隆对受体的利用率的潜在可能性。
- 栾婧窦红伟刘田宾向熙李林徐颖杨文献郑华夏代刚
- 关键词：体细胞核移植
- 手术法克隆猪胚胎移植研究
- 为优化克隆猪胚胎移植技术,利用手术法,开展了26头克隆猪胚胎移植试验.第1批16头受体母猪的胚胎移植试验,分娩率仅为12.5％(2/16).经对手术法深入分析和优化,第2批移植的10头受体母猪,分娩率达到60％(6/10...
- 蒙小云郑华李勇夏代刚窦红伟石伟田家宁
- 关键词：胚胎移植手术法
- 文献传递
- 利用改进的手工克隆技术生产转GFP基因猪克隆胚胎
- <正>通过体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)培育转基因动物新个体是当前被广泛使用的技术之一,但其生产成本高和转基因囊胚形成率低在很大程度上制约了该技术的应用。文章报告对该...
- 张鹏杨珍珍李伟航律波Bolund Lars杜玉涛谭萍萍马润林
- 文献传递
